《Rh血型鉴定试验》PPT课件.ppt

Rh血型鉴定血型鉴定l Rh抗原种类抗原种类l 到目前为止已发现到目前为止已发现40多种多种Rh抗原，但抗原，但与临床关系最为密切的只有与临床关系最为密切的只有5种，按其抗种，按其抗原性强弱依次为原性强弱依次为D、E、C、c、e，5种抗种抗原中原中D的抗原性最强对临床更为重要。临的抗原性最强对临床更为重要。临床上习惯将含床上习惯将含D抗原的红细胞称抗原的红细胞称Rh阳性；阳性；不含不含D抗原的红细胞称抗原的红细胞称Rh阴性。阴性。Rh血型系统抗体血型系统抗体l Rh血型系统抗体主要有血型系统抗体主要有5种，即抗种，即抗D、抗抗E、抗抗C、抗抗c、抗抗e，其中最常见的是抗其中最常见的是抗D，其余其余4种依次是抗种依次是抗E，抗抗c，抗抗C，抗抗e，后两种较为少见。在临床输血中，一般只后两种较为少见。在临床输血中，一般只做做D抗原鉴定，凡被检红细胞和抗抗原鉴定，凡被检红细胞和抗D血清血清凝集者为凝集者为Rh阳性，不凝集为阳性，不凝集为Rh阴性。目阴性。目前已研制出单克隆抗前已研制出单克隆抗D，可用于可用于Rh血型鉴血型鉴定。定。Rh血型鉴定方法血型鉴定方法l Rh血型系统中主要有血型系统中主要有5种抗原，除特殊要种抗原，除特殊要求外，一般只用抗求外，一般只用抗D血清检查有无血清检查有无D抗原。抗原。一般生理条件下一般生理条件下Rh抗体属抗体属IgG型抗体，不型抗体，不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此必须采用其它技术，常用的方法有以下几必须采用其它技术，常用的方法有以下几种：种：1酶介质法酶介质法l木瓜酶木瓜酶(或菠萝酶或菠萝酶)可以破坏红细胞表面电荷的可以破坏红细胞表面电荷的唾液酸，降低其表面电荷从而减少红细胞间排唾液酸，降低其表面电荷从而减少红细胞间排斥力，使得红细胞相互靠拢；同时酶还可以部斥力，使得红细胞相互靠拢；同时酶还可以部分地改变红细暴露，这样在相应的不完全抗体分地改变红细暴露，这样在相应的不完全抗体作用下，就可促进作用下，就可促进Rh血型系统的抗原与抗体血型系统的抗原与抗体反应，使红细胞发生凝集。酶介质法有一期法反应，使红细胞发生凝集。酶介质法有一期法(直接法直接法)与二期法与二期法(间接法间接法)。酶介质法总的特。酶介质法总的特点是简单，经济，但较费时，准确性和稳定性点是简单，经济，但较费时，准确性和稳定性较差，尤其要注意因木瓜酶能破坏红细胞上的较差，尤其要注意因木瓜酶能破坏红细胞上的M、N、S抗原的结构，破坏其抗原性，所以抗原的结构，破坏其抗原性，所以不能用于检查此类系统。不能用于检查此类系统。2抗球蛋白试验抗球蛋白试验(Coombs test)l不完全抗体与含相应抗原的红细胞结合，但不不完全抗体与含相应抗原的红细胞结合，但不引起红细胞凝集称致敏红细胞。在盐水介质中引起红细胞凝集称致敏红细胞。在盐水介质中不完全抗体只能致敏红细胞，使用抗球蛋白抗不完全抗体只能致敏红细胞，使用抗球蛋白抗体后，致敏红细胞表面的球蛋白与抗球蛋白抗体后，致敏红细胞表面的球蛋白与抗球蛋白抗体相遇则发生特异性凝集反应。目前抗球蛋白体相遇则发生特异性凝集反应。目前抗球蛋白抗体有：用人球蛋白免疫动物产生的抗体，另抗体有：用人球蛋白免疫动物产生的抗体，另外单克隆杂交瘤技术也用于某些抗球蛋白抗体外单克隆杂交瘤技术也用于某些抗球蛋白抗体的制备，用于血型血清学中对不完全抗体的检的制备，用于血型血清学中对不完全抗体的检测。抗球蛋白试验又分为直接抗球蛋白试验和测。抗球蛋白试验又分为直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验间接抗球蛋白试验。3凝聚胺试验凝聚胺试验(polybrene test)l凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解凝聚胺是一种高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后产生正电荷，可中和红细胞表面带负电荷的后产生正电荷，可中和红细胞表面带负电荷的唾液酸，减少细胞间排斥力，使红细胞发生非唾液酸，减少细胞间排斥力，使红细胞发生非特异性凝集。正常红细胞可引起非特异性凝集特异性凝集。正常红细胞可引起非特异性凝集为可逆性的，如果是抗体致敏红细胞被凝聚胺为可逆性的，如果是抗体致敏红细胞被凝聚胺凝集，则是特异性的不可逆的凝集。本法的特凝集，则是特异性的不可逆的凝集。本法的特点是快速，灵敏，适用于临床交叉配血，尤其点是快速，灵敏，适用于临床交叉配血，尤其是提高了是提高了Rh血型系统抗原抗体反应的强度，血型系统抗原抗体反应的强度，使其检出更为灵敏。使其检出更为灵敏。4人源盐水介质抗人源盐水介质抗D试验试验l人源盐水介质抗人源盐水介质抗D试剂，是采用二硫苏试剂，是采用二硫苏糖醇等物质作为免疫球蛋白化学变性剂，糖醇等物质作为免疫球蛋白化学变性剂，处理采自人源的处理采自人源的IgG类抗类抗D血清，使小分子血清，使小分子IgG抗体抗体“转变转变”成类似大分子的成类似大分子的“IgM抗体的作用，可用于抗体的作用，可用于Rh血型系统血型系统D血型的快速检测。本法简单、省时、特血型的快速检测。本法简单、省时、特异性强、敏感性高、试验结果准确可靠及异性强、敏感性高、试验结果准确可靠及试剂保存时间长。试剂保存时间长。5低离子强度低离子强度(盐盐)溶液试验溶液试验（LISS）l介质的离子强度是影响抗体结合红细胞抗介质的离子强度是影响抗体结合红细胞抗原能力的重要因素，当降低介质的离子强原能力的重要因素，当降低介质的离子强度时，就减少了红细胞周围的阳离子，从度时，就减少了红细胞周围的阳离子，从而促进带正电荷的而促进带正电荷的IgG与带负电荷的红细与带负电荷的红细胞发生反应。胞发生反应。单克隆单克隆IgM型抗型抗D鉴定鉴定Rh血型血型l原理：见试剂盒原理：见试剂盒l方法：见试剂盒方法：见试剂盒l注意事项：见试剂盒注意事项：见试剂盒Rh血型鉴定质量控制血型鉴定质量控制l 严格设定对照系统包括试剂对照和抗原阳严格设定对照系统包括试剂对照和抗原阳性、阴性对照，并对采用的试验介质、浓性、阴性对照，并对采用的试验介质、浓度、温度、离心条件，反应时间等严格控度、温度、离心条件，反应时间等严格控制。制。Rh血型鉴定的临床意义血型鉴定的临床意义 1输血前的检查输血前的检查l 2新生儿溶血病诊断新生儿溶血病诊断 由于由于IgG类的类的Rh抗体易抗体易通过胎盘，从而破坏胎儿相应抗原红细胞，引起通过胎盘，从而破坏胎儿相应抗原红细胞，引起严重的新生儿溶血病严重的新生儿溶血病l 3协助治疗协助治疗 当试验证实有少量当试验证实有少量Rh阳性红细胞阳性红细胞进入进入Rh阴性受血者的血循环时，可用大剂量阴性受血者的血循环时，可用大剂量Rh免疫球蛋白来防止免疫球蛋白来防止Rh阳性红细胞的免疫作用。阳性红细胞的免疫作用。