《平面色谱法》PPT课件.ppt

第十八章第十八章 平面色谱法平面色谱法1 第一节第一节 平面色谱法的分类和原理平面色谱法的分类和原理 一、平面色谱法的分类1.薄层色谱法：2.纸色谱法2二、平面色谱法参数二、平面色谱法参数定性参数：定性参数：1.比移值（比移值（Rf）：）：原点到斑点中心的距离原点到斑点中心的距离 Rf=原点到溶剂前沿的距离原点到溶剂前沿的距离 l =l0 ll03 1）K大，大，Rf小小 2）薄层板一定，对于极性组分）薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性展开剂极性大，大，Rf大（容易洗脱）大（容易洗脱）展开剂极性展开剂极性小，小，Rf小小（不容易洗脱）（不容易洗脱）3）Rf范围：范围：0 Rf 1 （组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离）（组分迁移速度和距离小于展开剂迁移速度和距离）Rf（常用）（常用）（最佳）（最佳）讨论：讨论：42.相对比移值（Rr）：原点到样品斑点中心的距离 Rr=原点到参考物质斑点中心的距离目的：消除系统误差5第二节第二节 薄层色谱法薄层色谱法、分类和原理、分类和原理6 二、吸附薄层色谱法(一)吸附剂1.硅胶：-SiOH 特点：(1)吸附力与含水量有关。含水量高吸 附力下降。(2)微酸性 (3)分离酸性或中性物质，如有机酸、氨 基酸、甾体7 种类：种类：硅胶硅胶H：不含粘合剂，制板时需另加粘含剂。不含粘合剂，制板时需另加粘含剂。硅胶硅胶G：硅胶和煅石膏混合而成。硅胶和煅石膏混合而成。硅硅胶胶HF254：不不含含粘粘结结剂剂含含剂剂,而而含含萤萤光光剂剂，在在 254 254 nmnm紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。紫外光下呈强烈黄绿色荧光背景。8 2.2.氧化铝：氧化铝：氧化铝氧化铝G G、氧化铝氧化铝H H、氧化铝氧化铝HFHF254254等等910（二）展开剂 展开剂选择的一般原则:相似相溶相似相溶 11 吸附剂和展开剂的选择吸附剂和展开剂的选择被分离物质的极性被分离物质的极性 吸附剂吸附性能吸附剂吸附性能 展开剂极性展开剂极性 小小 强强 小小 大大 弱弱 大大 12（一（一)薄层板的制备薄层板的制备 三、薄层色谱法操作方法三、薄层色谱法操作方法 吸附剂涂铺均匀薄层板要求:表面光滑 厚度一致动画动画131.载板的准备：要求：表面光滑、平整清洁。2.软板的制备：直接将吸附剂置于玻板上并使成为一均匀薄层。143.粘合薄层板（硬板）的铺制 (1)粘合剂：煅石膏 羧甲基纤维素钠（CMC-Na）(2)硬板的铺制方法：薄层板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，200250目）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度）。干燥后即可使用。154.活化:硅胶板先晾干，再在 105 110C 活化 1 小时。冷却即可使用也可保存于干燥器中备用。16（二）点样（二）点样 1.样品溶液的制备：样品溶液的制备：应尽量避免用水作溶剂，一般用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂溶解样品。2.点点样样：用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于4mm。可并排点多个试样同时展开。17 注意：注意：点样线距底边点样线距底边1.5 2cm处。处。斑点面积越小越好。斑点面积越小越好。18（三）展开（三）展开上行法：用于硬板多次展开：用于硬板径向展开：纸色谱下行法：纸色谱展开剂：展开剂：由一种或多种由一种或多种溶剂按一定比例组成。溶剂按一定比例组成。19注意：注意：点样线不能浸入展开剂中；展开时要恒温、恒湿度；展开槽和薄板须用展开剂蒸气饱和后再展开。目的：消除边缘效应目的：消除边缘效应20 边缘效应：边缘效应：同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比边缘的Rf值小。21（四）定位方法（四）定位方法1.显色法：喷洒显色剂进行显色反应使组分显色而定位。通用型显色剂：碘 硫酸溶液 荧光黄专用显色剂：茚三酮 氨基酸 酸碱指示剂 羧酸222.荧光法：吸附剂中混有荧光剂，展开后，在紫外灯下，色斑在荧光背景上呈现暗斑。23（一）定性分析方法 定性分析的依据：在固定的色谱条件下，相同物质的Rf值 相同。四四.定性与定量分析定性与定量分析24已知物对照法已知物对照法:样品与已知物对照品在同一薄层上展开，比较组分与对照品的Rf值。25（二）定量分析（二）定量分析1.洗脱测定法：斑点定位斑点取下洗脱适当方法测定。2.直接测定法：目视比较法:比较样品斑点与对照品斑点的 颜色深度或面积大小薄层扫描法:测量斑点的面积大小。26六六.薄层扫描法简介薄层扫描法简介 以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板，侧定其对光的吸受或所发出的荧光，进行定量分析的方法。27双波长薄层扫描仪光路示意图28 波长的选则：测定波长：斑点中化合物的 max 参比波长：斑点中化合物无吸收的波长 目的：消除背景吸收29图19-2 薄层色谱扫描曲线30 测光方式 a.透射法：只适用于透明薄板。b.反射法：3132 外标两点法：m样=a+b A样 b=(m1-m2)/(A1-A2)a=m1-b A133七、薄层色谱法的应用七、薄层色谱法的应用 合成药物反应速度或反应完成程度的监控；药物的杂质检查；天然药物有效成分的分离、鉴定、含量测定；少量物质的制备、提纯等。34 判断合成反应进行的程度：例：判断普鲁卡因合成反应的终点。色谱条件：固定相：硅胶-CMC 展开剂：环己烷-苯-二乙胺(8:2:0.4)显色剂：碘化铋钾35 1 2 3 4 51：盐酸普鲁卡因2：肖基卡因3：还原 2 h 取样4：还原 3 h 取样5：还原 4 h 取样还原2h，原料点完全消失，反应达终点。36第三节第三节 纸色谱法纸色谱法一一.基本原理基本原理 以纸作为载体的色谱法，属于分配色谱。固定相：固定相：纸纤维上吸附的水分或其的它物质 流动相：流动相：有机溶剂37 定性参数：Rf 值：同薄层色谱 影响Rf值的因素：1.组分的性质：组分的极性强，Rf值小。2.色谱条件 展开剂的极性 展开剂的蒸气 展开时的温度38 CHO CHO CHO HC-OH OH-CH CH2 HO-CH OH-CH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH CH2OH CH3 CH3 极性：最强 其次 最小Rf：小 中 最大39二.实验方法 1.色谱滤纸的选则：质地均匀平整无折痕，有一定的机械 强度。纸质的松紧适宜。纸质纯，无明显的荧光斑点。动画动画40 2.点样方法：同薄层色谱法 3.展开剂：水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等。41 5.定位方法：同薄层。但不能用硫酸 6.定性方法：同薄层。7.定量方法：同薄层。42