细胞增殖及其调控(2).ppt

第一章第一章 绪论绪论第二章第二章 细胞基本知识概要细胞基本知识概要 第三章第三章 细胞生物学研究方法细胞生物学研究方法第四章第四章 细胞质膜与细胞表面细胞质膜与细胞表面第五章第五章 物质跨膜运输与信号传递物质跨膜运输与信号传递第六章第六章 细胞质基质与内膜系统细胞质基质与内膜系统第七章第七章 细胞的能量转换细胞的能量转换第八章第八章 细胞核与染色体细胞核与染色体第九章第九章 核糖体核糖体第第 十十 章章 细胞骨架细胞骨架第十一章第十一章 细胞增殖及其调控细胞增殖及其调控第十二章第十二章 细胞分化与基因表达调控细胞分化与基因表达调控第十三章第十三章细胞衰老与凋亡细胞衰老与凋亡CELL CYCLE细胞增殖细胞增殖(cell proliferation)的意义的意义细胞增殖是细胞生命活动的重要特征之一，是生物繁育的基础。单细胞生物细胞增殖导致生物个体数量的增加。多细胞生物由一个单细胞即受精卵分裂发育而来，细胞增殖是多 细胞生物繁殖基础。成体生物仍然需要细胞增殖，主要取代衰老死亡的细胞，维持个 体细胞数量的相对平衡和机体的正常功能。机体创伤愈合、组织再生、病理组织修复等，都要依赖细胞增殖。第一节第一节 细胞周期与细胞分裂细胞周期与细胞分裂一、细胞周期一、细胞周期(cell cycle)(cell cycle)概述概述l细胞周期细胞周期：指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。分为4个期：G1 期期(gap1)：指从有丝分裂完成到 DNA 复制之前的间隙时间。S 期期(synthesis phase)：指 DNA 复制的时期。G2 期期(gap2)：指 DNA 复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间。间期(interphase):G1 phase，S phase，G2 phaseM期期又称D期(mitosis or division)：细胞分裂开始到结束。即胞质分裂期(Cytokinesis)细胞沿着G1SG2MG1周期性运转，在间期细胞体积增大(生长)，在 M 期细胞先是核分裂，接着胞质分裂，完成一个细胞周期。（一）什么是细胞周期（一）什么是细胞周期（一）什么是细胞周期（一）什么是细胞周期 l从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：连续分裂细胞连续分裂细胞：如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。G0期期细细胞胞:休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重 新进入细胞周期。如淋巴细胞、肝、肾细胞等。终终端端细细胞胞：指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称不分裂细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等。G0期细胞和终末分化细胞的界限有时难以划分，有的细胞过去认为属于终末分化细胞，目前可能被认为是G0期细胞。（二）（二）（二）（二）细胞周期中各个不同时期及其主要事件细胞周期中各个不同时期及其主要事件细胞周期中各个不同时期及其主要事件细胞周期中各个不同时期及其主要事件1、G1期期 与DNA合成启动相关，开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、RNA、碳水化合物、脂等，同时染色质去凝集。2、S期期 DNA复制与组蛋白合成同步，组成核小体串珠结构。3、G2期期 DNA复制完成以后进入G2期，在G2期合成一定数量的蛋白质和RNA分子。4、M期期 M期即细胞分裂期，真核细胞的细胞分裂主要包括两种方式，即有丝分裂（mitosis）和减数分裂（meiosis）。遗传物质和细胞内其他物质分配给子细胞。DNA复制与组蛋白合成同步复制与组蛋白合成同步肝肝切除切除T3H-亮氨酸亮氨酸 14C-胸腺嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷Eucaryotic Cell Cycle A typical mammalian cell has a cell cycle time of 24 hours,with 12 hr G1,6-8 hr S,3-4 hr G2,and 1 hr M 1、脉冲标记、脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法：复制和细胞分裂指数观察测定法：又称标记有丝分裂百分率法（percentage labeled mitoses，PLM）：对测定细胞进行脉冲标记、定时取材、利用放射自显影技术显示标记细胞，通过统计标记有丝分裂细胞百分数的办法来测定细胞周期。2、流式细胞仪测定法流式细胞仪测定法（Flow Cytometry）缩时摄像技术，可以得到准确的细胞周期时间及分裂间期和分裂期的准确时间。（三）（三）（三）（三）细胞周期时间的测定细胞周期时间的测定细胞周期时间的测定细胞周期时间的测定有关名词：TG1：G1期的持续时间TG2：G2期的持续时间TS：S期的持续时间TM：M期的持续时间TC：一个细胞周期的持续时间PLM：标记的有丝分裂细胞所占的比例TDR：胸腺嘧啶核苷，是DNA的特异前体，能被S期细胞摄入，而掺进DNA中。通常使用的是3H或者14C标记的TDR。测定原理（图13-2）：待测细胞经 3H-TDR 标记后，所有 S 期细胞均被标记。S 期细胞经 G2 期才进入 M 期，所以一段时间内PLM=0。开始出现标记 M 期细胞时，表示处于 S 期最后阶段的细胞，已渡过 G2 期，所以从 PLM=0 到出现 PLM 的时间间隔为 TG2。S期细胞逐渐进入 M 期，PLM 上升，到达到最高点的时候说明来自处于 S最后阶段的细胞，已完成 M，进入 G1 期。所以从开始出现 M 到 PLM 达到最高点（100%）的时间间隔就是 TM。当 PLM 开始下降时，表明处于 S 期最初阶段的细胞也已进入 M 期，所 以出现 LM 到 PLM 又开始下降的一段时间等于 TS。从 LM 出现到下一次 LM 出现的时间间隔就等于 TC，根据 TC=TG1+TS+TG2+TM 即可求出 TG1 长度。事实上由于一个细胞群体中 TC 和各时相不尽相同，第一个峰常达不到100%，以后的峰会发生衰减，PLM 不一定会下降到零，所以实际测量时，常以（TG2+1/2TM）-TG2 的方式求出 TM。50100TG20TMTsTcTG2+1/2TMTPLM常以（TG2+1/2TM）-TG2的方式求出TM 是指在自然过程中发生或经人为处理造成的细胞周期同步化。前者称自然同步化，后者称为人工同步化。1、自然同步化、自然同步化、多核体：如：粘菌、疟原虫。、某些水生动物的受精卵：如海胆、海参、两栖类。、增殖抑制解除后的同步分裂：如真菌的休眠孢子移入适宜环境后，它们一起发芽，同步分裂。（四）（四）（四）（四）细胞同步化（细胞同步化（细胞同步化（细胞同步化（synchronizationsynchronization）受精卵早期卵裂受精卵早期卵裂（1 1）选择同步化：）选择同步化：）选择同步化：）选择同步化：人为地将处于不同时期的细胞分离开来，从而获得不同时期的细胞群体。有有丝丝分分裂裂选选择择法法：用于单层贴壁生长细胞。M期细胞与培养皿的附着性低，振荡脱离器壁收集。优点：操作简单，同步化程度高，细胞不受药物伤害。缺点：获得的细胞数量较少（分裂细胞约占1%2%）。密密度度梯梯度度离离心心法法：根据不同时期的细胞在体积和重量上存在差别进行分离。M期细胞体积大，可用离心分离。优点：方法简单省时，效率高。可用于任何悬浮培养的细胞。缺点：对大多数种类的细胞并不适用。2 2、人工同步化、人工同步化、人工同步化、人工同步化 DNA合成阻断法：合成阻断法：选用DNA合成的抑制剂，可逆地抑制DNA合成。常用TDR双阻断法：在细胞处于对数生长期的培养基中加入过量TDR（Hela 2mol/L；CHO 7.5mol/L）。S期细胞被抑制，停在G1/S交界处。移去TDR，释放时间大于 TS 时，再次加入过量 TDR细胞继续运转至G1/S交界处，被过量TDR抑制而停止。优点：同步化程度高，几乎适合于所有体外培养的细胞体系。缺点：诱导过程可造成细胞非均衡生长，个别细胞体积增大。（2 2）诱导同步化：）诱导同步化：）诱导同步化：）诱导同步化：分裂分裂中期阻断法中期阻断法 通过抑制微管聚合来抑制细胞分裂器的形成，将细胞阻断在细胞分裂中期。用秋水仙素等细胞分裂抑制剂将细胞阻断在中期。优点是是操作简便，效率高，没有不均衡生长现象，缺点是这些药物的毒性相对较大，可逆性较差。条件依赖性突变株在细胞周期同步化中的条件依赖性突变株在细胞周期同步化中的应用应用应用应用 将与细胞周期调控有关的条件依赖性突变株转移到限定条件下培养，所有细胞便被同步化在细胞周期中某一特定时期。（五）特异的细胞周期（五）特异的细胞周期（五）特异的细胞周期（五）特异的细胞周期特异的细胞周期是指那些特殊的细胞所具有的与标准的细胞周期相比有着鲜明特点的细胞周期。1、爪蟾早期胚胎细胞的细胞周期爪蟾早期胚胎细胞的细胞周期细胞分裂快，G1 期，G2 期非常短，S 期也短（所有复制子都激活），以至认为仅含有 S 期和 M 期。无需临时合成其它物质子细胞在 G1、G2 期并不生长，越分裂体积越小细胞周期调控因子和调节机制与一般体细胞标准的细胞周期基本是一致的。2 2、酵母细胞的细胞周期、酵母细胞的细胞周期酵母细胞的细胞周期与标准的细胞周期在时相和调控方面相似。酵母细胞周期明显特点:-酵母细胞周期持续时间较短；细胞分裂过程属于封闭 式，即在细胞分裂时核膜不解聚；-纺锤体位于细胞核内；在一定环境下，也进行有性繁 殖。3 3、植物细胞的细胞周期、植物细胞的细胞周期 植物细胞的细胞周期与动物细胞的标准细胞周期非常相 似，含有G1期、S期、G2期和M期四个时期。植物细胞不含中心体，但在细胞分裂时可以正常组装纺 锤体。植物细胞以形成中间板的形式进行胞质分裂。4 4、细菌的细胞周期、细菌的细胞周期慢生长细菌细胞周期过程与真核细胞周期过程有一定相似之处。其 DNA 复制之前的准备时间与 G1 期类似。分裂之前的准备时间与 G2 期类似。再加上 S 期和 M 期，细菌的细胞周期也基本具备四个时期。细菌在快速生长情况下，如何协调快速分裂和最基本的DNA复制速度 之间的矛盾？-细菌在上一轮细胞分裂结束时，细胞内的DNA已经复制到一半。二、有丝分裂二、有丝分裂l为了便于描述，人为的划分为六个时期：间期（interphase）；前期(prophase)；前中期(premetaphase)；中期(metaphase)；后期(anaphase)；末期(telophase)。l其中间期包括G1期、S期和G2期，主要进行DNA复制、中心体复制、细胞体积增大等准备工作。（一）有丝分裂过程（一）有丝分裂过程（一）有丝分裂过程（一）有丝分裂过程1 1、前期、前期、前期、前期(prophase)主要特点：染色质凝缩 分裂极确立与纺锤体开始形成 核仁解体。核膜消失。标志前期开始的第一个特征是染色质开始浓缩（condensation）通过螺旋 化和折叠，变短变粗，形成形成光学显微镜下可以分辨的染色体 有丝分 裂染色体(mitotic chromosome）；这种染色体由两条染色单体 (chromatid)构成。在前期末，染色体主缢痕部位形成一种蛋白复合物称为动粒(kinetochore)动粒动粒 第二个特征细胞骨架解聚，有丝分裂纺锤体（mitotic spindle）开始装配。-间期动物细胞含一个MTOC，即中心体，在 S 期末期末，两 个中心粒在各自垂直的方向复制出一个中心粒，形成两 个中心体。-前期开始前期开始时，2 个中心体移向细胞两极，并同时组织微 管生长，由两极形成的微管通过微管结合蛋白在正极末 端相连，最后形成有丝分裂纺锤体。Golgi 体、ER 等细胞器解体，形成小的膜泡。纺锤体纺锤体2 2、前中期前中期（prometaphaseprometaphase）指由核膜解体到染色体排列到赤道面(equatorial plane)这一阶段核膜破裂成小的膜泡，这一过程是由核纤层蛋白中特异的 Ser 残基 磷酸化导致核纤层解体。纺锤体微管与染色体的动粒结合，捕捉住染色体。每个已复制的染 色体有两个动粒，朝相反方向，保证与两极的微管结合；纺锤体微 管捕捉住染色体后，形成三种类型的微管。不断运动的染色体开始移向赤道板。细胞周期也由前中期逐渐向中 期运转。图13-4 左，前中期；右，中期（图片来自http:/www.wadsworth.org/）核纤层解体核纤层解体l纺锤体有三种微管结构：纺锤体有三种微管结构：极极体体微微管管（polar mt）：两极间的微管，在纺锤体中部重叠，重叠部位结合有分子马达。负责将两极推开。着着丝丝点点微微管管（kinetochore mt）：由中心体发出，连接在着丝点上，负责将染色体牵引到纺锤体上，着丝点上具有马达蛋白。星星体体微微管管（astral mt）：由中心粒放射出来的微管。植物没有中心粒和星体，其纺锤体称无星纺锤体。有两类马达蛋白参与染色体、分裂极的分离，一类是dynein，另一类是kinesin。图片来自http:/www.wadsworth.org/Two centrosomes,and their forming radial arrays of astral microtubules separating on the surface of an early prophase newt lung cell nucleus.3、中期中期（metaphase）所有染色体排列到赤道板(Metaphase Plate)上，标志着细胞分裂已进入中期。着丝粒微管动态平衡形成的张力是确保染色体正确排列在赤道板上机制。细胞融合与细胞融合与PCC（a）M期细胞与期细胞与G1期细胞融合；（期细胞融合；（b）M期细胞与期细胞与S期细胞融合；（期细胞融合；（c）M期细胞与期细胞与G2期细胞融合期细胞融合