金银花酚酸含量快速检测(T-HBJYH 002—2022).pdf

T T/H B J Y HH B J Y H河北省金银花行业协会团体河北省金银花行业协会团体标准标准T/HBJYH002-2022金银花酚酸含量快速金银花酚酸含量快速检检测测2022-04-14 发布2022-04-14 实施河 北 省 金 银 花 行 业 协 会 发 布T/HBJYH002-2022前前言言本文件按照GB/T1.12020 标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则规定的规则起草。本文件由巨鹿县市场监督管理局提出。本文件起草单位：北京中医药大学、河北精测科技有限公司、北京宇辰致业科技有限公司、北京尚禾生态环境有限公司、巨鹿县科工局、巨鹿县市场监督管理局。本文件主要起草人：李卫东、李可、耿泽宇、马威、宿颖、张玉强、代熙、鲍艺杰、郭然、曹天丽、冉贝贝、张羽师、黄厚钰、艾飞、张军、韩熹。T/HBJYH002-2022目录1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14前期数据采集.25金银花酚酸含量定量校正模型的建立、验证、维护、更新、传递.36校正模型的应用.4T/HBJYH002-20221金银花酚酸含量快速检测1范围本文件规定了金银花中酚酸含量的快速检测方法。本文件适用于邢台市金银花的酚酸含量快速检测过程。本文件不适用于仲裁检验。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。中华人民共和国药典 2020 年版GB/T 29858-2013 分子光谱多元校正定量分析通则NY/T 2794-2015 花生仁中氨基酸含量测定近红外法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1金银花本品为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或带初开的花。夏初花开放前采收，干燥。3.2酚酸指一类含有酚环的有机酸，此处为金银花中绿原酸、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸和4,5-二-O-咖啡酰的总和。中华人民共和国药典 2020版规定金银花按干燥品计算，含绿原酸（C16H18O9）不得少于1.5%，含酚酸类以绿原酸（C16H18O9）、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸（C25H24O12）和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸（C25H24O12）的总量计，不得少于3.8%。3.3高效液相色谱法高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在柱内被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。该方法用于测定金银花样品中酚酸的真实含量。3.4近红外光谱分析仪近红外光谱分析仪由光源、单色器（或干涉仪）、釆样系统、检测器、数据处理器和评价系统等组成。釆用钨灯光源；固体漫反射样品池、光纤探头、液体透射池、积分球是常用T/HBJYH002-20222的釆样装置；硅、硫化铅、砷化铟、铟镓砷、汞镉碲和氘代硫酸三甘肽检测器为常用的检测器。检测器和采样系统需根据供试品的类型选择。4前期数据采集4.1样品前处理取干燥的金银花样品，去除枝、叶等杂质，粉碎，过四号筛（粒径 250 m）。4.2近红外光谱采集取4.1金银花粉末，置于样品杯中，压紧，使装样厚度 15 mm，开始扫描并获得样品的近红外吸收光谱。样品粉末温度与仪器温度保持接近一致（2）；测量波长范围取在750nm2500 nm范围内；扫描采集模式为反射或漫反射；谱图分辨率可根据实际需求选择，一般为8 cm-116 cm-1；样品杯设置旋转；光谱扫描方式可根据实际需求设置为单次扫描、连续扫描、平均谱图扫描等。4.3样品中酚酸含量测定酚酸含量测定参照中华人民共和国药典 2020年版金银花项下检测方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1%磷酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；柱温不高于25；流速为每分钟0.7 ml，检测波长为327 nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于10000。表1 HPLC法测定酚酸含量梯度洗脱规定时间（分钟）流动相 A：乙腈(%)流动相 B：0.5%冰醋酸溶液(%)0814198681814198114341931816934353190691035409010取绿原酸对照品、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品和4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加75%甲醇制成每1 mL含0.28 mg、0.15 mg、44 g的溶液，得到对照品溶液。取样品粉末（过四号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50 mL，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，得到供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2 L，注入液相色谱仪，测定，即得。5金银花酚酸含量定量校正模型的建立、验证、维护、更新、传递5.1校正模型的建立将4.2获得的金银花样品近红外吸收光谱与4.3测得的酚酸含量匹配，建立定量校正模型。建模步骤包括光谱预处理异常数据剔除模型区间选择校正模型建立。T/HBJYH002-202235.1.1光谱预处理为消除光谱测量过程中引入的噪声对模型的不利影响，应当在模型建立前用各种数据处理方法对光谱进行预处理。常用的数据处理方法及功能见表2。用于建立模型的样品近红外光谱应采用相同的数据预处理方法；可采用单种或多种预处理方法结合的方式；不同预处理方法建立的模型以5.2的模型验证结果来选择最佳预处理方法。表2 不同数据预处理方法及其功能名称功能备注Savitzky-Golay卷积平滑处理提高信噪比，减少光谱噪声移动窗口宽度参数选择要适度，过小过滤不掉噪声，过大降低模型分辨能力Savitzky-Golay卷积倒数处理消除基线和其他背景的干扰，分辨重叠峰，提高分辨率和灵敏度标准正态变量变换（SNV）消除固体颗粒大小、表面散射以及光程变化对 NIR 漫反射光谱的影响与MSC有很强的相似性，不建议一起使用多元散射校正（MSC）消除颗粒分布不均匀及颗粒大小产生散射影响与SNV有很强的相似性，不建议一起使用最大-最小归一化处理消除样品近红外谱图冗余信息，增强样品近红外谱图和性质数据的差异化，提高分析模型的预测精度和稳健性矢量归一处理消除样品近红外谱图冗余信息，增强样品近红外谱图和性质数据的差异化，提高分析模型的预测精度和稳健性波数转换波长可将谱图的波长显示单位在nm和cm-1之间进行互换显示转换公式：“107/nm=cm-1”重置谱图将处理后的谱图显示形态恢复到原始显示形态5.1.2异常数据剔除将含有极端成分的不具有代表性的样品光谱剔除，不纳入校正。异常样品的识别方法参照GB/T 29858-2013的规定。5.1.3模型区间选择可采用自动筛选或手动筛选（根据各波长下相关系数的大小确定是否纳入）；不同区间的建模效果以5.2的模型验证结果来选择最佳模型区间。推荐在以下区间范围内选择酚酸的模型区间：1866nm1961 nm，2019nm2123 nm，2240nm2270 nm，2349nm2386 nm，2454nm2554 nm。以下区间不推荐纳入模型建立：1300nm1717 nm，1767nm1863 nm，1966nm2000 nm，2140nm2234 nm，2278nm2322 nm，238nm22448 nm，2564nm2600 nm。5.1.4校正模型的建立将金银花样品近红外吸收光谱与4.3测得的酚酸含量匹配，利用偏最小二乘法建立定量校正模型。5.2校正模型的验证T/HBJYH002-20224校正模型建立后，需要对模型的预测性能进行评价并验证。各项评价指标见表3。表3 校正模型预测能力的评价指标评价指标含义及评价方法备注SEC采用校正样品参考值和预测值计算的标准误差/均方根误差值越小，模型越好RMSECRC校正样品相关系数值越趋近于1，模型越好RPDC校正样品定向系数值大于1表示模型正常；值越大，模型越好SECV采用校正样品参考值和使用交互验证的预测值计算的标准误差/均方根误差值越小，模型越好RMSECVRCV交互验证相关系数值越趋近于1，模型越好RPDCV交互验证定向系数值大于1表示模型正常；值越大，模型越好SEV采用验证样品参考值和预测值计算的标准误差/均方根误差值越小，模型越好RMSEVSEPRMSEPRV验证样品相关系数值越趋近于1，模型越好RPDV验证样品定向系数值大于1表示模型正常；值越大，模型越好5.3校正模型的维护、更新、传递扫描未知金银花样品的近红外光谱，采用与模型中光谱相同的预处理方法及区间选择后纳入模型光谱库中，利用4.3方法测定酚酸含量，建立的新模型即为更新模型。模型更新后部分数据成为异常值，依照5.1.2方法进行剔除。模型向另一个设备导入使用时，应符合GB/T 29858-2013规定的模型传递方法。6校正模型的应用6.1 样品前处理取未知含量的干燥金银花样品，去除枝、叶等杂质，粉碎，过四号筛（粒径 250 m）。6.2金银花酚酸含量的快速检测将5.1建立的校正模型导入近红外光谱分析仪中；其他仪器条件同4.2。取6.1金银花粉末，置于样品杯中，压紧，使装样厚度 15 mm，开始扫描并获得样品的近红外吸收光谱，光谱与校正模型匹配计算得出该样品的酚酸。