酶活力计算公式.pdf

-固态发酵漆酶活性测定：酶液制取：5g 发酵样品以 1:20 W/V 比例用蒸馏水悬浮，200 r/min 摇 3h，之后 5000 r/min 离心 20min。上清用 0.45m 滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定。酶活反响体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL 粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L 的 ABTS 420nm 处测定吸光值的变化。此实验固态发酵漆酶活性计算公式：N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 36000:420nm 处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L 为比色皿的直径cm。100mL/(0.5mL5g)：固态变成液态的稀释倍数 液态发酵漆酶活性测定：酶活反响体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L 醋酸-醋酸钠缓冲液；pH=4.5 0.5mL 粗酶液稀释液；0.2mL 1mmol/L 的 ABTS N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL-OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 36000:420nm 处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L 为比色皿的直径cm。固态发酵锰过氧化物酶MnP活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中，参加 100 mL H2O，在 200 r/min 的摇床中振荡提取 3 h，之后5000 r/min 离心 20min。用滤纸过滤后，取滤液用于测定 MnP 酶活性。在 4 mL 反响体系中含 50 mmol/L(pH 4 5)的乳酸钠缓冲液 3.4 mL，1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0.1 mL，酶液 0.4 mL，预热至 37 时，加 1.6 mmol/L 的 H2O2溶液 0.1 mL 启动反响。在 238 nm 紫外光处，测定反响 4 min OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H2O2溶液，其他反响物不变。每分钟使 1 mol/L 的 Mn2+转化为 Mn3+所需的酶量为 1 个酶活力单位(U)。(238=6.5mM-1-1)此实验固态发酵MnP 活性计算公式：N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 6500:238nm 处 Mn2+转化为 Mn3+摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L：比色皿的直径cm-100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数 液态发酵锰过氧化物酶MnP活性测定：锰过氧化物酶MnP活性测定 在 4 mL 反响体系中含 50 mmol/L(pH 4 5)的乳酸钠缓冲液 3.4 mL，1.6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0.1 mL，酶液 0.4 mL，预热至 37 时，加 1.6 mmol/L 的 H2O2溶液 0.1 mL 启动反响。在 238 nm 紫外光处，测定反响 4 min OD238差值。在对照组中，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H2O2溶液，其他反响物不变。每分钟使 1 mol/L 的 Mn2+转化为 Mn3+所需的酶量为 1 个酶活力单位(U)。(238=6.5mM-1-1)此实验固态发酵MnP 活性计算公式：N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 6500:238nm 处 Mn2+转化为 Mn3+摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L：比色皿的直径cm 固态发酵木质素过氧化物酶LiP活性测定：酶液制取：5g 发酵样品以 1:20W/V比例用蒸馏水悬浮，200r/min摇 3h，之后 5000 r/min 离心 20min。上清用 0.45m 滤纸过滤，于-20保存滤液，取能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定。测酶活：3mL 反响混合液包括 3.4mL 酒石酸钠250mM，pH 3.0，-0.1mL 10mM 藜芦醇，0.4mL 酶样品。在 301下温浴 5min 后，于反响参加 0.1mL 10mM H2O2启动酶促反响，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H2O2溶液作对照，测 OD310(310=9.3103M1cm1)处反响 5min 前后反响液吸光度的变化。一个酶活力单位U的定义：每 min氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵 LiP 活性计算公式：N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 9300:310nm 处摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L：比色皿的直径cm 100mL/(0.4mL5g)：固态变成液态的稀释倍数 液态发酵木质素过氧化物酶LiP活性测定：测酶活：3mL 反响混合液包括 3.4mL 酒石酸钠250mM，pH 3.0，0.1mL 10mM 藜芦醇，0.4mL 酶样品。在 301下温浴 5min 后，于反响参加 0.1mL 10mM H2O2启动酶促反响，以煮沸灭活 15 min 酶液代替原酶液，以蒸馏水代替 H2O2溶液作对照，测 OD310(310=9.3103M1cm1)处反响 5min 前后反响液吸光度的变化。一个酶活力单位U的定义：每 min氧化藜芦醇生成 1M 藜芦醛消耗的酶量。此实验固态发酵 LiP 活性计算公式：-N：酶液稀释倍数 V总:漆酶酶活测定反响体体系的终体积mL V 酶:反响添加的酶液体积mL OD420:t 时间反响液在 420nm 处吸光度的增加值 9300:310nm 处摩尔吸光系数(L/molcm)T：反响时间min L：比色皿的直径cm