仪分实验-荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量解析.ppt

2022/11/22实验报告格式实验报告格式1、实验目的（简单）、实验目的（简单）2、实验原理（详细）、实验原理（详细）3、试剂仪器（简单）、试剂仪器（简单）4、实验步骤（简单）、实验步骤（简单）5、数据处理（详细，表格，图）数据处理（详细，表格，图）6、结果讨论、结果讨论（重点）（重点）、回答思考题的问题、回答思考题的问题 、讨论引入误差的原因、讨论引入误差的原因 、实验操作中的注意事项及减小误差的方法、实验操作中的注意事项及减小误差的方法荧光法测定维生素荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量药物中核黄素含量实验二实验二维维生素生素B22022/11/22维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。稀释后稀释后有强烈荧光，有强烈荧光，维生素维生素B2溶液在溶液在430440 nm蓝光的照蓝光的照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为射下，发出绿色荧光，其峰值波长为525 nm。一、实验原理一、实验原理 2022/11/22（1）定量依据：维生素B2在水中是强的荧光物质，并且在在低浓度低浓度时，荧光强度与维生素B2浓度呈正比：If=kc （2）定量方法（标准曲线法）：测定一系列已如浓度的维生素B2的荧光强度，然后以荧光强度对维生素B2浓度作标准曲线，再测定未知浓度维生素B2的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。If=kc 荧光强度荧光强度 vs.vs.浓度标准曲线浓度标准曲线荧光强度荧光强度核黄素浓度核黄素浓度样本样本二、二、实验仪器实验仪器2022/11/22 测量荧光的测量荧光的仪器主要由仪器主要由四个四个部分部分组成：激发组成：激发光源、样品池、光源、样品池、双单色器系统、双单色器系统、检测器。检测器。特殊点特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。三、实验步骤及注意事项三、实验步骤及注意事项吸量管的使用，吸量管的使用，溶液转移，定容溶液转移，定容同样条件下测定同样条件下测定读取荧光数据读取荧光数据荧光仪的操作，发射光谱荧光仪的操作，发射光谱和激发光谱绘制和激发光谱绘制I If f对浓度对浓度C C拟合拟合标准曲线标准曲线4.4.数据数据处理处理2.2.标准标准溶液荧溶液荧光测定光测定3.3.未知未知样品荧样品荧光测定光测定1.1.配制标配制标准溶液准溶液移液管的使用移液管的使用常见移液管：标有常见移液管：标有温度和容量温度和容量(注意是注意是否标有否标有吹吹)用途：用途：准确移取一准确移取一定体积的液体定体积的液体操作：操作：洗涤洗涤(蒸馏水蒸馏水)、润洗、润洗(3次次)、移液、移液、洗涤干净洗涤干净注意事项：注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2、读数、读数时视线与凹液面平齐时视线与凹液面平齐溶液下端溶液下端1-2cm1.1.打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。始化仪器。始化仪器。始化仪器。2.2.仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。当的仪器参数：确定激发波长和发射波长。3.3.样品测定。样品测定。样品测定。样品测定。4.4.退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。基本操作基本操作四、数据处理四、数据处理2022/11/22浓浓度（度（10-1 g.mL-1）012345X荧荧光光强强度度扣除空白扣除空白1.原始数据2.标准曲线的绘制和未知样品的浓度计算五、实验注意事项五、实验注意事项1.实验过程中，注意使用石英比色池时必须保持四面干净，拿稳棱角注意不要摔落;2.实验完毕，注意检查仪器是否运行正常，关闭程序是否正确。3.试剂取后，得放回原处，保持试验台整洁。2022/11/221.为什么荧光光度法较吸收光度法灵敏度高？2.维生素B2在pH=67时荧光最强，本实验为何在酸性溶液中测定？3.如何绘制激发光谱和荧光发射光谱？4.哪些因素可能影响维生素B2的荧光强度？2022/11/22六、实验思考题