烟草生理学实验精品文稿.ppt

烟草生理学实验第1页，本讲稿共13页实验实验3烟叶可溶性糖的测定烟叶可溶性糖的测定【蒽酮法蒽酮法】14第2页，本讲稿共13页【实验目的实验目的】植植物物体体内内的的碳碳素素营营养养状状况况以以及及农农产产品品的的品品质质性性状状，常常以以可可溶溶性性糖糖和和淀淀粉粉的的含含量量作作为为重重要要指指标标，本本实实验验学学习习定定量量测测定定烟烟叶叶可可溶性糖含量的方法。溶性糖含量的方法。13第3页，本讲稿共13页【实验方法实验方法】蒽酮法蒽酮法 13第4页，本讲稿共13页【原原 理理】糖糖在在浓硫酸浓硫酸作用下，可经脱水反应生成作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠糠醛或羟甲基糠醛醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿蓝绿色糠醛衍生物色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色深浅与糖含量，在一定范围内，颜色深浅与糖含量成正比，故可用于糖的定量。成正比，故可用于糖的定量。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行比色。，故在此波长下进行比色。12第5页，本讲稿共13页【仪器与用具仪器与用具】分光光度计；电炉；铝锅；分光光度计；电炉；铝锅；20ml刻度试管；刻度试管；刻度吸管刻度吸管5ml 1支，支，1ml 2支；记号笔；吸水支；记号笔；吸水纸适量。纸适量。9第6页，本讲稿共13页【试试 剂剂】1蒽酮乙酸乙酯试剂：蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮取分析纯蒽酮1g，溶，溶于于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。热溶解。2浓硫酸浓硫酸：比重：比重1.84 第7页，本讲稿共13页【实验方法实验方法】1标准曲线的制作标准曲线的制作取取20ml刻度试管刻度试管11支，从支，从010分别编号，按分别编号，按表表1加入溶液和水。加入溶液和水。8第8页，本讲稿共13页然然后后按按顺顺序序向向试试管管中中加加入入0.5ml蒽蒽酮酮乙乙酸酸乙乙酯酯试试剂剂和和5ml浓浓硫硫酸酸，充充分分振振荡荡，立立即即将将试试管管放放入入沸沸水水浴浴中中，逐逐管管均均准准确确保保温温1min，取取出出后后自自然然冷冷却却至至室室温温，以以空空白白作作参参比比，在在630nm波波长长下下测测其其光光密密度度，以以光光密密度度为为纵纵坐坐标标，以以糖糖含含量量为为横横坐坐标标，绘绘制制标准曲线，并求出标准线性方程。标准曲线，并求出标准线性方程。第9页，本讲稿共13页2可溶性糖的提取可溶性糖的提取取新鲜烟草叶片，擦净表面污物，剪碎混匀取新鲜烟草叶片，擦净表面污物，剪碎混匀（尽量剪碎），称取（尽量剪碎），称取0.100.30g，共，共3份。分份。分别放入别放入3支刻度试管中，加入支刻度试管中，加入510ml蒸馏水，蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取（提取2次）次），提取液过滤入，提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。及残渣，定容至刻度。第10页，本讲稿共13页3显色测定显色测定吸取样品提取液吸取样品提取液0.5ml于于20ml刻度试管中（重刻度试管中（重复复2次），加蒸馏水次），加蒸馏水1.5ml，分别加入蒽酮乙酸，分别加入蒽酮乙酸乙酯试剂、浓硫酸溶液，以下步骤与标准曲乙酯试剂、浓硫酸溶液，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。线测定相同，测定样品的光密度。第11页，本讲稿共13页4计算可溶性糖的含量计算可溶性糖的含量由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。试样品中糖含量。可溶性糖含量可溶性糖含量(mg/g)=式中式中 C标准方程求得糖量标准方程求得糖量(g)a吸取样品液体积吸取样品液体积(ml)V提取液量提取液量(ml)n 稀释倍数稀释倍数 W组织重量组织重量(g)第12页，本讲稿共13页作作 业业1.1.简述蒽酮法测定可溶性糖的基本原理简述蒽酮法测定可溶性糖的基本原理及测定过程中的影响因素。及测定过程中的影响因素。THE END第13页，本讲稿共13页