气相色谱法和高效液相色谱法.pptx

1应用举例应用举例(HPLC)第1页/共77页2 第一节 概 述 色谱法早在色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特（年由俄国植物学家茨维特（Tsweett)分离植物色素时采用。后来不仅用于分离有分离植物色素时采用。后来不仅用于分离有色物质，还用于分离无色物质，并出现了种类繁多的各种色谱法。许多气体、液体和固体样品都能找色物质，还用于分离无色物质，并出现了种类繁多的各种色谱法。许多气体、液体和固体样品都能找到合适的色谱法进行分离和分析。目前色谱法已广泛应用于许多领域，成为十分重要的分离分析手段。到合适的色谱法进行分离和分析。目前色谱法已广泛应用于许多领域，成为十分重要的分离分析手段。第2页/共77页3茨维特的实验第3页/共77页4石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱概述色谱法：利用组分在两相间分配系数不同而进行分离的技术流动相：在管内自上而下连续流动的流体（液体或气体）。固定相：装填在玻璃管或金属管中固定不动的一相。色谱柱：装填有固定相的玻璃管或金属管。第4页/共77页5概述不不管管属属于于哪哪一一类类色色谱谱法法，其其共共同同的的基基本本特特点点是是具具备备两两个个相相：不不动动的的一一相相，称称一一为为固固定定相相；另另一一相相是是携携带带样样品品流流过过固固定定相相的的流流动动体体，称称为为流流动动相相。当当流流动动相相中中样样品品混混合合物物经经过过固固定定相相时时，就就会会与与固固定定相相发发生生作作用用，由由于于各各组组分分在在性性质质和和结结构构上上的的差差异异，与与固固定定相相相相互互作作用用的的类类型型、强强弱弱也也有有差差异异，因因此此在在同同一一推推动力的作用下，不同组分在固定相动力的作用下，不同组分在固定相滞留滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。第5页/共77页6色谱法分类1按两相状态分类气相色谱（气相色谱（GCGC）：）：流动相为气体的色谱法。根据固定相是固体吸附剂还是固定液（附着在惰性载体上的一薄层有机化合物液体），又可分为气固色谱（气固色谱（GS CGS C）和气液色谱（）和气液色谱（GLCGLC）液相色谱（液相色谱（LCLC）：）：流动相为液体的色谱法。同理，液相色谱亦可分为液固色谱（液固色谱（LSCLSC）和液液色谱）和液液色谱（LLCLLC）超临界流体色谱（超临界流体色谱（SFCSFC）：）：流动相为超临界流体的色谱法。第6页/共77页7色谱法分类2按分离机理分类利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离的方法，称为法，称为吸附色谱法。吸附色谱法。利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称为分分配色谱法。配色谱法。利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分离的方法，称为方法，称为离子交换色谱法。离子交换色谱法。利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方法，称为称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白质的分离。分离。第7页/共77页8色谱法分析的基本原理一、分配系数一、分配系数K Kp p和分配比和分配比k k 1 1分配系数分配系数 Kp Kp 如前所述，分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配过程，而吸如前所述，分配色谱的分离是基于样品组分在固定相和流动相之间反复多次地分配过程，而吸附色谱的分离是基于反复多次地吸附一脱附过程。这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配附色谱的分离是基于反复多次地吸附一脱附过程。这种分离过程经常用样品分子在两相间的分配来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数。它是指来描述，而描述这种分配的参数称为分配系数。它是指在一定温度和压力下，组分在固定相和流在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即动相之间分配达平衡时的浓度之比值，即 第8页/共77页9色谱法分析的基本原理2.2.分配比分配比k k 分配比又称容量因子，它是分配比又称容量因子，它是指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比和流动相中的质量比。即。即 第9页/共77页10色谱法分析的基本原理k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量或容量因子。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。k值也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。式中Cs，Cm分别为组分在固定相和流动相的浓度；Vm为柱中流动相的体积，即柱内固定相颗粒间的空隙体积，近似等于死体积。Vs为柱中固定相的体积，在各种不同的类型的色谱中有不同的含义。例如：在分配色谱中，Vs表示固定液的体积；在尺寸排阻色谱中，则表示固定相的孔体积。第10页/共77页11色谱法分析的基本原理 3.分配系数K与分配比k的关系其中称为相比率，它是反映各种色谱柱型特点的又一个参数。第11页/共77页12第二节 色谱流出曲线及有关术语一流出曲线和色谱峰第12页/共77页13色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线：从载气带着组分进入色谱柱起就用检测器检测流出柱后的气体，并用记录器记录信号随时间变化的曲线，此曲线就叫色谱流出曲线，当待测组分流出色谱柱时，检测器就可检测到其组分的浓度，在流出曲线上表现为峰状，叫色谱峰。第13页/共77页14色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线及有关术语如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线的线性范围内，色谱峰如果对称，可用Gauss正态分布函数表示：式中：C不同时间t时某物质的浓度，C0进样浓度，tr保留时间，标准偏差。第14页/共77页15色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线及有关术语二、基线 是柱中仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，仅有流动相通过时，检测器响应讯号的记录值，即图中Ot线稳定的基线应该是一条水平直线 三、峰高（h）色谱峰顶点与基线之间的垂直距离色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示，如图中BA 第15页/共77页16保留值1保留时间保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图中 OB它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间 第16页/共77页17保留值2 2死时间死时间t tM M 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间峰极大值所需的时间称为死时间。如图中 OA。3 3调整保留时间调整保留时间t tR R某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即即 t tR R=t=tR R-t-tM M第17页/共77页18保留值由于组份在色谱柱中的保留时间tR包含了组份随流动相通过柱子所需的时间和组份在固定相中滞留所需的时间，所以tR实际上是组份在固定相中停留的总时间保留时间可用时间单位（如s）或距离单位（如cm）表示。保留时间是色谱法定性的基本依据保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组份的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积等参数进行定性检定第18页/共77页19保留值4保留体积 VR指从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。保留体积与保留时间t。的关系如下：VR=tRqv,0 uqv,0为色谱柱出口载气流量，以mL/min计。第19页/共77页20保留值5死体积死体积 VM 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和接头间的空间以及检测器的空间的总和当后两项很小而可忽略不计时，死体积可由死时间与流动相体积流速qv,0（mLmin）计算：VM=tMqv,0 6调整保留体积调整保留体积VR某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR=VR-VM=tRqv,0第20页/共77页21保留值7相对保留值相对保留值21 某组份2的调整保留值与组份1的调整保留值之比，称为相对保留值：由于相对保留值只与柱温及固定相的性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它是色谱法中，特别是气相色谱法中，广泛使用的定性数据。必须注意，相对保留值绝对不是两个组份保留时间或保留体积之比。第21页/共77页22区域宽度色谱峰的区域宽度是组份在色谱柱中谱带扩张的函数，它反映了色谱操作条件的动力学因素度量色谱峰区域宽度通常有三种方法：1.标准偏差 流出曲线上二拐点间距离之半，即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。2.半峰宽Wh/2 即峰高一半处对应的峰宽，它与标准偏差的关系是：Wh/2 =2.354第22页/共77页23色谱流出曲线及有关术语色谱流出曲线及有关术语3.峰宽W即色谱峰两侧拐点上的切线在基线上的截距，如图中IJ的距离它与标准偏差的关系是：W=4 第23页/共77页24塔板理论 最早由Martin等人提出塔板理论，把色谱柱比作一个精馏塔，沿用精馏塔中塔板的概念来描述组分在两相间的分配行为，同时引入理论塔板数作为衡量柱效率的指标。第24页/共77页25塔板理论由塔板理论推导出的理论塔板数由塔板理论推导出的理论塔板数n n的计算公式如的计算公式如下：下：而理论塔板高度（而理论塔板高度（H H）即：）即：从上两式可以看出，色谱峰从上两式可以看出，色谱峰Y Y越小，越小，n n就越大，而就越大，而H H就就越小，柱效能越高。因此，越小，柱效能越高。因此，n n和和H H是描述柱效能的指标是描述柱效能的指标。第25页/共77页26塔板理论由于死时间由于死时间tm包括在包括在tR中，而实际上中，而实际上tm不参与柱内分配，所计算的不参与柱内分配，所计算的n值偏大，值偏大，H偏小，与实际柱效能相偏小，与实际柱效能相差甚远。所以，采用有效理论塔板数差甚远。所以，采用有效理论塔板数n有效有效和有效塔板高和有效塔板高H有效有效评价柱效能更为合理。评价柱效能更为合理。第26页/共77页27n 塔板理论的贡献塔板理论有助于我们形象的理解色谱的分离过程。导出色谱流出曲线方程，它符合高斯分布，与实验现象相吻合。导出理论塔板数的计算公式，作为柱效的评价指标。第27页/共77页28n 塔板理论的局限塔板高度H是一个抽象的物理量，它的色谱本质是什么？它与哪些参变量有关，又怎样影响峰的扩张？对实验的指导意义有限。不能解释流速对理论塔板数的影响。有些假设不合理，如没有考虑纵向扩散对色谱分离的影响等。第28页/共77页29速率理论 19561956年荷兰学者年荷兰学者Van DeemterVan Deemter等在研究气液色谱时，提出了色谱过等在研究气液色谱时，提出了色谱过程动力学理论程动力学理论速率理论。他们吸收了塔板理论中板高的概念，并速率理论。他们吸收了塔板理论中板高的概念，并充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较充分考虑了组分在两相间的扩散和传质过程，从而在动力学基础上较好地解释了影响板高的各种因素。该理论模型对气相、液相色谱都适好地解释了影响板高的各种因素。该理论模型对气相、液相色谱都适用。用。Van DeemterVan Deemter方程的数学简化式为方程的数学简化式为 式中式中u u为流动相的线速度；为流动相的线速度；A A，B B，C C为常数，分别代表涡流扩散项系数、分子扩为常数，分别代表涡流扩散项系数、分子扩散项系数、传质阻力项系数。散项系数、传质阻力项系数。现分别叙述各项系数的物理意义。现分别叙述各项系数的物理意义。第29页/共77页301 1）涡流扩散项）涡流扩散项(A)(A)在在填填充充柱柱中中，由由于于受受到到固固定定相相颗颗粒粒的的阻阻碍碍，组组份份在在迁迁移移过过程程中中随随流流动动相相不不断断改改变变方方向向，形形成成紊紊乱乱的的“涡涡流流”：从从图图中中可可见见，因因填填充充物物颗颗粒粒大大小小及及填填充充的的不不均均匀匀性性同同一一组组分分运运行行路路线线长长短短不不同同流出时间不同流出时间不同峰形展宽。展宽程度以峰形展宽。展宽程度以A A表示：表示：A=2A=2 d dp p其中其中d dp p填充物平均直径；填充物平均直径；填充不规则因子。填充不规则因子。可可见见，使使用用细细粒粒的的固固定定相相并并填填充充均均匀匀可可减减小小A A，提提高高柱柱效效。对对于于空空心心毛毛细细管管柱，无涡流扩散，即柱，无涡流扩散，即A=0A=0。流动方向流动方向第30页/共77页31涡流扩散项A=2dp涡流扩散项均匀性因子粒径第31页/共77页32 涡流扩散项A 由不等路径造成的色谱峰扩展。由于柱填料粒径大小不同，粒度分布范围不一致及填充的不均匀，形成宽窄、长短不同的路径，因此流动相沿柱内各路径形成紊乱的涡流运动，有些溶质分子沿较窄且直的路径运行，以较快的速度通过色谱柱，发生分子超前，反之，有些分子发生滞后，从而使色谱峰产生扩散。第32页/共77页33速率理论 2.分子扩散项B/u（纵向扩散项）纵向分子扩散是由浓度梯度造成的。组分从纵向分子扩散是由浓度梯度造成的。组分从柱入口加入，其浓度分布的呈柱入口加入，其浓度分布的呈“塞子塞子”状。如图状。如图所示。它随着流动相向前推进，由于存在浓度梯所示。它随着流动相向前推进，由于存在浓度梯度，度，“塞子塞子”必然自发地向前和向后扩散，造成必然自发地向前和向后扩散，造成谱带展宽。分子扩散项系数为：谱带展宽。分子扩散项系数为：B2Dg 第33页/共77页34B/u 分子扩散项 B=2 Dg ：弯曲因子，填充柱色谱，弯曲因子，填充柱色谱，11。Dg：试样组分分子在气相中的扩散系数（：试样组分分子在气相中的扩散系数（cm2s-1）(1)存在着浓度差，产生纵向扩散存在着浓度差，产生纵向扩散;(2)扩散导致色谱峰变宽，扩散导致色谱峰变宽，H(n)，分离变差，分离变差;(3)分子扩散项与流速有关，流速分子扩散项与流速有关，流速，滞留时间，滞留时间，扩散，扩散;(4)扩散系数：扩散系数：Dg(M载气载气)-1/2；M载气载气，B值值。第34页/共77页35速率理论3传质阻力项Cu由于气相色谱以气体为流动相，液相色谱以液体为流动相，它们的传质过程不完全相同，现分别讨论之。对于气液色谱，传质阻力系数C包括气相传质阻力系数Cg和液相传质阻力系数Cl两项，即 CCgCl 第35页/共77页36速率理论气相传质过程是指试样组分从气相移动到固定相表面的过程。气相传质过程是指试样组分从气相移动到固定相表面的过程。这一过这一过程中试样组分将在两相间进行质量交换，即进行浓度分配。有的分子程中试样组分将在两相间进行质量交换，即进行浓度分配。有的分子还来不及进入两相界面，就被气相带走；有的则进入两相界面又来不还来不及进入两相界面，就被气相带走；有的则进入两相界面又来不及返回气相。这样，使得试样在两相界面上不能瞬间达到分配平衡，及返回气相。这样，使得试样在两相界面上不能瞬间达到分配平衡，引起滞后现象，从而使色谱峰变宽。对于填充柱，气相传质阻力系数引起滞后现象，从而使色谱峰变宽。对于填充柱，气相传质阻力系数CgCg为为式中式中k k为容量因子为容量因子。由上式看出，气相传质阻力与填充物粒度的平方成正比、与组分在。由上式看出，气相传质阻力与填充物粒度的平方成正比、与组分在载气流中的扩散系数成反比。因此，采用粒度小的填充物和相对分子质量小的气体（如氢载气流中的扩散系数成反比。因此，采用粒度小的填充物和相对分子质量小的气体（如氢气）做载气，可使气）做载气，可使CgCg减小，提高柱效。减小，提高柱效。第36页/共77页37 4）流速u 由方程 H=A+B/u+Cu知道：当u一定时，仅在A、B、C 较小时，H 较小，柱效较高；反之则柱效较低，色谱峰将展宽。以u对H作图，可得H-u曲线（如图），从该曲线得到：第37页/共77页38板高，板高，H(cm)HminA+B/u+CuCmuCsuAB/u第38页/共77页39四、分离度与基本色谱分离方程式图说明了柱效和选择性对分离的影响。图中（a）两色谱峰距离近并且峰形宽。两峰严重相叠，这表示选择性和柱效都很差。图中（b）虽然两峰距离拉开了，但峰形仍很宽，说明选择性好，但柱效低。图中（c）分离最理想，说明选择性好，柱效也高。第39页/共77页40分离度与色谱分离基本方程式由此可见，单独用柱效或选择性不能真实反映组分在色谱柱中分离情况，故需引人一个综合性指标分离度R。分离度是既能反映柱效率又能反映选择性的指标，称总分离效能指标。分离度又叫分辨率，它定义为相邻两组分色谱峰保留值之差与两组分色谱峰底宽总和之半的比值，即R值越大，表明相邻两组分分离越好。一般说，当R1时，两峰有部分重叠；当R1时，分离程度可达98；当R1.5时，分离程度可达99.7。通常用R=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。第40页/共77页412 2 色谱定量分析色谱定量分析(1)色谱定量基础 色谱定量分析是基于被测物质的量与峰面积成正比。在一定色谱条件下有：第41页/共77页42校正因子的测量与计算相对校正因子 由于绝对校正因子与仪器的灵敏度有关，又由于灵敏度与实验条件相关，且每一检测器的灵敏度都是不同的，它不容易测量准确，亦无通用性，所以实际工作中使用相对校正因子。第42页/共77页43n 相对校正因子的表达式质量校正因子 摩尔校正因子 相对响应值 被测组分的质量标准物质量分子量第43页/共77页44n 相对校正因子的测量理论上相对校正因子与试样、标准物质、检测器类型、载气类型有关，与其它色谱条件无关。无纯物质时或对结果准确度要求不高时，相对校正因子可通过查表得。即无纯物，手册上又无数据时，可用一些计算方法估算这些物质的相对校正因子。第44页/共77页45定量方法校正归一化法 含归一化内标法 含内标标准曲线法外标法 含单点校正第45页/共77页46n 校正归一化法推导推导：第46页/共77页47应用范围：当试样中各组分都能流出色谱柱，且在检测器上均有响应，各组分峰没有重叠时，可用此法。优点：简便、准确，当操作条件如进样量等变化时，对定量结果影响很小，该法适合于常量物质的定量。缺点：对该法的苛刻要求限制了它的使用。第47页/共77页48归一化法若各组分的定量校正因子相近或相同，则上式可简化为：第48页/共77页49n 内标法推导 将一定量的纯物质作为内标物，加入到准确称量的试样中。第49页/共77页50适用范围：当只需测定试样中某几个组分，且试样中所有组分不能全部出峰时可用。优点：受操作条件的影响较小，定量结果较准确，使用上不象归一化法那样受到限制，此法适合于微量物质的分析。缺点：每次分析必须准确称量被测物和内标物，不适合于快速分析。第50页/共77页51n 外标法（标准曲线法）用于常规分析优点：操作简单，计算方便。缺点：结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性。该法必须定量进样。第51页/共77页52单点校正当被测试样中各组分的浓度变化范围不大时而用单点校正法。即配制一个与被测组分含量十分接近的标准溶液，定量进样，计算被测物的含量。第52页/共77页归一化法内标法外标法适用范围各组分都能能流出色谱柱，并在色谱图上显示色谱峰。当只需要测定试样中的某几个组分，而试样不能全部出峰的情况。适用于常规分析优点简便、准确，当条件改变时，对结果影响小，适合于常量物质的定量。定量较准确，无归一化法的限制，适用于微量物质的分析操作简单，计算方便缺点该法的苛刻要求限制了它的使用每次准确称取试样和内标物的质量，不适于快速控制分析。结果的准确度取决于进样量的重现行和操作条件的稳定性。53第53页/共77页11-311-3 气相色谱法概述气相色谱法概述54第54页/共77页用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法。用气体作为流动相的色谱法称为气相色谱法。55第55页/共77页 (一)气相色谱流程 气相色谱法用于分离分析样品的基本过程如下图：图12.5 12.5 气相色谱过程示意图载气系统、进样系统、色谱柱、检测器、记录系统。156第56页/共77页柱长(米)I.D.(mm).5-102-45-100.5305-100.1-.25填充柱530系列柱细孔径柱填充柱开管柱（毛细管柱）壁涂开管柱11-4 气相色谱固定相色谱柱类型57第57页/共77页气相色谱柱中固定相是影响组分分配系数的主气相色谱柱中固定相是影响组分分配系数的主要因素要因素气固色谱(GSC)(GLC)流动相固定相气态固态气液色谱气态液态固定相58第58页/共77页11-5 气相色谱检测器热导池检测器 常用TCD表示。由于结构简单，灵敏度适宜，稳定性较好，而且对所有物质都有响应，因此是应用最广、最成熟的一种检测器。热导池检测器是根据各种物质和载气的导热系数不同，采用热敏元件进行检测的。59第59页/共77页热电检测器(Thermal Conductivity Detector,TCD)电桥线路示意图 60第60页/共77页2.氢火焰离子化检测器 氢火焰离子化检测器（FID）简称氢焰检测器。它具有结构简单，灵敏度高，死体积小，响应快，稳定性好的特点，是目前常用的检测器之一。但是，它仅对含碳有机化合物有响应，对某些物质，如永久性气体、水、一氧化碳、二氧化碳、氮的氧化物、硫化氢等不产生信号或者信号很弱。氢焰检测器是以氢气和空气燃烧的火焰作为能源，利用含碳化合物在火焰中燃烧产生离子，在外加的电场作用下，使离子形成离子流，根据离子流产生的电信号强度，检测被色谱柱分离出的组分。61第61页/共77页氢焰检测器图（图（Flame Ionization Detector,FIDFlame Ionization Detector,FID）示意图）示意图62第62页/共77页11-6 气相色谱操作条件的选择载气种类及流速的选择柱温的选择柱长和内经的选择进样量和进样时间的选择气化温度的选择63第63页/共77页11-8 高效液相色谱分析第64页/共77页 高效液相色谱法的特点高压：150350105Pa高速高效：气相色谱n约为2000塔板/米 液相色谱n约为30000塔板/米高灵敏度：紫外检测器：10-9g 荧光检测器：10-11g第65页/共77页11-9 高效液相色谱仪 一般具有：贮液器、高压泵、梯度洗提装置、进样器、色谱柱、检测器、数据记录和处理系统。第66页/共77页检测器 紫外光度检测器（ultraviolet photometric detector）：常用型检测器，检测限可达10-9gmL-1 优点：这种检测器对温度和流速不敏感，适宜于梯度洗提 缺点：不能用于对紫外-可见光完全不吸收的试样的检测第67页/共77页第68页/共77页 光电二极管阵列检测器（photo-diode array detector）是紫外可见光度检测器的一个重要进展。第69页/共77页荧光检测器（fluorescence detector）优点：一般情况下，荧光检测器比紫外光度检测器的灵敏度要高2个数量级 缺点：其线性范围约为103 只能分析自身发光的物质 第70页/共77页第71页/共77页示差折光检测器（differential refractive index detector）：利用折光率的差别进行检测，是通用型检测器 缺点：灵敏度低，温度要求严格第72页/共77页电导检测器：是离子色谱法中使用最广泛的检测器。原理：根据物质在某些介质中电离后所产生电导变化来测定电离物质含量。缺点：受温度的影响较大，严格控制温度。第73页/共77页11-10 高效液相色谱法的主要分离类型液-液分配色谱法（liquid-liquid partion chromatography）及化学键合相色谱（chemially bonded phase chromatography）第74页/共77页正相液-液色谱法（normal phase liquid chromatography）：一般为了避免固定液的流失，对于亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性。反相液-液色谱法（revers phase liquid chromatography）：流动相的极性大于固定液的极性，出峰顺序正好与正相液-液色谱相反。第75页/共77页液-固色谱法 或称液-固吸附色谱法（liquid-sold adsorption chromatography）其作用机制是溶质分子（X）和溶剂分子（S）对吸附剂活性表面的竞争吸附，可用下式表示：这种竞争吸附达到平衡时，可用下式表示:第76页/共77页77感谢您的观看。第77页/共77页