蛋白质的化学性质.ppt

实验十实验十 蛋白质的化学性质蛋白质的化学性质【实验目的】【实验目的】1掌握蛋白质的重要化学性质。掌握蛋白质的重要化学性质。2了解核蛋白的组成。了解核蛋白的组成。【实验操作】【实验操作】（一）蛋白质的盐析（一）蛋白质的盐析 取取1.51.5mLmL蛋蛋白白质质溶溶液液，加加入入等等体体积积饱饱和和硫硫酸酸铵铵溶溶液液（浓浓度度为为50%50%饱饱和和），微微微微摇摇动动试试管管，使使溶溶液液混混合合均均匀匀后后，静静置置数数分分钟钟，球球蛋蛋白白即即析析出出呈呈絮絮状状沉沉淀淀（如如无无沉沉淀淀可可再再加加少少许许饱饱和和硫硫酸酸铵铵），用用滤滤纸纸滤滤取取上上清清液液，滤滤液液中中再再加加入入固固体体硫硫酸酸铵铵粉粉末末至至不不再再溶溶解解，析析出出的的即即为为清清蛋蛋白白，再再加加水水稀稀释释，观观察沉淀是否溶解。察沉淀是否溶解。（二）蛋白质的沉淀（二）蛋白质的沉淀 1 1用重金属盐沉淀蛋白质用重金属盐沉淀蛋白质 取取三三支支试试管管，各各加加1mL蛋蛋白白质质溶溶液液，分分别别各各加加3滴滴6%醋醋酸酸铅铅溶溶液液、3滴滴2%硫硫酸酸铜铜溶溶液液和和3滴滴1%硝酸银溶液，观察蛋白质沉淀的析出。硝酸银溶液，观察蛋白质沉淀的析出。2 2用有机酸沉淀蛋白质用有机酸沉淀蛋白质 取取二二支支试试管管，各各加加1 1mLmL蛋蛋白白质质溶溶液液，并并加加5%5%醋醋酸酸溶溶液液使使之之呈呈酸酸性性（该该沉沉淀淀反反应应最最好好在在弱弱酸酸中中进进行行）。然然后后分分别别滴滴加加饱饱和和苦苦味味酸酸、饱饱鞣鞣酸溶液，直至沉淀产生为止。酸溶液，直至沉淀产生为止。用用10%10%三三氯氯醋酸溶液、醋酸溶液、3%3%磺柳酸溶液磺柳酸溶液进进行行类类似似实验实验（用量同前），（用量同前），观观察察现现象。象。（三）蛋白质的颜色反应（三）蛋白质的颜色反应 1 1黄蛋白反应黄蛋白反应 于于试试管中，加管中，加1 1mLmL蛋白蛋白质质溶液和溶液和1010滴滴浓浓硝酸溶液，直火加硝酸溶液，直火加热热煮沸，煮沸，观观察溶液和察溶液和沉淀沉淀颜颜色。冷却后，再加入色。冷却后，再加入2020滴滴10%10%氢氯氢氯化化钠钠溶液，溶液，观观察察颜颜色色变变化。化。2 2与茚三酮的反应与茚三酮的反应 在二支试管中，分别加在二支试管中，分别加1%1%赖氨酸溶赖氨酸溶液和液和1 1mLmL蛋白质溶液，分别加蛋白质溶液，分别加2 2滴茚三酮滴茚三酮溶液，加热至沸，观察有什么现象？溶液，加热至沸，观察有什么现象？3 3与硝酸汞试剂作用与硝酸汞试剂作用米伦反应米伦反应 在在二二支支试试管管中中，分分别别加加1 1mLmL 0.5%0.5%苯苯酚酚溶溶液液和和1 1mLmL蛋蛋白白质质溶溶液液，再再各各加加0.50.5mLmL米米伦伦试试剂剂（不不可可太太多多），苯苯酚酚溶溶液液出出现现玫玫瑰瑰红红色色，而而蛋蛋白白质质溶溶液液加加热热后后出出现现沉沉淀淀，加加热热凝凝固固的的蛋蛋白白质质呈呈砖砖红红色色，有有时时溶溶液液也呈红色。也呈红色。4 4蛋白质的双缩脲反应蛋白质的双缩脲反应(1)(1)双缩脲的生成双缩脲的生成 于于干干燥燥试试管管中中，加加0.20.2g g0.3g0.3g尿尿素素，微微火火加加热热，尿尿素素熔熔化化并并形形成成双双缩缩脲脲，放放出出的的氨氨可可用用红红色色石石蕊蕊试试纸纸试试验验。试试管管内内有白色固体出现后，停止加热。有白色固体出现后，停止加热。(2)(2)双缩脲反应双缩脲反应 上上述述产产物物冷冷却却后后，加加1mL10%氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液，摇摇匀匀，再再加加2滴滴2%硫硫酸酸酮酮溶溶液液，混混匀匀，观观察察有有无无紫色出现。紫色出现。于于试试管管中中，加加1mL清清蛋蛋白白溶溶液液和和1mL10%氢氢氧氧化化铜铜溶溶液液，再再加加1滴滴2滴滴2%硫硫酸酸铜铜溶溶液液共共热热，由由于于蛋蛋白白质质与与硫硫酸酸铜铜生生成成络络合合物物而而呈呈紫紫色色。取取1%赖氨酸溶液作对照，观察颜色变化。赖氨酸溶液作对照，观察颜色变化。(四四)核蛋白组成的鉴定核蛋白组成的鉴定1 1核蛋白的水解核蛋白的水解 取取2020mLmL酵母核蛋白混悬液于离心管酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离，弃去清液，将沉淀转入小中离心分离，弃去清液，将沉淀转入小烧杯中，加烧杯中，加1515mLmL 5%5%硫酸，盖上表面皿在硫酸，盖上表面皿在水浴上煮沸约水浴上煮沸约1 1h h（煮沸过程中保持原有煮沸过程中保持原有体积），水解毕，离心分离，取上层清体积），水解毕，离心分离，取上层清液作以下检查。液作以下检查。2 2核糖的鉴定核糖的鉴定 于试管中，加于试管中，加1 1mLmL 20%20%间苯二酚盐酸间苯二酚盐酸溶液，以小火加热至沸，迅速加入溶液，以小火加热至沸，迅速加入5 5滴水滴水解液，呈现红色，（解液，呈现红色，（如红色不显可再稍如红色不显可再稍加热加热）。）。3 3磷酸的鉴定磷酸的鉴定 取取1010滴水解液，置于试管中，加滴水解液，置于试管中，加5 5滴滴7%7%钼酸铵溶液和钼酸铵溶液和2 2滴浓硝酸溶液，小心于滴浓硝酸溶液，小心于火上加热，即有黄色沉淀生成。火上加热，即有黄色沉淀生成。4 4嘌呤与嘧啶的鉴定嘌呤与嘧啶的鉴定 取约取约4 4mLmL水解液，置于小烧杯中，加水解液，置于小烧杯中，加入氨水至微碱性，过滤，在滤液中加入氨水至微碱性，过滤，在滤液中加1 1mLmL 5%5%硝酸银铵溶液，静置片刻，即有絮状硝酸银铵溶液，静置片刻，即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。【注意事项注意事项】米米伦伦试试剂剂是是硝硝酸酸、亚亚硝硝酸酸、硝硝酸酸汞汞及及亚亚硝硝酸酸汞汞之之混混合合物物，能能与与苯苯酚酚及及某某些些酚类起颜色反应。酚类起颜色反应。思考题盐析的原理是什么？盐析的原理是什么？