非发酵革兰阴性杆菌.ppt

第九章非发酵革兰阴性杆菌第九章非发酵革兰阴性杆菌 非发酵革兰阴性杆菌，指一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧、无芽胞的革兰阴性杆菌；多为条件致病菌。近年来由该类细菌引起感染的报告日益增多，已引起临床医学及检验医学的重视。非发酵革兰阴性杆菌包括假单胞菌属、产碱杆菌属、无色杆菌属、不动杆菌属、莫拉菌属、金氏杆菌属、黄杆菌属、艾肯菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、丛毛单胞菌属等。第一节第一节 假单胞菌属假单胞菌属 假单胞菌属为需氧、有鞭毛、无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌，氧化酶试验阳性，DNA G+C为5871mol，包括200余种菌。多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。（一）分类 按 rRNA同源性分为5群及未确定rRNA同源群有关的种，其中第1群可分为：荧光假单胞菌DNA同源群、斯氏假单胞菌DNA同源群、产碱假单胞菌DNA同源群，包括铜绿假单胞等12个菌种。假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在，人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70 80，主要为铜绿假单胞菌，其他较为常见的菌种有嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些菌种也是医院感染的主要病原菌。(二二)临床意义临床意义(三)微生物特性 G-直或微弯、较细长、散在排列、无芽胞有荚膜、有端鞭毛或丛鞭毛。专性需氧，生长温度范围广442，最适生长温度为 35，普通培养基上生长，产生各种水溶性色素，如绿脓素、脓玉红素、绿脓菌荧光素、脓褐素。对理化因素耐受性较强，对多种抗生素耐药。铜绿假单胞菌广泛存在环境中，加之多种传播途径和污染，因此易感染，特别在由各种原因所致的人体抵抗力低下时引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染等，亦可导致菌血症、心内膜炎、囊性纤维变性，该菌引起的慢性肺部感染占有较大的比例；在AIDS病中，常发生感染。感染眼部的铜绿假单胞菌，可以合成胶原酶，以致引起角膜穿孔而失明。在假单胞菌属的感染中铜绿假单胞菌的感染占70。（四）铜绿假单胞菌检验 1标本采集 按疾病和检查目的，分别采 取不同的标本：患者的血液、脑脊液、胸(腹)水、脓液、分泌液、痰、尿液、十二指肠引流液、粪便等；医院病区或手术室的空气、水、地面、把手、医疗诊断器械及生活用品。2标本镜检为革兰阴性，有动力的杆菌 3分离培养 在普通培养基生长良好，经1824h形成圆形、扁平隆起、光滑湿润菌落。琼脂被染成绿色或黄绿色，约80-90产生绿脓素或荧光菌株素。4生化鉴定 氧化酶阳性，氧化分解葡萄糖、木糖产酸不产气，液化明胶，还原硝酸盐产生氮气，吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。(五)检验结果分析与报告 结合临床感染症状，患者血、尿液及无菌体液中分离到铜绿假单胞菌，特别是反复检出即可确定是感染病原菌。如无感染的临床表现，应作为正常菌群。第二节其他临床常见非发酵菌 临床常分离到不动杆菌属、产碱杆菌属、黄杆菌属、军团菌属等，而且医院感染中以上菌属均有上升趋势。（一）不动杆菌 1.为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的G-杆菌、常分离到的菌种有醋酸钙不动杆菌、洛菲不动杆菌、溶血不动杆菌等，模式菌种为醋酸钙不动杆菌。DNA G+C mol%。2.存在于正常人体的皮肤、呼吸道和泌尿道，是引起医院感染的常见病原菌，为条什致病菌，常从感染患者的血、尿、脓液及呼吸道分泌物、脑脊液等标本分离。(二)产碱杆菌属1.与临床有关的有粪产碱杆菌及亚型、皮乔特产碱杆菌、木糖氧化产碱杆菌及亚种，DNA G+C mol%为5670，典型菌种为粪产碱杆菌。2.人体的正常菌群，是医院感染的病原菌，可引起抵抗力低下患者发生败血症，并可从患者呼吸道、尿液、血液及脑脊液中分离出来。G-杆菌，呈链状、周鞭毛、有动力，无荚膜。4.在普通培养基上1824h形成无色透明菌落。氧化酶及触酶均阳性，不分解任何糖类，O-F试验碱性，脲酶阴性，不液化明胶。（三）黄杆菌属1.为一群无动力和芽胞、氧化酶阳性的G-杆菌。与临床相关菌种有短黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆菌、芳香黄杆菌、水田黄杆菌、嗜糖黄杆菌、嗜醇黄杆菌、嗜温黄杆菌。模式菌种为水田黄杆菌。2.本菌有两个特点：产生不性黄色素；分解碳水化合物产酸不产气。DNA G+C mol%含量3142。存在于水、土壤和蔬菜中，还可从口腔、上呼吸道、皮肤中检出，是条件致病菌，也是引起医院感染的常见菌。可引起术后感染、菌血症、在新生儿及婴幼儿的化脓性脑膜炎中分离出脑膜败血性黄杆菌比例较高。-杆菌，需氧代谢，血琼脂培养基生长良好，典型菌落为淡黄色，氧化酶、触酶、磷酸酶阳性。临床上常见的脑膜炎败血黄杆菌及芳香黄杆菌等对广谱抗菌药(如氨基糖甙类、-内酰胺酶类、四环素类、氯霉素)有耐药性，应根据药敏试验选择用药。(四)莫拉菌属 与临床有关的有缺陷莫拉菌、犬莫拉菌、非液化莫拉菌、亚特兰大莫拉、林肯莫拉菌、苯丙酮酸莫拉菌、奥斯陆莫拉。DNA G+Cmol为40475。本菌能引起眼结膜炎、气管炎、肺炎、脑膜炎、脑脓肿、心炎、心内膜炎及泌尿生殖系统炎症。近年来非液化莫拉菌引起脑膜炎及婴幼儿菌血症者日益多，应引起高度重视。为-球杆菌，双短链状排列，具有多形性。本菌营养要求较高，血琼脂平板上生长，无色不溶血的菌落。本菌氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解糖类，吲哚试验阴性。对青霉素类敏感，对头孢类、四环素类、氨基糖甙类药物均为敏感。(五)军团菌属 共有39种及3个亚种，60个血清型。O抗原将嗜肺军团菌分成15个血清型;将伯兹曼军团菌，菲利军团菌，长滩军团菌等分为2个血清型。常经供水系统和雾化吸人而引起肺炎型和非肺炎型感染。临床表现是多种多样的，高发于夏秋季节，易侵犯患有慢性器质性疾病或免疫功能低下患者，如恶性肿瘤、慢性支气管炎或肺气肿等患者，以及使用激素及免疫抑制剂和器官移植的患者。军团菌在机会感染或医院内感染中的位置也越来越被人们所重视。军团菌属胞内菌，能在巨嗜细胞内繁殖，所以其免疫主要是细胞免疫。-杆菌，无芽胞和荚膜，端鞭毛或侧鞭毛，严格需氧。触酶阳性，可液化明胶，不分解糖类，氧化酶阳性。嗜肺军团菌的生存能力较强，在蒸馏水中存活100天以上，在污水中可存活1年、对热和常用化学消毒剂敏感。本菌营养要求苛刻，生长缓慢，氧气含量低生长速度减慢，25-5的CO环境小生长良好，生长温度为35，最适pH 6.77.0。在活性炭-酵母浸液琼脂培养基(BCYE)上3-5天可形成1-2mm直径的光泽菌落。军团菌鉴定（1）溴甲酚紫(BCP)斑点试验 即BCP 100mg溶于1molL KOH 10ml中，配成10浓度。然用蒸馏水稀释25倍，使之成为浓度。试验时取此试剂1滴，滴于滤纸上，再刮取新培养菌，涂抹于含有BCP试剂的滤纸上，若在30s内出现蓝宝石色泽即为阳性。（2）色素产生试验 产生的色素可分为在培养基中产生的褐色素；细胞外荧光，该荧光是由细菌分泌的种化合物进人琼脂培养基中而形成的，用长波紫外线照射时可出现黄色或黄绿色荧光；细胞内荧光，在紫外线照射时，细菌菌落呈蓝白色或暗黄色荧光。抗体检测 作为检测军团菌感染临床常用手段，检测病人血清中抗军团菌lgM及lgG抗体做出特异性诊断。lgM抗体为近期感染，lgG抗体在体内持续数月，供流行病学的调查。药物敏感试验 临床治疗药物为红霉素，可加用利福平，而氨基糖甙类抗生素、青霉素、头孢菌素类抗生素对本菌无效。药物敏感试验不做临床常规化验项目。