实验四酵母核糖核酸的分离与组分鉴定.ppt

实实 验验 四四 酵母核糖核酸的分离酵母核糖核酸的分离与组分鉴定与组分鉴定（P P159159）【目的】【目的】l掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法掌握分离核糖核酸的一般原理及操作方法l了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方了解核酸的组分，掌握鉴定核酸组分的方法法l酵母核酸中酵母核酸中RNARNA含量较多；含量较多；l一般提取的一般提取的RNARNA主要是主要是rRNArRNA，与蛋白结合在一起形，与蛋白结合在一起形成核糖核蛋白（成核糖核蛋白（RNPRNP）；）；lRNARNA溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不溶溶解性：溶于水，溶于稀酸、稀碱溶液，不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂；于乙醇、乙醚和氯仿等一般的有机溶剂；lRNARNA的等电点在，的等电点在，DNADNA的等电点在左右；的等电点在左右；l碱提法碱提法、盐提法、盐提法l在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，由此得到糖核酸沉淀，由此得到RNARNA的粗制品。的粗制品。【原理】【原理】l核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和核糖核酸含有核糖、碱基（嘌呤碱、嘧啶碱）和磷酸各组分。磷酸各组分。l加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中可以测出上述组分的存在。述组分的存在。l磷酸磷酸+钼酸铵钼酸铵 磷钼酸铵磷钼酸铵l核糖核糖+地衣酚试剂地衣酚试剂 墨绿色化合物墨绿色化合物l嘌呤碱嘌呤碱+硝酸银硝酸银 嘌呤银化物（白色）嘌呤银化物（白色）【原理】【原理】【试剂和器材】【试剂和器材】l器材器材l研钵研钵l刻度试管、普通试管刻度试管、普通试管l刻度离心管刻度离心管l搅拌棒搅拌棒l量筒、移液管、滴管量筒、移液管、滴管l恒温水浴锅恒温水浴锅l台式离心机台式离心机【试剂和器材】【试剂和器材】l试试剂剂l酵母片酵母片l溶液溶液l2 2SOSO4 4溶液溶液l冰醋酸冰醋酸l浓氨水浓氨水l95%95%乙醇乙醇l3 3溶液溶液l三氯化铁浓盐酸溶液三氯化铁浓盐酸溶液l苔黑酚乙醇溶液苔黑酚乙醇溶液l定磷试剂定磷试剂（一）（一）RNARNA的提取的提取【实验方法】【实验方法】3 3片干酵母片片干酵母片于研钵中充分研磨于研钵中充分研磨放入刻度试管放入刻度试管加加10mL10mL沸水浴加热沸水浴加热30min30min(搅拌搅拌)取出加乙酸取出加乙酸4 4滴滴，使，使提取液呈酸性提取液呈酸性2500rpm2500rpm,离心离心15min15min,弃沉淀弃沉淀取上清加入取上清加入等体积等体积95%95%乙乙醇醇，边加边搅拌，边加边搅拌静置静置5min5min2500rpm2500rpm,离心离心5min5min,弃上清弃上清沉淀即为沉淀即为RNARNA粗制品粗制品 lRNARNA粗制品粗制品+5mL5mL2 2SOSO4 4，沸水浴加热沸水浴加热10min10min，制成水，制成水解液。解液。l组分鉴定组分鉴定l嘌嘌呤呤碱碱：1mL1mL水水解解液液+5 5滴滴浓浓氨氨水水+1mL1mL3 3，观观察察有有无白色絮状嘌呤银化物沉淀。无白色絮状嘌呤银化物沉淀。l核核糖糖：1mL1mL水水解解液液+2mL2mLFeClFeCl3 3-HCl+-HCl+苔苔黑黑酚酚乙乙醇醇，沸水浴沸水浴3min3min，观察溶液有无墨绿色出现。，观察溶液有无墨绿色出现。l磷磷酸酸：1mL1mL水水解解液液+1mL1mL定定磷磷试试剂剂，沸沸水水浴浴3min3min，观察溶液中有无蓝色沉淀生成。观察溶液中有无蓝色沉淀生成。（二）（二）RNARNA的组分鉴定的组分鉴定【实验方法】【实验方法】l说明各试管中现象说明各试管中现象l解释原因解释原因l得出结论得出结论【结果与分析】【结果与分析】lRNARNA提取实验过程中各操作步骤的作提取实验过程中各操作步骤的作用是什么？用是什么？l心得心得【讨论与心得】【讨论与心得】