实验三 乳胶凝集试验(LAT).ppt

实验三乳胶凝集试验Latex Agglutination Test，LAT一、目的和要求1掌握乳胶凝集试验的操作技术掌握乳胶凝集试验的操作技术2学会结果观察和判定学会结果观察和判定二、实验原理1、凝集试验细菌、红细胞等颗粒性抗原或吸附在其他物体(乳胶、白陶土、离子交换树脂和红细胞等)的抗原，与相应的抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验。参与凝集反应的抗原为凝集原，抗体为凝集素。由于凝集反应的抗原为颗粒状，在单位体积内含量少，而抗体分子小，单位体积内含量多，易出现前带现象，所以通常固定抗原，稀释抗体。2、间接凝集试验：将可溶性抗原(或抗体)先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的不溶性颗粒(统称为载体颗粒)的表面，然后与相应抗体（或抗原）作用，在有电解质存在的适宜条件下，所出现的特异性凝集反应称为间接凝集反应。常用的载体：红细胞(“O”型人红细胞、绵羊红细胞)、聚苯乙烯乳胶颗粒、白陶土、离子交换树脂、火棉胶等。3、乳胶凝集试验：乳胶是聚苯乙烯聚合的高分子乳状液，对蛋白质、核酸等高分子物质具有良好吸附性能，可用作载体吸附某些抗原(抗体)来测定相应的抗体(或抗原)。优点：本法具有快速简便、保存方便、比较准确等优点。三、实验步骤1、将抗原用稀释液（经过处理的2%的空白乳胶）按1：30-1：300的比例稀释混匀。置37，1小时。2、将血清（标准阳性、标准阴性和待检）按1：2-1：10倍稀释。3、将上述稀释好的抗原抗体混匀，轻请旋转，室温静置反应数分钟。观察结果。四、结果判定：noagglutination,latexbeadsretaintheiroriginalform;+：mildagglutinationin2to3min,fineclumpingwhenobservedcarefully+：moderateagglutinationin1to2min,visiblesmallandhomogeneousclumps+：heavyagglutinationwithin30sto1min,bigclumps+：veryheavyagglutinationwithin30s,bigclumps.