植物组织培养脱毒技术进展研究.pptx

Page 1组织培养脱毒脱毒技术的发展过程1脱毒技术的未来4无病毒植株检测方法3常用的脱毒技术2第1页/共17页Page 2植物组织培养常用脱毒方法茎尖大小和脱毒率热处理抗病毒化学药剂超低温保存返回第2页/共17页Page 3病毒抑制剂原理：利用抗病毒化学药剂来抑制病毒核酸与蛋白质的合成或是改变寄主的代谢方式化学抗病毒试剂：9-（2-羟二氧）甲基鸟嘌呤，2-硫尿嘧啶，叠氮胸苷，2,4-氧六氢三氮杂苯（DHT）和类似嘌呤碱基代谢物质三氮唑核苷（病毒唑）优点：与茎尖培养相结合，可较容易脱去多种病毒，而且此法对取材要求不严，接种茎尖可大于1mm，易于分化出苗，提高成活率缺点：不能脱去所有病毒，尚不能完全抑制病毒使其失活231返回第3页/共17页Page 4无病毒植株检测1.酶联免疫吸附反应（ELISA）2.分子生物学法脱毒后的无病毒植株须经严格的病毒鉴定和检测证明确属无毒良种种源，并采取严密的防病毒重复污染措施才能取得预期效果建立快速，高灵敏度，高通量的病毒检测体系是病毒害预防和综合防治的先决条件第4页/共17页Page 5分子生物学法 1.核酸杂交技术；2.RT-PCR；3.荧光定量PCR；4.DNA微阵列技术特异性强，灵敏度高，而且不需要准备抗血清以及放射性探针，操作简单，适用广泛，是植物病毒检测的重要方法返回第5页/共17页Page 6展望现有的脱毒技术多种多样，各有优缺点，目前应用的趋势是将不同的方法结合起来，从而阻止植物病毒的扩散如采用茎尖培养和热处理都不能除去悬钩子丛矮病毒（RBDV），若热处后，再采用茎尖玻璃化超低温保存，存活的植株中35%无该病毒返回第6页/共17页Page 7脱毒甘蔗单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容返回第7页/共17页Page 8此处添加内容此处添加内容脱毒草莓此处添加内容此处添加内容此处添加内容此处添加内容此处添加内容此处添加内容返回第8页/共17页Page 9脱毒工作室文字内容文字内容文字内容单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容单击此处添加段落文字内容返回第9页/共17页Page 10超低温优点无需昂贵仪器或设备出无毒苗所需时间短植株再生后无毒去除原菌感染存活率，再生率和脱毒率高意义：超低温保存是种资源长久保存的理想方法，在液氮中亦可保证材料的遗传稳定性.原理：在冰冻和冻融期间，细胞的结构和功能受损严重，含有病毒的顶端细胞液泡较大，水分多，易形成冰晶而致死，分生组织含水分少，胞质浓，不易被冻死返回第10页/共17页Page 11自1952年法国莫勒尔使用生长点培养法获得无病毒植株后，该种脱毒技术被广泛使用。通过脱毒，使植株恢复种性，增强抗性，生长健壮，光合作用增强，明显提高了植株的产量和品质。尤其是该技术在马铃薯和甘薯上的应用，对其种植逐步走向规模化，标准化，区域化具有重要意义。脱毒技术的发展过程与应用返回第11页/共17页Page 12优缺点原理酶联免疫吸附法使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。优点：由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。缺点：需要制备抗体，而且一次只能检测一种病毒。返回第12页/共17页Page 13茎尖脱毒法指示植物鉴定：a.摩擦接种法 b.嫁接法原理：病毒在寄主植物内靠维管系统运输，茎尖分生组织中未形成维管束，所以病毒的运动受阻，所以茎尖组织中不含或只含低浓度病毒依据：病毒在植物体内分布是不均一的，越接近生长点约（0.1-1mm区域），病毒浓度越稀，因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒技术关键：1.被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布；2.母体植株的选择和预处理；3.茎尖的剥离；4.脱毒效果检测；5.影响脱毒效果的因素返回第13页/共17页Page 14脱毒率茎尖脱毒的关键是茎尖大小和脱毒率，脱毒的成功率与所切茎尖分生组织大小成反比，为了提高脱毒率，须切下足够小茎尖分生组织（0.20.5mm）同时其再生能力与分生组织大小成正比席梦利等对宜兴百合脱毒培养得出接种0.30.5mm茎尖脱毒效果最好东方百合组培脱毒时，茎尖小于0.3mm，成活率只有20%，小于0.1mm全部死亡返回第14页/共17页Page 15高温处理热处理 原理：高温可抑制病毒的增殖，减缓病毒在植物体内的扩散速度 方法：1.热水浸泡；2.高温空气处理.优点：热处理结合适宜的茎尖分生组织大小是获得无病毒植株的关键因素.缺点：并非所有病毒都对热处理敏感，该法只对球状病毒（如葡萄扇叶病毒，苹果花叶病毒）或线状病毒（如马铃薯X,Y病毒）有效果，而对杆状病毒（如千日红病毒）不起作用返回第15页/共17页制作人：王珍制作人：王珍第16页/共17页Page 17感谢您的观看！第17页/共17页