实验十三、石蜡切片法(二)透明、透蜡、包埋.ppt

实验十三石蜡切片法（二）透明、透蜡、包埋一、实验原理透明是指利用透明剂既可与脱水剂相混合又能和石蜡相混合的性质，将脱水剂替换出来，使石蜡能顺利进入材料中。透蜡是指将材料中的透明剂逐步清除，以至完全由石蜡充分渗透。包埋是把被石蜡浸透的材料连同熔化的石蜡一起倒入一定形状的容器内，并立即投入冷水中，使它凝固成含材料的蜡块，以备切片。二、试剂与器材1.试 剂：1/2 无水乙醇+1/2二甲苯、二甲苯、1/2二甲苯+1/2石蜡、纯石蜡。2.器材：恒温箱、蜡杯、镊子、解剖针、酒精灯、塑料面盆、温台。三、实验程序1透明：透明也是渐次由低浓度至高浓度。材料先在纯酒精和二甲苯各半的混合液浸1530分钟分钟，再转入纯二甲苯中透明（至透明为止），一般1530分钟分钟。2透蜡：材料自二甲苯中取出后,先移入二甲苯和石蜡等量的混合液中约30分钟分钟，然后进入纯石蜡中约4060分钟分钟，再换纯石蜡一次约4060分钟分钟。附：植物材料的透蜡过程必须缓慢进行，所须的时间约需1-2天。其方法如下：将材料连同二甲苯一起倒入小蜡杯中；然后轻轻倒入溶解的石蜡。石蜡就在二甲苯的上层凝固起来。此时可将小蜡杯放在35-37C温箱内，使石蜡徐徐熔解到饱和为止，约需1-2天；将蜡杯移入56-60C温箱中，待石蜡熔解后，倒去含有二甲苯的石蜡，以后每隔1小时左右更换已熔的纯蜡一次，共换纯蜡2-3次即可进行包埋。3包埋：从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，倒入包埋用的纸盒中，取出存放材料的蜡杯，用温镊子夹取材料平放于纸盒底部，使之排列整齐。将纸盒两侧的把手提起，慢慢地平放在面盆的水面，待石蜡的表面凝固，将纸盒慢慢浸入水中，待石蜡完全凝固（约30分钟）后即可取出备用。四、注意事项透明的注意事项使用透明剂时，要随时盖紧盖子，以免空气中水分进入；更换透明剂，动作要迅速；材料周围出现白色雾状，应退回纯酒精中重新脱水。透蜡的注意事项动物材料常用的石蜡熔点为52-56C；植物材料为54-60C。透蜡温度要恒定，不可忽高忽低；包埋的注意事项包埋前应先把必需的用具（恒温箱、温台、纸盒）准备好。包埋用的镊子要先放在温箱中预热。五、思考题1.当材料周围出现白色雾状时，应退回纯酒精中重新脱水。为什么？