第二章药物的杂质检查.ppt

第二章第二章 生物药物的杂质检查生物药物的杂质检查药物的纯度要求药物的纯度要求 指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。杂质是指：1.有毒副作用的物质2.本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质3.本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质一、杂质的来源与种类一、杂质的来源与种类（一）杂质的来源（一）杂质的来源1.生产过程中引入（1）原料、反应中间体及副产物（2）试剂、溶剂、催化剂类（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质例：例：阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得+乙酰化不完全乙酰化不完全 水杨酸水杨酸(杂质杂质)制剂过程中可能产生新物质制剂过程中可能产生新物质如：如：制备过程中加热灭菌制备过程中加热灭菌盐酸普鲁卡因注射剂盐酸普鲁卡因注射剂 进一步脱羧转化进一步脱羧转化对氨基苯甲酸对氨基苯甲酸 苯胺苯胺 引起毒性反应引起毒性反应1在药物生产过程中引入杂质的途径为A.原料不纯或部分未反应完全的原料造成B.合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C.需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质2.贮藏过程中产生水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等易发生水解反应的结构：易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等等易发生氧化反应的结构：易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等双键等（二）杂质的种类（二）杂质的种类 药物中的杂质按来源分为 1.一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。2.特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。（三）（三）药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度与化学试剂的纯度药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯。例.临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是A.所含杂质的生理效应不同B.所含有效成分的量不同C.所含杂质的绝对量不同D.化学性质及化学反应速度不同E.所含有效成分的生理效应不同二、杂质的限量检查二、杂质的限量检查指药物中允许杂质存在的最大量，通常用百分之几或百万分之几来表示。砷-10ppm重金属-50ppm杂质量杂质量 杂质限量杂质限量 杂质量杂质量药品合格药品合格药品不合格药品不合格（一）药物的杂质检查法（一）药物的杂质检查法1.对照法限量检查法（LimitTest）特点：不需知道杂质的准确含量灵敏度法灵敏度法对照法对照法 比较法比较法操作操作:平平行行试试验验比比较较两两比比色色管管的的颜颜色色或或浊浊度度,判判断断杂杂质质限限量量是否符合规定是否符合规定.管管2 2（对照管）（对照管）管管1 1（样品管）（样品管）取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液,与一与一定量供试品配成的供试品溶液在相同条件下处理定量供试品配成的供试品溶液在相同条件下处理,比较比较反应结果反应结果,判断供试液中所含杂质限度是否符合规定判断供试液中所含杂质限度是否符合规定.标准对照法标准对照法2.灵敏度法系指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。特点：不需对照品3.比较法与空白比较：含量测定法：测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等。特点：不需对照品（二）杂质限量的计算（二）杂质限量的计算1检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为A.0.20gB.2.0gC0.020gD.1.0gE.0.10g已知：c1g/ml1106g/mlV2mlL0.0001%2检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？A.0.2mlB.0.4mlC2mlD.1mlE.20ml第三节第三节杂质检查的原理杂质检查的原理检查方法：检查方法：一、利用药物和杂质在一、利用药物和杂质在物理物理性质上的差异性质上的差异二、利用药物和杂质在化学性质上的差异二、利用药物和杂质在化学性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异一、利用药物和杂质在物理性质上的差异 （一）臭味及挥发性的差异（一）臭味及挥发性的差异 （二）颜色的差异（二）颜色的差异 （三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 （四）（四）旋光性质的差异旋光性质的差异 （五）（五）对光吸收性质的差异对光吸收性质的差异 （六）（六）吸附或分配性质的差异吸附或分配性质的差异（一）臭味及挥发性的差异（一）臭味及挥发性的差异 药物（特别是挥发性药物）中如存药物（特别是挥发性药物）中如存在具有特殊气味的杂质，可以由气味判在具有特殊气味的杂质，可以由气味判断该杂质的存在。断该杂质的存在。乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、浓过氧乙醇、冰醋酸、苯酚、氟烷、浓过氧化氢化氢如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇如麻醉乙醚异臭检查，控制原料乙醇中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等中引入的杂醇油以及乙醛和过氧化物等杂质。方法为：取供试品杂质。方法为：取供试品10ml，置于瓷，置于瓷蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，蒸发皿中，使自然挥发，挥散完毕后，不得有异臭。不得有异臭。（二）颜色的差异（二）颜色的差异某些药物自身无色，但从生某些药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色。其分解产物有颜色。(维生素维生素C）（三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 有的药物可溶于水、有机溶有的药物可溶于水、有机溶剂或酸、碱中，而其杂质不溶；剂或酸、碱中，而其杂质不溶；反之，杂质可溶而药物不溶。反之，杂质可溶而药物不溶。葡萄糖（中间产物葡萄糖（中间产物-糊精）糊精）溶于热乙醇，糊精不溶溶于热乙醇，糊精不溶（四）旋光性质的差异（四）旋光性质的差异 测定旋光度可以用来区别不同的药物，检查杂质的含量。利用的是供试品与其特殊杂质在比旋度上的差异。举例：维生素举例：维生素C C溶液（溶液（0.10g/ml)0.10g/ml)+20.5+20.5_+21.5本身没有旋光性的药物，杂质有，则可以通过限定药物溶液的旋光度值来控制相应杂质的量 旋光度旋光度：光学活性物质的液体或溶液：光学活性物质的液体或溶液使平面偏振光的振动面旋转的角度。以使平面偏振光的振动面旋转的角度。以“+”表示右旋；以表示右旋；以“-”表示左旋。表示左旋。比旋度比旋度t:偏振光透过长偏振光透过长1dm且且1ml中中含有含有1g旋光物质的溶液，在一定波长与温旋光物质的溶液，在一定波长与温度下测得的旋光度。度下测得的旋光度。=tc l/100中国药典规定使用钠光谱的中国药典规定使用钠光谱的D线线（589.3nm）测定药物在特定溶液中的旋光）测定药物在特定溶液中的旋光度。度。（五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 药物和杂质的结构不同，因而对光药物和杂质的结构不同，因而对光吸收的性质往往有差异。分光光度法的吸收的性质往往有差异。分光光度法的优点：灵敏度高，简便，仪器已较普及，优点：灵敏度高，简便，仪器已较普及，因此在药物的杂质检查中应用日益广泛。因此在药物的杂质检查中应用日益广泛。1.1.紫外分光光度法紫外分光光度法 2.2.原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法 3.3.红外分光光度法红外分光光度法 4.4.荧光分析法荧光分析法1.1.紫外分光光度法紫外分光光度法当杂质在某一波长处有最大吸收，而当杂质在某一波长处有最大吸收，而药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶药物在此无吸收时，可以通过控制供试品溶液在此波长处的吸收度来控制杂质的量。液在此波长处的吸收度来控制杂质的量。举例：规定葡萄糖注射液在举例：规定葡萄糖注射液在284nm波波长处的吸收度不得过长处的吸收度不得过0.32，即可控制其杂质，即可控制其杂质5-羟甲基糠醛的量。羟甲基糠醛的量。头孢噻吩在头孢噻吩在237nm处规定吸收度范围处规定吸收度范围0.65-0.72，测定值偏大则说明未有效除去，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。.例例:肾上腺素中肾上腺酮的检查肾上腺素中肾上腺酮的检查 若药物在紫外区有明显吸收，而杂质吸若药物在紫外区有明显吸收，而杂质吸收很弱或没有吸收，可以根据吸收度大小限收很弱或没有吸收，可以根据吸收度大小限制杂质的量。规定供试品吸收度的上下限幅制杂质的量。规定供试品吸收度的上下限幅度，可在一定程度上控制产品的纯度。度，可在一定程度上控制产品的纯度。头孢噻吩在头孢噻吩在237nm237nm处规定吸收范围处规定吸收范围0.65-0.65-0.720.72，237nm237nm的吸收特征是噻吩乙酰基产生的吸收特征是噻吩乙酰基产生的，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙的，测定值偏大则说明未有效除去噻吩乙酸；测定值偏小则说明产品降解。酸；测定值偏小则说明产品降解。3.3.红外分光光度法红外分光光度法在杂质检查中主要用于药物中在杂质检查中主要用于药物中无无效或低效晶型效或低效晶型的检查。的检查。甲硝咪唑甲硝咪唑C C晶型在晶型在662cm662cm-1-1处有较强处有较强吸收，其无效吸收，其无效A A晶型在晶型在640cm640cm-1-1处有较强处有较强吸收。当供试品中含有吸收。当供试品中含有A A晶型时，在上晶型时，在上述二波数处的吸收度比值将发生改变。述二波数处的吸收度比值将发生改变。R=D1/D2 R=D1/D2（六）吸附或分配性质的差异（六）吸附或分配性质的差异 1.1.薄层色谱法薄层色谱法 2.2.纸色谱法纸色谱法 3.3.高效液相色谱法高效液相色谱法 4.4.气相色谱法气相色谱法简便、快速，灵敏度高简便、快速，灵敏度高1 1、薄层相色谱法（、薄层相色谱法（TLC)TLC)设备简单，操作简便，分离速度快，灵敏度和设备简单，操作简便，分离速度快，灵敏度和分辩率较高分辩率较高）杂质对照品法）杂质对照品法）自身对照法）自身对照法）杂质对照品法与自身对照法联用）杂质对照品法与自身对照法联用）对照药物法）对照药物法 5 5）灵敏度法（不允许有杂质斑点）灵敏度法（不允许有杂质斑点）（1 1）杂质对照品法）杂质对照品法 适用于适用于已知杂质已知杂质并能制备杂质对并能制备杂质对照品的情况。要求供试品与所检杂质照品的情况。要求供试品与所检杂质对显色剂所显的对显色剂所显的颜色颜色应相同，应相同，显色灵显色灵敏度敏度也应相同或相近。也应相同或相近。方法：根据限量，取供试品溶方法：根据限量，取供试品溶液和液和限度量限度量的杂质对照品溶液，分别的杂质对照品溶液，分别点样于同一硅胶薄层板上，展开、定点样于同一硅胶薄层板上，展开、定位、检查，供试品中所含杂质的斑点，位、检查，供试品中所含杂质的斑点，不得超过相应杂质的对照斑点。不得超过相应杂质的对照斑点。（2 2）供试品自身对照法）供试品自身对照法适用于适用于杂质的结构不能确定杂质的结构不能确定，或，或无杂质对照品无杂质对照品的情况。的情况。方法：将供试品溶液按限量要求方法：将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试稀释至一定浓度作为对照溶液，与供试品溶液分别点加于同一薄层板上，展开、品溶液分别点加于同一薄层板上，展开、定位、检查。供试品溶液所显杂质斑点定位、检查。供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液所显示斑点颜色。不得深于对照溶液所显示斑点颜色。（4 4）对照药物法）对照药物法当无适合的杂质对照品，尤其是当无适合的杂质对照品，尤其是供试品显示的杂质斑点颜色与主成分供试品显示的杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异，难以判断限量时，斑点颜色有差异，难以判断限量时，可用与供试品相同的药物作为对照品，可用与供试品相同的药物作为对照品，此对照物中所含待检杂质需符合限量此对照物中所含待检杂质需符合限量要求，且稳定性好。要求，且稳定性好。此外，少数药物还利用试验条件此外，少数药物还利用试验条件下显色剂对杂质的检测限来控制其限下显色剂对杂质的检测限来控制其限量。量。盐酸阿米替林，一定浓度点样于盐酸阿米替林，一定浓度点样于硅胶硅胶G G薄层板上，以氯仿：甲苯展开，薄层板上，以氯仿：甲苯展开，喷甲醛喷甲醛-硫酸显色，紫外灯下检视，除硫酸显色，紫外灯下检视，除主斑点外，不得显其他斑点。主斑点外，不得显其他斑点。2.2.纸色谱法纸色谱法用于极性较大物质的分离、分用于极性较大物质的分离、分析。有时也用于检查放射性药物注析。有时也用于检查放射性药物注射液中的放射化学杂质。射液中的放射化学杂质。方法：类似于方法：类似于薄层色谱法中的薄层色谱法中的供试品自身对照法。供试品自身对照法。3 3、高效液相色谱法、高效液相色谱法 分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，可准分离效能高，专属性强和检测灵敏度高，可准确测量各组分的峰面积确测量各组分的峰面积）内标法）内标法）外标法）外标法）不加校正因子的主成分自身对照法）不加校正因子的主成分自身对照法）加校正因子的主成分自身对照法）加校正因子的主成分自身对照法 ）峰面积归一化法）峰面积归一化法1.内标法：内标法测定供试品中某个杂质内标法：内标法测定供试品中某个杂质或主成分含量。先以杂质对照品测定其校或主成分含量。先以杂质对照品测定其校正因子，然后测定供试品中杂质的含量。正因子，然后测定供试品中杂质的含量。2.外标法：测定供试品中某个杂质或主成外标法：测定供试品中某个杂质或主成分的含量，用于有杂质对照品或杂质对照分的含量，用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。品易制备的情况。3.不加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法将供试溶液稀释成一定浓度，作为对照液。分别取将供试溶液稀释成一定浓度，作为对照液。分别取供试品溶液和对照品溶液进样，将供试品溶液中各供试品溶液和对照品溶液进样，将供试品溶液中各杂质峰面积及其总和，与对照液主成分峰面积比较，杂质峰面积及其总和，与对照液主成分峰面积比较，以控制供试品中杂质的量。以控制供试品中杂质的量。特点：特点：1 1）简单方便，无须对照品。）简单方便，无须对照品。2 2）适用于杂质）适用于杂质与主成分峰面积相差悬殊时的杂质检查与主成分峰面积相差悬殊时的杂质检查 3 3）忽略了）忽略了各杂质与主成分的响应值可能不同。各杂质与主成分的响应值可能不同。4.加校正因子的主成分自身对照法：精密加校正因子的主成分自身对照法：精密称取杂质对照品和待测成分对照品各适量，称取杂质对照品和待测成分对照品各适量，配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记配制测定杂质校正因子的溶液，进样，记录色谱图，计算杂质的校正因子。此校正录色谱图，计算杂质的校正因子。此校正因子可直接载入各品种正文，用于校正杂因子可直接载入各品种正文，用于校正杂质的实测峰面积，准确计算杂质含量。质的实测峰面积，准确计算杂质含量。5.5.峰面积归一化法：测量各杂质峰的面积和色谱峰面积归一化法：测量各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的各色谱峰面积，计算各峰面图上除溶剂峰以外的各色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率，粗略测量供试品中杂质积占总峰面积的百分率，粗略测量供试品中杂质的含量。的含量。特点：特点：1 1）不需对照品，简便易行。不需对照品，简便易行。2 2）记录图记录图谱的时间应为主峰保留时间的整数倍。谱的时间应为主峰保留时间的整数倍。3 3）通常通常只能粗略考察供试品的杂质含量。只能粗略考察供试品的杂质含量。4 4、气相色谱法、气相色谱法）峰面积归一化法）峰面积归一化法）内标法）内标法 3 3）外标法）外标法（二）化学法利用药物和杂质在化学性质上的差异（一）酸碱性的差异（一）酸碱性的差异（二）氧化还原性的差异（二）氧化还原性的差异（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（四）杂质与一定试剂反应产生颜色（四）杂质与一定试剂反应产生颜色（五）杂质与一定试剂反应产生气体（五）杂质与一定试剂反应产生气体（六）药物经有机破坏后检查杂质（六）药物经有机破坏后检查杂质二、利用药物和杂质在化学性质上的差异二、利用药物和杂质在化学性质上的差异（一）酸碱性的差异（一）酸碱性的差异利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴利用杂质的酸、碱性。规定消耗滴定液的体积、规定定液的体积、规定PH值范围、指示剂法值范围、指示剂法（二）氧化还原性的差异（二）氧化还原性的差异 利用药物与杂质之间的氧化还原电位利用药物与杂质之间的氧化还原电位的差异进行检查。的差异进行检查。（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀 （四）杂质与一定试剂反应产生颜色（四）杂质与一定试剂反应产生颜色根据限量要求，规定：一定反应条件根据限量要求，规定：一定反应条件下不得产生某种颜色；供试品在相同条件下不得产生某种颜色；供试品在相同条件下呈现的颜色不得超过杂质对照品相应颜下呈现的颜色不得超过杂质对照品相应颜色；供试品在一定的条件下的吸收度不得色；供试品在一定的条件下的吸收度不得过一定值。过一定值。（五）杂质与一定试剂反应产生气体（五）杂质与一定试剂反应产生气体 砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物砷、硫、碳酸盐、氨或胺盐、氰化物（六）药物经有机破坏后检查杂质（六）药物经有机破坏后检查杂质 含环状结构的有机药物中磷、硫、含环状结构的有机药物中磷、硫、卤素及硒等杂质；不溶药物等。卤素及硒等杂质；不溶药物等。氧瓶燃烧法氧瓶燃烧法（Oxygen flask combustion method）n n将药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中将药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中燃烧燃烧，使，使待测元素从有机结合状态转变成待测元素从有机结合状态转变成无机离子无机离子，被事，被事先装在瓶内的吸收液先装在瓶内的吸收液吸收吸收，成为稳定的溶液状态，成为稳定的溶液状态，然后采用适当方法进行然后采用适当方法进行测定测定n n用于含用于含卤素、硫、氮、硒卤素、硫、氮、硒等元素的有机药物的鉴等元素的有机药物的鉴别、检查和含量测定别、检查和含量测定仪器装置仪器装置铂金丝硬质玻璃燃烧瓶样品操作方法：操作方法：n n称样称样将样品直接置无灰滤纸上称量。将样品直接置无灰滤纸上称量。n n吸收液吸收液水水-NaOH-NaOH（含碘、氯药物）（含碘、氯药物）n n例盐酸胺碘酮、甲状腺粉、甲状腺片例盐酸胺碘酮、甲状腺粉、甲状腺片水水-NaOH-H-NaOH-H2 2OO2 2（含溴、含硫药物）（含溴、含硫药物）水（含氟药物）水（含氟药物）硝酸溶液（含硒药物）硝酸溶液（含硒药物）n n燃烧分解操作（通燃烧分解操作（通OO2 2 1 12 min2 min，燃烧），燃烧）注意注意n n防爆，燃烧瓶应洗涤干净防爆，燃烧瓶应洗涤干净n n氧气要充足，燃烧应完全氧气要充足，燃烧应完全n n测定含氟药物应用石英燃烧瓶测定含氟药物应用石英燃烧瓶一般杂质的检查一般杂质的检查第四节、第四节、一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法一）、一般杂质检查规则一）、一般杂质检查规则药品检验操作标准规定：1.遵循平行操作原则（1）仪器的配对性如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致（2）对照品与供试品的同步操作2.正确的取样及供试品的称量范围1g不超过2%，1g不超过1%3.正确的比色、比浊方法4.检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份1、原理：、原理：中国药典对氯化物的检查是中国药典对氯化物的检查是利用氯化利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在氯化银白色浑浊液，与一定标准氯化钠溶液在相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度相同的条件下生成的氯化银浑浊液比较，浊度不得更大。不得更大。Cl-AgCl（微微 量量 时时 浑浑 浊浊 ）稀稀 HNO3AgNO3二）、氯化物检查法二）、氯化物检查法对照法 A、取一定量供试品、取一定量供试品 产生产生AgCl (浑浊）浑浊）依法处理依法处理依法处理依法处理稀稀稀稀HNOHNO3 3 AgNOAgNO3 3同上处理同上处理同上处理同上处理 B、取一定量标准、取一定量标准NaCI 液液 同上同上 （标准（标准 NaCI NaCI 浓度浓度C=0.01 mg CI-/ml ）（如（如 A 浊度比浊度比B小则本项合格）。小则本项合格）。供试品稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml标准溶液稀稀HNO310mlH2OAgNO31ml 暗处放置5min(避免AgCl分解)（二）检查方法（二）检查方法药典附录药典附录 除另有规定外，取各药品项下除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成规定量的供试品，加水溶解使成25ml（溶液如显碱性，可滴加硝酸（溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性），再加使成中性），再加稀硝酸稀硝酸10m1；溶液如不澄清，应滤过；置溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。另取各药品项摇匀，即得供试溶液。另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液，置下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸纳氏比色管中，加稀硝酸10m1，加水，加水使成使成40m1，摇匀，摇匀，即得对照溶液。即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液硝酸银试液1.0m1，用水稀释使成，用水稀释使成50m1，摇匀，在暗处放置，摇匀，在暗处放置5分钟，同分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较，即得。察，比较，即得。结果观察方法 暗处放置暗处放置5min(避免避免AgCl分解分解)黑色的背景上黑色的背景上 自上而下的观察自上而下的观察（三）测定条件1.标准NaCl溶液10gCl/ml，50ml溶液中含5080g的Cl所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。2.反应需在硝酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀硝酸10ml为宜。A、AgCI不溶于不溶于HNO3可在可在HNO3中中产生产生最好的乳化浑浊；最好的乳化浑浊；B、加速、加速AgCI 的的产生；产生；C、防止产生、防止产生Ag20，Ag3PO4,Ag2CO3 因为因为这些这些 溶溶于于HNO3这样就这样就可以防止可以防止CO32-OH-，PO43-干扰。干扰。3.试剂：硝酸银5.避光、暗处放置5分钟后比浊，因氯化银见光易分解。4.供试液和对照液稀释后，再加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。6.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。7.平行操作原则。（四）干扰及排除1.若供试品有色，需经处理后方可检查。（1）内消色法：倍量法，即先去除被测物，再加入标准溶液，使成对照，这样对照液与供试液颜色相同。（2）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。A、如：（有色）、如：（有色）取两分等量供试品：取两分等量供试品：a、一份做供试液（一份做供试液（A管）管）依法检查依法检查 b、另一份、另一份 AgCI 滤液（滤液（B 管加入管加入 规定量的标准规定量的标准NaCI溶液作为对照管）。溶液作为对照管）。加稀加稀 HNO 3过滤过滤B、用滤纸过滤时，、用滤纸过滤时，滤纸中如含有氯化物滤纸中如含有氯化物，可预先用含，可预先用含 有硝有硝酸的水溶液洗净后使用。酸的水溶液洗净后使用。AgNO32.当有其它干扰物质存在时，必需在检查前除去（1）碘中氯化物的检查（2）碘化物中氯化物的检查（3）溴化物中氯化物的检查3.不溶于水的有机药物（1）加水振摇，过滤，取滤液进行检查。（2）加热，放冷，过滤，取滤液进行检查。（3）溶于有机溶剂如稀乙醇、丙酮，可加稀乙醇或丙酮溶解后进行检查。4.有机药物中有机氯杂质的检查，具体情况，具体分析。方法：方法：必须使结状态的氯变为游离状必须使结状态的氯变为游离状态的氯。态的氯。有机破坏的方法：有机破坏的方法：.药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是（）A.硫酸B.硝酸C.盐酸D.醋酸E.磷酸例1.中国药典（2000年版）规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（）A.使检查反应完全B.药物中含氯化物的量均在此范围C.加速反应D.所产生的浊度梯度明显E.避免干扰例2.采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是（）A加速生成氯化银浑浊反应B消除某些弱酸盐的干扰C消除碳酸盐干扰D消除磷酸盐干扰E避免氧化银沉淀生成例3.当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为（）A内消色法B外消色法C比色法D差示比浊法E差示可见分光法例4.若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（）A.加入一定量氯仿提取后测定B.氧瓶燃烧C.倍量法D.加入一定量乙醇E.以上都不对例5.下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（）A.所用比色管需配套B.稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C.避光放置5分钟D.用硝酸银标准溶液做对照E.在白色背景下观察三）、硫酸盐检查法三）、硫酸盐检查法（一）原理 对照法 药物中存在的微量硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性介质中生成硫酸钡白色浑浊，与一定量标准硫酸钾溶液在相同条件生 成的浑浊比较，浊度不得更大。（二）测定条件1.标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。2.反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。3.试剂：氯化钡5.比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。4.供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。若供试品有色，也可用内消色法即倍量法处理。（三）干扰及排除例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是（）A.标准氯化钡B.标准醋酸铅溶液C.标准硝酸银溶液D.标准硫酸钾溶液E.以上都不对三、铁盐检查法三、铁盐检查法1.原理 对照法（一）硫氰酸盐法ChP（2000）、USP（24）铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，再与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色比较，颜色不得更深。的颜色比较，颜色不得更深。2.检查方法药典附录除另有规定外，取各药品项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml，移置50ml纳氏比色管中，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀；如显色，立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液（取各药品项下规定量的标准铁溶液，置50ml纳氏比色管中，加水使成25ml，加稀盐酸4ml与过硫酸铵50mg，用水稀释使成35m1后，加30%硫氰酸铵溶液3ml，再加水适量稀释成50ml，摇匀）比较，即得。3.测定条件（1）用FeNH4(SO4)212H2O（硫酸铁铵）配制标准铁贮备液（加入硫酸防止Fe3+的水解），标准铁溶液临用前稀释而成，标准铁溶液10gFe3+/ml，50ml溶液中含1050g的Fe3+显色梯度明显，一般取标准铁溶液1.05.0ml（2）反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸4ml为宜。（3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行。（4）检查Fe2+和Fe3+。（5）铁铁盐盐检检查查时时，加加氧氧化化剂剂氧氧化化Fe2+为为Fe3+。加加过过硫硫酸酸铵铵可可氧氧化化Fe2+为为Fe3+，同同时时可可防防止止光光线线使使硫硫氰氰酸酸铁铁还还原或分解褪色。原或分解褪色。加硝酸后加热也可氧化加硝酸后加热也可氧化Fe2+为为Fe3+。（6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。4.干扰及排除干扰及排除（1）为了提高灵敏度或供试管与对照管色调不一致时，可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色。（2）具环状结构的有机药物，需经700800炽灼破坏处理后再依法检查。（3）干扰离子的影响（阴离子）。（二）巯基醋酸法 BP（1998）原理原理硫氰醋酸还原硫氰醋酸还原Fe3为为Fe2，在氨碱性溶液中进一步与，在氨碱性溶液中进一步与Fe2作用作用生成红色配位离子，与一定量标准铁生成红色配位离子，与一定量标准铁溶液经同法溶液经同法处理后产生的颜色处理后产生的颜色进行比进行比较，以限制铁的量。较，以限制铁的量。对照法本法灵敏度较高，但试剂较贵例1.中国药典（2000年版）规定铁盐的检查方法为（A）A.硫氰酸盐法B.巯基醋酸法C.普鲁士蓝法D邻二氮菲法E.水杨酸显色法例2.中国药典（2000年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（AB）A.使药物中铁盐都转变为Fe3+B.防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色C.使产生的红色产物颜色更深D防止干扰E便于观察、比较例3.某药物（黄色）欲进行铁盐检查，应采用下面哪种方法（E）A.倍量法B.微孔滤膜过滤法C.调色法D.600700炽灼残渣后测定E.以上都不对例4.中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（D）A.FeB.Fe2+C.Fe3+D.Fe2+和Fe3+E.以上都不对四）、重金属检查法四）、重金属检查法以铅为代表以铅为代表中国药典（2000年版）共收载四法。重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或者硫化钠作用显色的金属杂质。者硫化钠作用显色的金属杂质。银、银、铅铅、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、汞、铜、镉、铋、锑、锡、砷、镍、钴、锌等等镍、钴、锌等等（一）第一法硫代乙酰胺法1.原理硫代乙酰胺在弱酸性（硫代乙酰胺在弱酸性（pH3.5醋酸盐缓醋酸盐缓冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重冲液）条件下水解，产生硫化氢，与微量重金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混金属离子生成黄色到棕黑色的硫化物均匀混悬液，与一定量标准铅溶液经同法悬液，与一定量标准铅溶液经同法处理后所处理后所呈现颜色比较，颜色不得更深。呈现颜色比较，颜色不得更深。对照法适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物。2.测定条件（1）用硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解），标准铅溶液临用前稀释而成，标准硝酸铅溶液10gPb2+/ml，适宜比色范围为27ml溶液中含1020g的Pb2+。（2）本法用2mlpH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。（3）显色剂：从ChP（1990）开始改用硫代乙酰胺做显色剂。（1）供试品如有色，需经处理后方可检查。A.外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。B.内消色法C.改用第四法，微孔滤膜过滤法3.干扰及排除（2）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色，加 入 抗 坏 血 酸 或 盐 酸 羟 胺（0.51.0g）还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰。（二）第二法炽灼残渣法适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇及碱的有机药物。500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。1.原理对照法2.操作方法含钠及氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿（因可腐蚀瓷坩埚，带入大量重金属）（三）第三法硫化钠法适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。1.原理对照法2.测定条件（1）NaOH碱性条件下（2）显色剂：硫化钠（四）第四法微孔滤膜法适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查。依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑。同第一法 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上(铅斑)提高检查的灵敏度.CABFE滤器下部滤器上盖连接头辅助滤板D滤膜(直径10mm,孔径3.0m)垫圈(外径10mm,内径6mm)重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（）A.1.5B.3.5C7.5D.9.5E.11.5微孔滤膜法是用来检查（）A.氯化物B.砷盐C.重金属D.硫化物E.氰化物例例1.中国药典(2010年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（）A.硫化氢试液B.硫代乙酰胺试液C.硫化钠试液D.氰化钾试液E.硫氰酸铵试液例2.葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（）A.用硫代乙酰胺为标准对照液B.用10ml稀硝酸/50ml酸化C.在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D.用硫化钠为试液E.结果需在黑色背景下观察五）、砷盐检查法五）、砷盐检查法（一）古蔡法ChP（2000）BP（1998）金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,判断砷盐的量.标准砷溶液2 ml(1 g/ml)1.原理对照法遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较。反应式如下：黄色黄色棕色棕色2.操作方法（1）标准砷斑用2ml标准砷溶液制备。（2）供试品需经有机破坏，则标准砷）供试品需经有机破坏，则标准砷溶液应平行操作。溶液应平行操作。古蔡氏法检砷器8cm有孔玻有孔玻璃旋塞璃旋塞导气管导气管AsH3发生瓶发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HCl Zn 粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体加锌粒2g,立即将装妥的导气管 B 密塞与 A 瓶,置25-40 水浴中,反应45分钟,取出溴化汞试纸,比较砷斑.导气管B中装入醋酸铅棉球再于旋塞C的平面上放两片溴化汞试纸样品、对照品分别置于检砷瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加2.5%碘化钾试液5ml 与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10分钟2 2操作操作1)1)试剂的作用试剂的作用a.KI的作用还原剂：As5+As3+五价砷生成五价砷生成AsHAsH3 3的反应速度比三价砷速度慢的反应速度比三价砷速度慢,加入加入 KI KI 使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应,以增大以增大AsHAsH3 3的生成速度的生成速度.3.讨 论还原剂还原剂(表现在表现在2 2方面方面).将五价砷还原为三价砷将五价砷还原为三价砷(As(As5+5+AsAs3+3+)b.酸性SnCl2的作用 进而促进AsH3不断生成稳定的络离子.将KI被氧化生成的I2再还原为I-c.PbAc2棉花的作用 排除硫化物的干扰(1mgS2-)2)2)古蔡氏法特点古蔡氏法特点优点：灵敏度高优点：灵敏度高(1(1 g As)g As)缺点：缺点：SbSb干扰干扰对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需用白田需用白田道夫法道夫法.白田道夫法白田道夫法 (二二)二乙基二硫代氨基甲酸银法二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC(Ag-DDC法法)silver diethyldithiocarbamate 本法不仅用于砷盐的限量检查本法不仅用于砷盐的限量检查,而且可用作而且可用作微量砷盐的微量砷盐的含量测定含量测定.1.1.原原 理理第一步：同第一步：同古蔡氏法生成砷化氢古蔡氏法生成砷化氢第二步：砷化氢还原第二步：砷化氢还原Ag-DDCAg-DDC溶液溶液,产生产生红色的胶态银红色的胶态银.目视比色法目视比色法 仪器分析仪器分析 510nm 510nm用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。USP（24）用吡啶，ChP（2000）用三乙胺。本法适用于含Sb量小于500g的供试品。2.Ag-DDC2.Ag-DDC法的特点法的特点 a a 灵敏度高灵敏度高 0.5 0.5 gAs/30ml gAs/30ml b b 可仪器测定可仪器测定,还可定量还可定量1 1 g