实验一紫外-可见分光光度计的性能检验.ppt

实验一紫外-可见分光光度计的性能检验 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法 2 2、学会、学会UV1100UV1100型紫外可见分光光度计的使用方法型紫外可见分光光度计的使用方法 二、实验原理二、实验原理 对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。三、仪器与试剂三、仪器与试剂 UV UV11001100型紫外可见分光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿（一对）石英比色皿（一对）擦镜纸擦镜纸 蒸馏水蒸馏水 6mg/100ml K 6mg/100ml K2 2CrCr2 2O O7 7溶液溶液 0.002mol/mol KMnO 0.002mol/mol KMnO4 4溶液溶液 四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤 1 1、比色皿的配对性、比色皿的配对性注入注入蒸馏水蒸馏水两个比色皿两个比色皿分别分别440nm440nm以一个比色皿以一个比色皿为空白（为空白（T T1 1100100）测定测定另一个比色皿的另一个比色皿的T T2 2T=TT=T1 1-T-T2 2T0.5%T0.5%T0.5%两个比色皿配对两个比色皿配对两个比色不配对，应进行校正两个比色不配对，应进行校正 2 2、波长精度的检查、波长精度的检查以蒸馏水为空白以蒸馏水为空白 测定测定KMnOKMnO4 4溶液的吸收曲线溶液的吸收曲线若测得的最大吸收波长在若测得的最大吸收波长在5251nm5251nm以内以内说明说明仪器波长精度符合使用要求仪器波长精度符合使用要求5008000.40.2(nm)A0 3 3、重复性的检查、重复性的检查以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白在在257nm257nm处处同一同一K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液的溶液的T T，连续测定，连续测定7 7次次测定测定求出极差求出极差 若极差若极差0.5%0.5%仪器的重复性符合仪器的重复性符合使用要求使用要求 4.4.吸收值准确度的检查吸收值准确度的检查235nm235nm、257nm257nm分别测定分别测定 K K2 2CrCr2 2O O7 7溶液吸光度并计算吸收系数溶液吸光度并计算吸收系数以以0.02mol/L0.02mol/L的的H H2 2SOSO4 4为空白为空白(T(T100%100%）313nm313nm、350nm350nm与下表规定的与下表规定的吸收系数比较吸收系数比较 若相对偏差在若相对偏差在1%1%以内以内说明说明仪器符合使用要求仪器符合使用要求波长波长/nm/nm 吸收系数吸收系数 235235123.0123.0126.0126.0257257142.8142.8146.2146.231331347.047.050.350.3350350105.5105.5108.5108.5五、思考题五、思考题1 1、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？2 2、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？实验二实验二 吸收曲线的测绘及吸收曲线的测绘及吸收系数的测定吸收系数的测定 一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握测绘吸收曲线的方法、掌握测绘吸收曲线的方法 2 2、学会测定吸收系数、学会测定吸收系数二、实验原理二、实验原理 1 1、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的maxmax、minmin或或(S)(S)为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。供了有力的证据。2 2、百分吸收系数是指当溶液浓度为、百分吸收系数是指当溶液浓度为1%1%，液层厚度为，液层厚度为1cm1cm时的吸光度。时的吸光度。即即 三、仪器与试剂三、仪器与试剂 UV UV11001100型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计 石英比色皿（一对）石英比色皿（一对）95%95%乙醇（乙醇（A.RA.R）0.005%0.005%丹皮酚对照品溶液丹皮酚对照品溶液四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤丹皮酚对照品丹皮酚对照品10mg10mg9595乙醇溶解乙醇溶解定容至定容至10ml10ml摇匀摇匀精密吸取精密吸取5ml5ml置置100ml100ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容作为母液备用作为母液备用母液中丹皮酚的含量为母液中丹皮酚的含量为0.005%0.005%1 1、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘精密吸取母液精密吸取母液1ml1ml置置10ml10ml量瓶量瓶9595乙醇定容乙醇定容以以9595乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。2 2、吸收曲线的测绘、吸收曲线的测绘 利用上述溶液，在利用上述溶液，在274nm274nm波长处测定其吸光度并计算波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。百分吸收系数。实验三实验三 分光光度法测定槐花中分光光度法测定槐花中总黄酮的含量总黄酮的含量一、实验目的一、实验目的 1 1、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法 2 2、巩固紫外可见分光光度计的操作方法、巩固紫外可见分光光度计的操作方法二、实验原理二、实验原理 黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。析。三、仪器与试剂三、仪器与试剂 UV UV11001100型紫外可见分光光度仪型紫外可见分光光度仪 石英比色皿（一对）石英比色皿（一对）5%NaNO 5%NaNO2 2溶液溶液 10%Al(NO 10%Al(NO3 3)3 3溶液溶液 NaOH NaOH试液试液 芦丁对照品芦丁对照品 槐花药材槐花药材 其余试剂均为分析纯；其余试剂均为分析纯；四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤1 1、对照品溶液的制备、对照品溶液的制备加甲醇，水浴使溶解加甲醇，水浴使溶解芦丁对照品芦丁对照品50mg50mg置置25ml25ml量瓶中量瓶中放冷，加甲醇至刻度，摇匀放冷，加甲醇至刻度，摇匀精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度，摇匀加水至刻度，摇匀即得（每即得（每1ml1ml中含无水芦丁中含无水芦丁0.2mg0.2mg）2 2、标准曲线的制备、标准曲线的制备精密量取对照品溶液精密量取对照品溶液0 0、1 1、2 2、3 3、4 4、5ml5ml分别置分别置25ml25ml量瓶中量瓶中各加各加H H2 2O O加加5%NaNO5%NaNO2 2 1ml 1ml摇匀摇匀放置放置6min6min10%Al(NO10%Al(NO3 3)3 3 1ml 1ml摇匀摇匀放置放置6min6min加加加加NaOHNaOH试液试液 10ml10ml加水至刻度加水至刻度摇匀，放置摇匀，放置15min15min至至5ml5ml=500nm=500nm以相应试剂为空白以相应试剂为空白测定吸光度（测定吸光度（A A）以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线吸吸光光度度浓度（浓度（mg/mlmg/ml）3 3、供试品溶液的制备、供试品溶液的制备槐花粗粉槐花粗粉1g1g精密称定精密称定置置索氏提取器中索氏提取器中加加乙醚乙醚加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色放冷放冷弃乙醚液弃乙醚液加加甲醇甲醇90ml90ml加热回流至加热回流至提取液无色提取液无色移至移至100ml100ml量瓶中量瓶中甲醇少量多次洗涤容器甲醇少量多次洗涤容器洗液并入量瓶中洗液并入量瓶中加甲醇至刻度加甲醇至刻度摇匀摇匀精密吸取精密吸取10ml10ml置置100ml100ml量瓶中量瓶中加水至刻度，摇匀加水至刻度，摇匀即得即得4 4、样品的测定、样品的测定精密吸取供试品溶液精密吸取供试品溶液3ml3ml置置25ml25ml量瓶中量瓶中照标准曲线制备项下的方法照标准曲线制备项下的方法自自“加水至加水至5ml”5ml”起起从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得从标准曲线上求出供试品溶液中芦丁的重量，即得依法测定吸光度依法测定吸光度槐花中含总黄酮以无水芦丁（槐花中含总黄酮以无水芦丁（C C2727H H3030O O1616）计，）计，不得少于不得少于8.0%8.0%。五、注意事项五、注意事项 1 1、对照品和样品应同时显色、对照品和样品应同时显色 2 2、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确六、思考题六、思考题 1.1.分光光度法有哪些影响因素？分光光度法有哪些影响因素？2.2.试述标准曲线法的优点。试述标准曲线法的优点。实验四、薄层板的制备实验四、薄层板的制备一、实验目的一、实验目的掌握薄层板的制板方法。掌握薄层板的制板方法。二、仪器与试剂二、仪器与试剂天平（天平（0.1g）研钵研钵玻璃板玻璃板 10 cm20cm CMC-Na水溶液水溶液（3）蒸馏水蒸馏水 薄层层析用硅胶薄层层析用硅胶GF254（青岛海（青岛海洋化工厂）洋化工厂）三、实验内容及操作步骤三、实验内容及操作步骤 1.洗板洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。放置在干净、平整的台面上，阴干备用。2匀浆匀浆 将吸附剂将吸附剂1份（份（3.0g）和）和水水3份在研钵中向同一方向研磨混合份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。均匀。3 3铺制铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。4 4活化活化 将阴干的薄层板至于将阴干的薄层板至于110110烘箱中活化烘箱中活化3030分钟，置于有干燥器中分钟，置于有干燥器中备用。备用。四、思考题四、思考题 1薄层板的铺制过程中应薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？注意哪些问题？实验五实验五 薄层色谱定性分薄层色谱定性分析析 （五味子的定性鉴别）（五味子的定性鉴别）一、实验目的一、实验目的 1.掌握薄层色谱的定性分析方法掌握薄层色谱的定性分析方法。2.熟悉薄层板的点样方法。熟悉薄层板的点样方法。二、实验原理二、实验原理 中药五味子中，五味子甲素为其主要有中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。性鉴别的依据。五味子植株五味子植株五味子药材五味子药材三、仪器与试剂三、仪器与试剂定量毛细管定量毛细管已制备好的薄层板（硅胶已制备好的薄层板（硅胶GF254）展开缸展开缸 所用试剂均为分析纯所用试剂均为分析纯五味子粉末五味子粉末定量毛细管定量毛细管双槽展开缸双槽展开缸对对 照照 品品四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤1.供试品液的制备：取五味子粉末供试品液的制备：取五味子粉末1g，加三氯甲烷，加三氯甲烷20ml，加热回，加热回流流30分钟，滤过，滤液蒸干，残分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为使溶解，作为供试品液。供试品液。2.对照药材溶液的制备：取五味子对照药材溶液的制备：取五味子对照药材对照药材1g，同法制成对照药材，同法制成对照药材溶液。溶液。3.对照品溶液的制备：取五味子甲对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每素对照品，加三氯甲烷制成每ml含含1mg的对照品溶液。的对照品溶液。4.吸取上述三种溶液各吸取上述三种溶液各2l，点于同一硅胶，点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（薄层板上，以石油醚（3060）甲酸乙酯甲酸（甲酸乙酯甲酸（15 5 1）的上层溶）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。显相同颜色的斑点。五、思考题五、思考题 1如何克服薄层展开过程中的边如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？些？实验六、高效液相色谱仪的使用一、实验目的掌握高效液相色谱仪的使用方法了解高效液相色谱仪的结构高效液相流程图1 1 溶剂贮器溶剂贮器,2,2 泵泵,3,3 流量与速度检测装置流量与速度检测装置,4 4 进样阀进样阀,5,5 预柱预柱(保护柱保护柱),6),6 分离柱分离柱(色谱柱色谱柱),),7 7 检测器检测器,8,8 数据记录及处理系统数据记录及处理系统,9,9 废液瓶废液瓶二、仪器与试剂n nL-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器）n nC1818反相键合色谱柱（250mm4.6mm）n n微量进样器（25l）n n过滤器（0.45m）及脱气装置n n苯、甲苯、萘n n甲醇（色谱纯）n n重蒸馏水三、实验内容与步骤（一）流动相的预处理 1 1过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2 2对抽滤后的流动相进行超声脱气对抽滤后的流动相进行超声脱气10-2010-20分钟。分钟。（二）安装色谱柱 按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。（三）液相色谱仪的使用方法液相色谱仪的使用方法 1.1.启动液相色谱仪启动液相色谱仪2.2.排除管道内空气排除管道内空气3.3.泵流速的设定泵流速的设定4.4.检测器波长的设定检测器波长的设定5.5.打开打开T2000PT2000P色谱工作站色谱工作站6.6.色谱柱预平衡色谱柱预平衡7 7进样进样8.8.数据采集完毕后，点击停止进样数据采集完毕后，点击停止进样9.9.点击点击“再处理再处理”和和“报告报告”图标对图谱进行再处图标对图谱进行再处理，出报告图理，出报告图10.10.实验完毕后冲洗色谱柱实验完毕后冲洗色谱柱11.11.关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源关闭仪器电源n n练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量n n色谱条件流动相为甲醇水（8020）；固定相:C18反相键合色谱柱；n n检测波长为254nm；n n流速：1ml/min。n n样品溶液含苯、甲苯、萘浓度分别为1g/ml的甲醇溶液。n n进样量：10l。四、思考题流动相在洗脱前为何要进行脱气？一、实验目的 1.掌握利用高效液相色谱法进行定性 及定量分析。2.巩固高效液相色谱仪的使用方法。实验七、高效液相色谱定性及定量分实验七、高效液相色谱定性及定量分析析中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定含量测定二、实验原理 1.采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。2.采用外标一点法进行含量测定。三、仪器与试剂 L-2000液相色谱仪（L-2400紫外检测器）C18反相键合色谱柱（250 mm4.6 mm）微量进样器（25l）芍药苷对照品；赤芍药材 其余试剂均为分析纯 四、实验内容及操作步骤 色谱条件 C18反相键合色谱柱；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（4065）；检测波长为230nm。对照品溶液的制备 精密称取五氧化二磷干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇配制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10l，注入液相色谱仪，测定，即得。本品含芍药苷（C23H28O11）不得少于1.8%。五、思考题1外标一点法的主要误差来源是什么？2紫外检测器的优缺点是什么？实验八、气相色谱仪的使用实验八、气相色谱仪的使用一、实验目的1.掌握气相色谱仪的使用方法2.了解气相色谱仪的结构二、实验原理二、实验原理 气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。三、仪器与试剂三、仪器与试剂n n岛津GC-2014气相色谱仪（FID检测器）n n樟脑对照品溶液n n试剂均为A.R纯四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤（一）启动（一）启动GC-2014气相色谱仪气相色谱仪（二）参数的设定（二）参数的设定（三）打开（三）打开N2000色谱工作站色谱工作站（四）运行（四）运行GC-2014气相色谱仪气相色谱仪（五）进样（五）进样（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；（七）待样品分析结束后，在离线处理数（七）待样品分析结束后，在离线处理数据，察看数据报告，打印报告。据，察看数据报告，打印报告。（八）关机（八）关机n n附:练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量n n色谱条件：聚乙二醇（PEG）-20M毛细管柱（柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25m）；柱温为160。n n 样品溶液 樟脑对照品溶液。n n 进样量：1l。n n五、思考题使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？实验九、气相色谱法定性及定量分析实验九、气相色谱法定性及定量分析实验九、气相色谱法定性及定量分析实验九、气相色谱法定性及定量分析樟脑、冰樟脑、冰樟脑、冰樟脑、冰片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定一、实验目的n n掌握采用内标法进行定量分析的方法掌握采用内标法进行定量分析的方法 n n熟悉利用气相色谱仪进行定性分析熟悉利用气相色谱仪进行定性分析二、实验原理二、实验原理 实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留值进行定性。值进行定性。利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造成的误差。成的误差。三、仪器与试剂三、仪器与试剂n n 岛津岛津GC-2014GC-2014气相色谱仪（气相色谱仪（FIDFID）；）；n n10l 10l 微量进样器；微量进样器；n n内标物：萘；内标物：萘；n n樟脑对照品；樟脑对照品；n n混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）；混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）；n n其余试剂均为其余试剂均为A.RA.R纯；纯；四、实验内容及操作步骤四、实验内容及操作步骤n n仪器条件仪器条件 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）-20M-20M毛细管柱（柱长毛细管柱（柱长30m30m、内、内径径0.25mm0.25mm、膜厚度、膜厚度0.25 m0.25 m），柱温），柱温160160。n n校正因子的测定校正因子的测定 取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成每取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml1ml含含4mg4mg的溶液，作为内标溶液。取樟脑对照品的溶液，作为内标溶液。取樟脑对照品6mg6mg置置10ml10ml量瓶中，精密加入内标溶液量瓶中，精密加入内标溶液1ml1ml，加无水乙醇稀释至刻，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取度，摇匀。吸取1l1l，注入气相色谱仪，计算校正因子。，注入气相色谱仪，计算校正因子。n n测定法测定法 精密吸取样品溶液精密吸取样品溶液1ml1ml，置，置50ml50ml量瓶中，精密加量瓶中，精密加入内标溶液入内标溶液5ml5ml，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取1l1l，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。注入气相色谱仪，测定，计算，即得。五、思考题五、思考题 1内标法定量的优点是什么？2内标法定量有哪些不足？