动物细胞融合与单克隆抗体PPT精选PPT.ppt

关于动物细胞融合与单克隆抗体关于动物细胞融合与单克隆抗体PPT第1页，讲稿共24张，创作于星期日电激处理使供电激处理使供电激处理使供电激处理使供体核进入受体体核进入受体体核进入受体体核进入受体卵母细胞构建卵母细胞构建卵母细胞构建卵母细胞构建重组胚胎重组胚胎重组胚胎重组胚胎卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养卵母细胞采集、培养MM期期期期卵母细胞卵母细胞卵母细胞卵母细胞供体牛供体牛供体牛供体牛供体细胞注入供体细胞注入供体细胞注入供体细胞注入去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞代孕母牛代孕母牛代孕母牛代孕母牛克隆牛克隆牛克隆牛克隆牛体细胞培养体细胞培养体细胞培养体细胞培养去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核卵母细胞去核去核去核去核胚胎胚胎胚胎胚胎移植移植移植移植体细胞核移植过程体细胞核移植过程（体细胞克隆动物）（体细胞克隆动物）存在的问题存在的问题存在的问题存在的问题（1 1 1 1）成功率非常低）成功率非常低）成功率非常低）成功率非常低（2 2 2 2）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问题题题题（3 3 3 3）对克隆动物食品的安全性问题也存）对克隆动物食品的安全性问题也存）对克隆动物食品的安全性问题也存）对克隆动物食品的安全性问题也存在争议。在争议。在争议。在争议。第2页，讲稿共24张，创作于星期日专题专题2 2 细胞工程细胞工程2.2.2 2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体主备人：姚雪丰主备人：姚雪丰 议课时间：第议课时间：第1515周周 上课时间：第上课时间：第1717周周环节环节：学习目标：学习目标1.1.掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。2.2.简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程。3.3.了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说出其应了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说出其应用实例。用实例。第3页，讲稿共24张，创作于星期日阅读教材阅读教材52545254页，回答下列问题：页，回答下列问题：环节环节：问题导学：问题导学1.1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？有什么不同？2.2.常规常规血清抗体与单克隆抗体血清抗体与单克隆抗体有何区别有何区别？3.3.单克隆抗体怎么制备？单克隆抗体怎么制备？4.4.单克隆抗体主要有哪几方面的用途？单克隆抗体主要有哪几方面的用途？第4页，讲稿共24张，创作于星期日一、动物细胞融合一、动物细胞融合9:45环节环节：点拨精讲：点拨精讲细胞融合是正常的生命活动细胞融合是正常的生命活动两个细胞正在融合两个细胞正在融合 受精作用受精作用第5页，讲稿共24张，创作于星期日1、概念、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果、结果形成单核的杂交细胞3、原理、原理细胞膜的流动性4、诱导方式、诱导方式物理法物理法：离心、振动、电激化学法化学法：聚乙二醇（PEG)生物法生物法：灭活的病毒一、动物细胞融合一、动物细胞融合第6页，讲稿共24张，创作于星期日 动动物物细细胞胞融融合合过过程程示示意意图图不同DNA的两个细胞 灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞 技巧技巧归纳灭活的病毒能作为诱导剂,不灭活的病毒不能作为诱导剂1.灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。2.不灭活的病毒会感染细胞,而不能诱导细胞融合。第7页，讲稿共24张，创作于星期日5、过程：、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合1个完整的杂交细胞AB（膜融合、质融合）（核融合）v细胞融合完成的标志细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核细胞核融合成一个核6、意义：、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用：、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。最有价值的应用最有价值的应用制备单克隆抗体制备单克隆抗体第8页，讲稿共24张，创作于星期日动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁原生原生质体质体融合融合植物植物组织组织培养培养物理法物理法化学法化学法生物法：生物法：灭活的病毒灭活的病毒动物细胞动物细胞A动物细胞动物细胞B杂种细胞杂种细胞常用方法8.植物体细胞杂交、植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较动物细胞融合的比较第9页，讲稿共24张，创作于星期日主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目8.植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较第10页，讲稿共24张，创作于星期日例1下图表示细胞融合技术的一些过程,请据图回答:(1)若A、B细胞为动物细胞,从A和B细胞到C细胞的过程中,常用作为来诱导融合。A、B融合为C的过程说明细胞膜具有特性。其融合完成的标志是。得到的C细胞可称为。灭活的病毒诱导剂流动性细胞核融合杂交细胞(2)若A、B细胞为植物细胞,那么这样的细胞已经用酶降解去掉了,这种酶可能是酶,由此生成的A和B细胞称为。A、B到C细胞的过程中,常用的物理方法是;融合完成的标志是;形成的D细胞还要应用技术把D培养成植株。(3)若A为人细胞,B为鼠细胞,并分别用红、绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质,在形成C细胞时,细胞一半发红色荧光,一半发绿色荧光。到D细胞阶段,两种颜色的荧光均匀分布,原因是 。细胞壁纤维素酶和果胶原生质体离心、振动、电激形成新的细胞壁植物组织培养细胞膜上的蛋白质是可以运动的第11页，讲稿共24张，创作于星期日二、单克隆抗体二、单克隆抗体什么是抗体？什么是抗体？由何种细胞产生？由何种细胞产生？主要分布在哪里？主要分布在哪里？起何作用？起何作用？效应效应B细胞细胞血清血清特异性免疫作用特异性免疫作用抗体：机体受抗原刺激后产生抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋性结合的具有免疫功能的球蛋白。白。第12页，讲稿共24张，创作于星期日读下面一段文字资料，思考以下问题：读下面一段文字资料，思考以下问题：长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏应不够灵敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。细胞进行无性繁殖，即克隆。1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念2、怎样才能获得单克隆抗体？、怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1：仅用细胞培养技术可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3：有什么方法能使：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？胞无限增殖能力同时具备呢？用单个用单个B细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。第13页，讲稿共24张，创作于星期日 接接接接受受受受抗抗抗抗原原原原刺刺刺刺激激激激后后后后，能能能能分分分分泌泌泌泌针针针针对对对对该该该该抗抗抗抗原原原原的的的的特特特特异异异异性性性性抗抗抗抗体体体体，在在在在体液免疫中具有重要功能。体液免疫中具有重要功能。体液免疫中具有重要功能。体液免疫中具有重要功能。B B淋淋淋淋巴巴巴巴细细细细胞胞胞胞本本本本身身身身是是是是一一一一种种种种终终终终末末末末分分分分化化化化细细细细胞胞胞胞，通通通通常常常常不不不不再再再再进进进进行行行行细细细细胞胞胞胞分分分分裂裂裂裂，存活一段时间后便会死亡存活一段时间后便会死亡存活一段时间后便会死亡存活一段时间后便会死亡短命细胞短命细胞短命细胞短命细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞 所以所以B B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，而癌细胞是可以无限增殖的。而癌细胞是可以无限增殖的。骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞:恶恶恶恶性性性性增增增增殖殖殖殖的的的的转转转转化化化化细细细细胞胞胞胞，只只只只要要要要营营营营养养养养条条条条件件件件适适适适合合合合可可可可永永永永远远远远分分分分裂裂裂裂和和和和存存存存活活活活长长长长命命命命细细细细胞胞胞胞。经经经经筛筛筛筛选选选选与与与与驯驯驯驯化化化化，现现现现已已已已建建建建立立立立多多多多种种种种骨骨骨骨髓髓髓髓瘤瘤瘤瘤细细细细胞胞胞胞株株株株没有抗体分泌物没有抗体分泌物没有抗体分泌物没有抗体分泌物。因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。第14页，讲稿共24张，创作于星期日特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏常规抗体制备常规抗体制备一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞：只分泌一种：只分泌一种特异性抗体特异性抗体单克隆抗体单克隆抗体杂交瘤细胞杂交瘤细胞 小鼠小鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞：能：能无限增殖无限增殖融合融合 单克隆抗体单克隆抗体 培养培养 向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离向动物体内反复注射抗原，使动物产生抗体，然后从血清中分离所需抗体。所需抗体。优点优点：特异性强，灵敏度高。：特异性强，灵敏度高。第15页，讲稿共24张，创作于星期日杂交杂交杂交杂交 细胞细胞细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫经免疫经免疫的小鼠的小鼠的小鼠的小鼠提取提取杂交瘤杂交瘤杂交瘤杂交瘤细胞细胞细胞细胞第一次筛选第一次筛选第一次筛选第一次筛选用特定的用特定的选选择性培养基择性培养基第二次筛选第二次筛选第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体提取单克隆抗体二、单克隆抗体的制备1.1.单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备过程 第16页，讲稿共24张，创作于星期日3.3.3.3.为何要进行两次筛选？为何要进行两次筛选？为何要进行两次筛选？为何要进行两次筛选？4.4.如何进行第如何进行第2 2次筛选？次筛选？培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。第第1 1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第第2 2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。1.1.本过程利用了哪些原理？本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2.2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体的能力，细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体。单克隆抗体。思考思考：第17页，讲稿共24张，创作于星期日2.2.单克隆抗体的优点：单克隆抗体的优点：3.3.3.3.单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用特异性强，灵敏度高，可大量制备特异性强，灵敏度高，可大量制备（1）作为诊断试剂）作为诊断试剂最广泛应用最广泛应用 具有准确、高效、简易、快速具有准确、高效、简易、快速（2）用于治疗疾病和运载药物）用于治疗疾病和运载药物“生物导弹生物导弹”单克隆抗体药物单克隆抗体药物 单抗导向，药物为弹头单抗导向，药物为弹头主要用于治疗主要用于治疗癌症治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载，单克隆抗体作为载体，运载抗癌药物，形成抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。准确杀伤癌变细胞。第18页，讲稿共24张，创作于星期日例2下图是单克隆抗体的制备过程,请据图回答问题:(1)抗体的化学本质是,主要分布于中,也分布于组织液及外分泌液中。(2)若想通过过程获得所需的B淋巴细胞,应先对小鼠进行的处理是 ,该处理的实质是在小鼠体内发生 的过程。制备单克隆抗体的B淋巴细胞一般从中采集。球蛋白血清注射(相应的)抗原体液免疫脾(3)过程除了采用诱导植物细胞原生质体融合的方法外,还可以用 作为诱导剂。细胞两两融合后,可出现 种融合细胞。(4)过程中杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的方式是。(5)过程要挑选出能产生 的细胞群继续培养。特定抗体灭活的病毒3 3主动运输第19页，讲稿共24张，创作于星期日两个两个“过程过程”动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法 灭活病毒灭活病毒一个新细胞杂交瘤细胞一个新细胞杂交瘤细胞一个优势单克隆抗体特异性强、一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势环节环节：课堂总结：课堂总结第20页，讲稿共24张，创作于星期日1 1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）正确的是（）A A结果是相同的结果是相同的 B B杂种细胞的形成过程基本相同杂种细胞的形成过程基本相同 C C操作过程中酶的作用相同操作过程中酶的作用相同 D D诱导融合的手段相同诱导融合的手段相同环节环节：当堂检测：当堂检测2.2.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是能使动物细胞融合的特有的诱导因子是()。A.A.离心离心B.B.灭活的病毒灭活的病毒 C.C.电刺激电刺激 D.D.振动振动B3 3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（是（）A.A.经过免疫的经过免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞 B.B.没经过免疫的没经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞C.C.经过免疫的经过免疫的T T淋巴细胞淋巴细胞 D.D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A第21页，讲稿共24张，创作于星期日4.4.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B B淋巴细胞进行无性繁殖淋巴细胞进行无性繁殖,形成细胞群。其原因是形成细胞群。其原因是()。A.A.在体外培养条件下在体外培养条件下,B,B淋巴细胞可以无限增殖淋巴细胞可以无限增殖B.B.在动物体内在动物体内B B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体C.C.每一个每一个B B淋巴细胞都参与特异性免疫反应淋巴细胞都参与特异性免疫反应D.D.每一个每一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体淋巴细胞只分泌一种特异性抗体D5.某同学在学习“细胞工程”时,列表比较动植物细胞工程的有关内容,你认为错误的是()。B第22页，讲稿共24张，创作于星期日6.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）淋巴细胞淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞杂交瘤细胞 A B C D C第23页，讲稿共24张，创作于星期日感感谢谢大大家家观观看看2022/10/18第24页，讲稿共24张，创作于星期日