土壤中分解尿素的细菌的分离和计数时.pptx

第1页/共20页阅读课本阅读课本P23-P26，根据导学案，根据导学案的提示，完成以下问题。的提示，完成以下问题。1.1.实验设计包括哪些内容？实验设计包括哪些内容？2.2.实验设计的流程是什么？实验设计的流程是什么？3.3.每一步是如何操作的？注意事每一步是如何操作的？注意事 项是什么？项是什么？4.4.如何进行结果分析与评价？如何进行结果分析与评价？第2页/共20页小组互对答案，对有疑问小组互对答案，对有疑问的问题相互讨论，并确定的问题相互讨论，并确定发言人，按导学案上的要发言人，按导学案上的要求完成本组的问题展示。求完成本组的问题展示。第3页/共20页实验设计包括对、和，以及等的综合考虑和安排。实验方案实验方案所需仪器所需仪器材料材料用具用具药品药品具体的实施步骤具体的实施步骤时间安排时间安排第4页/共20页一、实验设计流程一、实验设计流程土壤取样制备培养基样品稀释取样涂布微生物的培养与观察细菌计数第5页/共20页注意事项：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。二二.实验的具体操作及注意实项实验的具体操作及注意实项土壤取样土壤取样从从肥沃、湿润、酸碱度接近中性肥沃、湿润、酸碱度接近中性的土壤中取样。先的土壤中取样。先铲去表层土铲去表层土3cm3cm左右，再在距离地表左右，再在距离地表3cm-8cm3cm-8cm处取样，处取样，将样品装入事先准备好的信封中。将样品装入事先准备好的信封中。制备培养基制备培养基制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基蛋白胨培养基。注意事项：倒平板时要冷却到注意事项：倒平板时要冷却到50，且要，且要在在酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁进行。进行。第6页/共20页注意事项：注意事项：（三）样品的稀释（三）样品的稀释应在火焰旁称取土壤10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不同的微生物采用不同的稀释度第7页/共20页测定土壤中细菌的数量，一般选用104，105，106 测定放线菌的数量，一般选用103，104 ，105 测定真菌的数量，一般选用102，103，104 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？原原因因：不不同同微微生生物物在在土土壤壤中中含含量量不不同同.例例如如在在干干旱旱土土壤壤中中的的上上层层样样本本中中：好好氧氧及及兼兼性性厌厌氧氧细细菌菌数数约约为为21852185万万，放放线线菌菌数数约约为为477477万万，霉霉菌菌数数约约为为23.123.1万。万。第8页/共20页取样涂布取样涂布注意事项：实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。注意事项：涂布器和移液管要保持无菌。如果得如果得到了到了2 2 2 2个或个或2 2 2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的平板，则说的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确精确，需要重新实验。，需要重新实验。第9页/共20页微生物的培养与观察微生物的培养与观察培养：不同微生物往往需要不同培养温度。细菌：30303737培养1 12d2d放线菌：25252828培养5 57d7d霉菌：25252828的温度下培养3 34d4d。观察：在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。包括：形状、大小、隆起程度和颜色。第10页/共20页微生物的培养与观察微生物的培养与观察第11页/共20页（六）细菌计数（六）细菌计数在菌落计数时，每隔24h24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。第12页/共20页三、操作提示三、操作提示 无菌操作无菌操作 做好标记做好标记 规划时间规划时间 第13页/共20页四.结果分析与评价内容内容现象现象结论结论有无杂菌污有无杂菌污染的判断染的判断对照的培养皿中无菌对照的培养皿中无菌落生长落生长培养物中菌落数偏高培养物中菌落数偏高菌落形态多样，菌落菌落形态多样，菌落数偏高数偏高选择培养基选择培养基的筛选作用的筛选作用选择培养基具有筛选作用选择培养基具有筛选作用样品的稀释样品的稀释操作操作操作成功操作成功重复组的结果重复组的结果若选取同一种土样，统计结果应若选取同一种土样，统计结果应培养基未被杂菌污染培养基未被杂菌污染被杂菌污染被杂菌污染被杂菌污染或被杂菌污染或混入其他氮源混入其他氮源牛肉膏培养基上的菌牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养落数目大于选择培养基上的数目基上的数目得到三个或三个得到三个或三个以上菌落数目在以上菌落数目在30300的平板的平板接近接近第14页/共20页五.课外延伸在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PHPH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。第15页/共20页3.3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是()()A.A.筛选出能分解尿素的细菌B.B.对分离的菌种作进一步鉴定C.C.作细菌的营养成分 D.D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素当堂检测当堂检测1.1.能够测定样品活菌数的方法是能够测定样品活菌数的方法是()()A.A.稀释涂布平板法稀释涂布平板法 B.B.直接计数法直接计数法C.C.重量法重量法 D.D.比浊法比浊法2.2.下列操作步骤顺序正确的是下列操作步骤顺序正确的是()()土壤取样土壤取样称取称取10g10g土样，加入盛有土样，加入盛有90mL90mL无菌水的锥形瓶无菌水的锥形瓶中中吸取吸取0.1mL0.1mL土壤溶液进行平板涂布土壤溶液进行平板涂布依次稀释至依次稀释至101、102、103 、104、105、106、107稀释度稀释度A.B.A.B.C.D.C.D.ACB第16页/共20页4.(2016四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程,请据图回答下列问题：(1)图中选择培养基应以_为唯一氮源,鉴别培养基还需添加_作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成_色。(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为163、156、262、178和191。该过程采取的接种方法是_，每克土壤样品中的细菌数量为_108个；与血细胞计数板相比，此计数方法测得的细菌数目较_。尿素尿素酚红酚红红红稀释涂布平板法稀释涂布平板法1.91.9少少第17页/共20页5.(20155.(2015浙江自选模块，1717节选)某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，对该酶菌株进行筛选，其流程如下图所示。请回答下列问题：(1)(1)土壤悬液首先经8080处理1515分钟，其目的是筛选出_。(2)(2)在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行_，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到_(3)(3)筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是_。液体培养基与固体培养基相比，不含有的成分是_。土样中的菌种筛选土样中的菌种筛选菌株鉴定菌株鉴定优良菌株扩大培养优良菌株扩大培养植酸酶提纯植酸酶提纯植酸酶固定化植酸酶固定化植酸酶特性分析植酸酶特性分析耐高温菌株耐高温菌株稀释稀释单个菌落单个菌落供氧供氧琼脂琼脂第18页/共20页课后作业课后作业（一）空气中微生物总数的检测（一）空气中微生物总数的检测（二）水中细菌总数的检测（二）水中细菌总数的检测（三）牛奶中细菌的分离与计数（三）牛奶中细菌的分离与计数（四）土壤中真菌（或放线菌）（四）土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数的分离与计数第19页/共20页感谢您的观看！第20页/共20页