实验室常规操作精.ppt

实验室常规操作第1页，本讲稿共13页实验室常用仪器：实验室常用仪器：n移液器n暗室相关nPCR仪n离心机第2页，本讲稿共13页移液器：移液器：n移液器检查n量程的调节n枪头（吸液嘴）的装配n移液的方法n移液器的放置第3页，本讲稿共13页移液器检查：n测漏：取一个透明的容器，装上水，将需要测试的移液器装上吸头，吸上水，如果是量程较小的移液器，请将吸头浸入液面12毫米，静待20秒，观察吸头内部液面是否下降；如果是量程大的移液器（20-200ul、100-1000ul等），请将吸头朝下悬垂20秒，观察是否有液体下滴；n如果出现漏气：A、检查吸头安装是否到位，换掉吸头再次测试，以排除因吸头的关系产生的漏气情况；B、检查白套筒的端口部份（即白套筒与吸头接触的部份）是否有刮痕；C、再检查白套筒与手柄之间的连接螺帽是否松动。如果这些情况都没有，就说明密封圈或活塞组件有损坏，请联系相关负责人员。第4页，本讲稿共13页量程的调节：量程的调节：n如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；n但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液器。第5页，本讲稿共13页枪头的装配：枪头的装配：n常见的错误方法：使劲地在枪头盒子上敲几下，这是错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。n正确的方法：将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。枪头卡紧的标志是略微超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。第6页，本讲稿共13页移液的方法：n移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度（酶类除外）。吸取液体时，移液器保持竖直状态，将枪头插入液面下23毫米。在吸液之前，可以先吸放几次液体以润湿吸液嘴（尤其是要吸取粘稠或密度与水不同的液体时）。n一般采取两种移液方法：A、前进移液法：用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体，最后松开按钮；B、反向移液法：此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体。方法是是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至第一停点排出设置好量程的液体（最大吸取刻度-第一停点刻度即所需液体的体积），继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。第7页，本讲稿共13页移液器的放置：n使用完毕，可以将其竖直挂在移液枪架上，但要小心别掉下来。n当移液器枪头里有液体时，切勿将移液器水平放置或倒置，以免液体倒流腐蚀活塞弹簧。n如有液体吸入移液器腔体，应立即控干液体，然后视溶液性质是否需要洗涤（擦洗时，用75%乙醇或肥皂水）。n如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧（各使用人员，在下班前要将各自所使用移液器调至最大量程）。第8页，本讲稿共13页暗室物品使用相关：n暗室物品使用原则：A、专物专用，暗室里的所有均为专用物品，严禁与实验室物品混用，且暗室内物品使用时需带好一次性PE膜手套（EB有毒性，注意个人防护），用完后丢弃手套，方可接触实验室中的物品；B、实验室所有物品，原则上不允许带入暗室，若需带入暗室，严禁放置于暗室内的实验台上，且应尽量避免与暗室中物品接触；C、暗室操作过程中注意个人安全防护！n相关仪器：紫外分析仪、微波炉、电泳仪第9页，本讲稿共13页PCR仪使用注意事项：n放入样品前或取出样品前，向逆时针推动热盖的彩色手轮，可以松开热盖。加入样品后，顺时针推动手轮可以压紧热盖；n压紧热盖时注意以下原则：当旋动手轮听到咔咔声后即可，这样可保证热盖压紧又不会因压力过大导致样品管变形。注意打开或关闭热盖时，应轻抬轻放，以防过强震动而导致热盖机械故障。；运行程序前，先检查热盖状态；n使用过程中，避免用坚硬的物体磕碰、划伤显示及操作部分，以免损坏；n严格按照正常的操作规程进行实验，以保证仪器正常运行。第10页，本讲稿共13页离心机按照功能划分为：n高速冷冻离心机：主要用于大量和需要低温环境的DNA 提取；n普通离心机：主要用于常温小量的DNA提取和纯化。第11页，本讲稿共13页普通离心机使用注意事项：n打开电源键后，等显示稳定后才可以进行转速和时间调节，检查离心机转轴松紧度；n放置立新样品时，一定要对称放入（质量）；n离心结束后，等离心机显示【end】才可以按开盖健打开离心机盖；否则容易导致离心机程序错误，以致出现开不了盖或者是离心机不能停转的现象；n定期对离心机进行清洁维护，一般2-3天一次.，主要是清洗离心机转头，以及离心机侧壁和放置离心机的台面；n注意：所有涉及加液的步骤需在板上进行，严禁注意：所有涉及加液的步骤需在板上进行，严禁在离心在离心 机中进行机中进行 加液操作！加液操作！第12页，本讲稿共13页本讲义完，谢谢！本讲义完，谢谢！第13页，本讲稿共13页