噬菌体的效价测定.ppt
噬菌体的效价测定 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一步生长（一步生长（One-step growth)高浓度敏感细菌高浓度敏感细菌 适量噬菌体适量噬菌体相混合一定时间相混合一定时间(5min)除去游离噬菌体除去游离噬菌体进行高倍稀释进行高倍稀释培养培养定时取样测定噬菌体数定时取样测定噬菌体数测定噬菌体生长的方法测定噬菌体生长的方法一步生长曲线一步生长曲线 潜伏期（潜伏期（latent phase)eclipse phase+intracellular accumulation phase)从噬菌体吸附菌细胞至菌细胞释出新噬菌体的最短时间。从噬菌体吸附菌细胞至菌细胞释出新噬菌体的最短时间。裂解裂解 期（期（rise phasse)宿主裂解，噬菌体数不断增加的时期。宿主裂解，噬菌体数不断增加的时期。平稳期平稳期(plateau phase)宿主全部裂解，噬菌体达最高点后的时期。宿主全部裂解，噬菌体达最高点后的时期。裂解量裂解量(Burst phase)每个被感染细菌释放新的噬菌体的平均数。每个被感染细菌释放新的噬菌体的平均数。裂解量裂解量(Burst phase)=-进行一步生长曲线的测定，能了解噬菌体在菌体内的最短潜伏期，和平均收获量，还可测知理化因素的变化对噬菌体感染循环的时间和对每个被感染噬菌体释放噬菌体的影响。裂解期平均噬菌体数裂解期平均噬菌体数潜伏期平均噬菌体数潜伏期平均噬菌体数裂解量(2).The Lysogenic Life Cycle of Temperate Bacteriophages Adsorption Penetration Prophage Formation Maintaining the Prophage during the Lysogenic Life CycleReplication Maturation Release But,following spontaneous induction,The bacterium inserts its genome into the bacteriums nucleoid to become a prophage.As the bacterium replicates,the prophage replicates as a part of the bacteriums nucleoid.Fig.1:Lysogenic Life Cycle of a Temperate Bacteriophage 温和噬菌体与溶源性温和噬菌体与溶源性温和噬菌体温和噬菌体(temperate phage)-吸附并吸附并侵入细胞后，噬菌体的侵入细胞后，噬菌体的DNA整合在宿主的整合在宿主的染色体组上，并可长期随宿主染色体组上，并可长期随宿主DNA的复制的复制而同步复制，因而在一般情况下不进行增殖而同步复制，因而在一般情况下不进行增殖和引起宿主细胞裂解的噬菌体和引起宿主细胞裂解的噬菌体,如如E.coli的的 、P1、P2，Salmonella typhimurium的的P22等。等。原原(前前)噬菌体噬菌体(prophage)-处于整合态处于整合态的噬菌体核酸。的噬菌体核酸。温和噬菌体的特点温和噬菌体的特点1.其核酸的其核酸的类型都是类型都是 dsDNA;2.具有整合能力；具有整合能力；3.具有同步复制能力。具有同步复制能力。Lambda-Phage(E.Coli)Drawing of phage lambda Lambda-Phage溶源性溶源性(lysogeny)-温和噬菌体温和噬菌体侵染敏感细菌后不裂解它们，而与细菌侵染敏感细菌后不裂解它们，而与细菌共存的特性。共存的特性。温和温和噬菌体的三种存在形式：噬菌体的三种存在形式：游离态游离态 整合态整合态 营养态营养态溶源性细菌溶源性细菌(lysogen或或lysogenic bacteria)在核染色体组上整合有在核染色体组上整合有前噬菌体并能正常生长繁殖而不被裂前噬菌体并能正常生长繁殖而不被裂解的微生物。解的微生物。溶源性菌株的命名：溶源性菌株的命名：如：如：E.coli K12()温和噬菌体在细菌染色体上的整合位温和噬菌体在细菌染色体上的整合位置置：就目前所知，所有温和噬菌体的核酸都是双链就目前所知，所有温和噬菌体的核酸都是双链DNA。按。按照温和噬菌体照温和噬菌体DNA与细菌与细菌DNA结合部位的不同，又可将其分结合部位的不同，又可将其分成两类：成两类：只有一个特定结合部位的温和噬菌体：只有一个特定结合部位的温和噬菌体：如：如：大肠杆菌的大肠杆菌的 噬菌体噬菌体 具有多个或不定部位的温和噬菌体：具有多个或不定部位的温和噬菌体：如：如：大肠杆菌的大肠杆菌的P1噬菌体噬菌体 鼠伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌 P22 噬菌体噬菌体。Lambda attachment sitesPhage lambda enters the cell and integrates into the host cell by reciprocal recombination at a preferred site between bio and gal on the E.coli chromosome.Aberrant excision from the host chromosome can generate specialised transducing phage.Lambda attachment sites烈性噬菌体与温和噬菌体的生活史比较：烈性噬菌体与温和噬菌体的生活史比较：吸吸附附侵侵入入增增殖殖成成熟熟裂裂解解整整合合同同步步复复制制自自发发或或诱诱导导多次循环多次循环裂解性循环裂解性循环溶原性循环溶原性循环溶源性菌株的检验溶源性菌株的检验：方法：方法：在合适的培养基中培养待测菌样在合适的培养基中培养待测菌样在对在对数期进行紫外线照射，诱导原噬菌体复制数期进行紫外线照射，诱导原噬菌体复制进进一步培养一步培养过滤培养物，去处活菌体过滤培养物，去处活菌体滤液滤液与指示菌混合、倒平板（或将滤液加到敏感性与指示菌混合、倒平板（或将滤液加到敏感性指指示菌示菌的液体培养物中）的液体培养物中）观察是否有噬菌斑出观察是否有噬菌斑出现（或使菌液变清）现（或使菌液变清）.敏感性指示菌遇溶源菌裂解后所释放的温和噬菌体会裂解性生活周期的非溶源性菌株，这些菌株可以从自然界或菌种库中获得。可稳定遗传，即溶源菌的子细胞一般也是溶原性可稳定遗传，即溶源菌的子细胞一般也是溶原性的。的。自发裂解和诱发裂解（具有产生噬菌体的潜在能自发裂解和诱发裂解（具有产生噬菌体的潜在能力）力）具有抗同原噬菌体感染的具有抗同原噬菌体感染的“免疫性免疫性”溶源性细菌的复愈溶源性细菌的复愈获得新的生理特性（溶源性转变）获得新的生理特性（溶源性转变）局限性转导局限性转导溶源菌有以下特性：溶源菌有以下特性：A mob of bacteriophage attacking E.coliThe oval object that stretches diagonally across the micrograph top-to-bottom is a single bacterium.The much smaller and far more numerous round guys,practically paving the surface of the bacterium,are the bacteriophage heads.
