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关于紫外可见分析法第一页，本课件共有77页2概述紫外紫外-可见分光光度法：根据物质分子对可见分光光度法：根据物质分子对200-800 nm波长波长范围的光选择性吸收的特性，建立起来的定性、定量分析范围的光选择性吸收的特性，建立起来的定性、定量分析方法。方法。分子吸收紫外可见光发生电子能级跃迁；产生紫外可见吸分子吸收紫外可见光发生电子能级跃迁；产生紫外可见吸分子吸收紫外可见光发生电子能级跃迁；产生紫外可见吸分子吸收紫外可见光发生电子能级跃迁；产生紫外可见吸收光谱收光谱收光谱收光谱分子结构中有产生紫外可见吸收的能级跃迁类型分子结构中有产生紫外可见吸收的能级跃迁类型分子结构中有产生紫外可见吸收的能级跃迁类型分子结构中有产生紫外可见吸收的能级跃迁类型-分子才能分子才能分子才能分子才能吸收紫外可见光。吸收紫外可见光。吸收紫外可见光。吸收紫外可见光。特点：特点：灵敏度可达灵敏度可达1010-4-4-10-10-6-6g/mlg/ml准确度准确度 0.2%-0.5%0.2%-0.5%可用于结构鉴定、定性和定量分析可用于结构鉴定、定性和定量分析第二页，本课件共有77页3 紫外可见光谱是由分子中紫外可见光谱是由分子中价电子价电子在不同的分子轨道之间跃迁产生的。在不同的分子轨道之间跃迁产生的。一、电子跃迁类型一、电子跃迁类型一、电子跃迁类型一、电子跃迁类型第一节 基本原理和概念饱和单键的饱和单键的 电子电子 不饱和双键的不饱和双键的 电子电子 未成键的未成键的 n 电子（弧对电子）电子（弧对电子）轨道：轨道：电子围绕原子或分子运动的几率电子围绕原子或分子运动的几率 轨道不同，电子所具有能量不同轨道不同，电子所具有能量不同第三页，本课件共有77页4反键轨道反键轨道成键轨道成键轨道原子轨道线性组合成分子轨道原子轨道线性组合成分子轨道原子轨道线性组合成分子轨道原子轨道线性组合成分子轨道第四页，本课件共有77页5跃迁类型：分子轨道：分子轨道：分子轨道：分子轨道：第五页，本课件共有77页6 （1）*跃迁跃迁 饱和烃（甲烷，乙烷）饱和烃（甲烷，乙烷）很高，很高，150nm（远紫外区）（远紫外区）（2）*跃迁跃迁 处于处于 成键轨道上的电子跃迁到成键轨道上的电子跃迁到*反键轨道反键轨道，不饱和有机化合物不饱和有机化合物-C=C-,很大很大（104）为强吸收。为强吸收。共轭体系共轭体系max（3）n*跃迁跃迁 孤对孤对n电子跃迁到电子跃迁到*反键轨道反键轨道,CO；CN；NN,较小（较小（10-100），吸收波长），吸收波长200400nm （4）n*跃迁跃迁孤对孤对n电子跃迁到电子跃迁到*反键轨道，反键轨道，含杂原子的饱和有机化合物含杂原子的饱和有机化合物 第六页，本课件共有77页7max 104 10_100按能量大小：按能量大小：*n *n*n*n*CH3CH3NH2OHC=CC=OC=SN=N E跃迁类型跃迁类型实例实例C=O第七页，本课件共有77页8（5）电荷迁移跃迁）电荷迁移跃迁 电磁辐射照射时，电子在分子内从给予体向接受体相电磁辐射照射时，电子在分子内从给予体向接受体相联系的轨道上跃迁。联系的轨道上跃迁。特点：特点：摩尔吸光系数较大。摩尔吸光系数较大。maxmax10104 4,定量分析定量分析 的检测灵敏度比较高的检测灵敏度比较高（6）配位场跃迁）配位场跃迁 发生在过渡元素的配位化合物中。发生在过渡元素的配位化合物中。能量相等的能量相等的d轨道或轨道或f轨道分裂成能量不等的轨道轨道分裂成能量不等的轨道特点：特点：摩尔吸光系数较小。摩尔吸光系数较小。maxmax10104 强带强带 max102 弱带弱带二、相关的基本概念二、相关的基本概念第十二页，本课件共有77页13吸收带：吸收峰在紫外-可见光谱中的位置可分为：R带、K带、B带、E带、电荷转移吸收带、配位体场吸收带1 1R R带：带：由由n*n*跃迁产生跃迁产生含杂原子的不饱和基团含杂原子的不饱和基团:C:CO O；C CN N；N NN N E E小，小，maxmax100;200nm;200nm;maxmax10104 4共轭体系增长，共轭体系增长，maxmax红移，红移，maxmax 溶剂极性溶剂极性，max max 红移（长移）红移（长移）三、吸收带与分子结构的关系三、吸收带与分子结构的关系第十三页，本课件共有77页143 3B B带：带：芳香族化合物的主要特征吸收带芳香族化合物的主要特征吸收带 苯苯 maxmax 256nm256nm，宽带，具有精细结构；，宽带，具有精细结构；maxmax=200=200极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失极性溶剂中，或苯环连有取代基，其精细结构消失三、吸收带与分子结构的关系三、吸收带与分子结构的关系第十四页，本课件共有77页154 4E E带：带：芳香族化合物的特征吸收带芳香族化合物的特征吸收带 E E1 1 180nm 180nm maxmax10104 4 （常观察不到）（常观察不到）E E2 2 200nm 200nm maxmax=7000=7000 强吸收强吸收苯环被发色团取代且与苯环共轭时，苯环被发色团取代且与苯环共轭时，E E2 2带与带与K K带合并带合并 一起红移（长移），被助色团取代一起红移（长移），被助色团取代E E2 2带带maxmax 和和都变大都变大三、吸收带与分子结构的关系三、吸收带与分子结构的关系第十五页，本课件共有77页161.1.位阻影响位阻影响 共轭效应，吸收带长移，吸光系数增加共轭效应，吸收带长移，吸光系数增加 发色团在同一平面，易形成共轭发色团在同一平面，易形成共轭 位阻影响分子的平面性位阻影响分子的平面性 max280nm(10500)max295.5nm(29000)顺式二苯乙烯顺式二苯乙烯反式二苯乙烯反式二苯乙烯四、影响吸收带位置的因素四、影响吸收带位置的因素第十六页，本课件共有77页172.2.跨环效应跨环效应 有有、不饱和醛酮结构，适当的立体排列使不饱和醛酮结构，适当的立体排列使R R带长移，吸收强度增强带长移，吸收强度增强 四、影响吸收带位置的因素四、影响吸收带位置的因素第十七页，本课件共有77页183.3.溶剂效应溶剂效应（1 1）对）对maxmax影响：影响：n-*n-*跃迁：溶剂极性跃迁：溶剂极性，maxmax蓝移蓝移 -*-*跃迁：溶剂极性跃迁：溶剂极性，maxmax红移红移 四、影响吸收带位置的因素四、影响吸收带位置的因素（2 2）对吸收光谱精细结构影响）对吸收光谱精细结构影响 溶剂极性溶剂极性，苯环精细结构消失，苯环精细结构消失第十八页，本课件共有77页194.pH4.pH值的影响值的影响 影响物质存在型体，影响吸收波长影响物质存在型体，影响吸收波长max210.5nm,270nmmax235nm,287nmOH-H+-四、影响吸收带位置的因素：四、影响吸收带位置的因素：第十九页，本课件共有77页20描述物质对描述物质对单色光单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系五、朗伯五、朗伯-比尔定律比尔定律1 1、LambertLambert定律定律：AlAl（吸收层厚度）2 2、BeerBeer定律定律：ACAC（吸收物质浓度）二者的结合称为朗伯二者的结合称为朗伯比耳定律，其数学表达式为：比耳定律，其数学表达式为：A A：吸光度：吸光度E E：吸光系数：吸光系数C C：溶液浓度：溶液浓度l l：光路长度：光路长度第二十页，本课件共有77页211、适用条件：、适用条件：1.单色光单色光 2.稀溶液（稀溶液（10-2 10-5 M）2、吸收度的加和性、吸收度的加和性：a、b、c三种物质共存时3、该定律适用于固体、液体和气体样品该定律适用于固体、液体和气体样品公式讨论：公式讨论：第二十一页，本课件共有77页224、吸光系数（E）：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的 吸光度。根据浓度单位的不同，分为：（1）摩尔吸光系数）摩尔吸光系数 在一定下，c=1mol/L，l=1cm时的吸光度（2）百分吸光系数）百分吸光系数 在一定下，c=1g/100ml，l=1cm时的吸光度。（3）两者关系）两者关系公式讨论：公式讨论：第二十二页，本课件共有77页23吸光系数的讨论吸光系数的讨论1、吸光系数不随浓度和光程长度的改变而改变，仅与物质 本身的性质有关，与待测物浓度无关；2、（1）不同物质，对同一，一般不同；（，吸光能力）（2）同一物质，对不同，一般不同（max）第二十三页，本课件共有77页24例：氯 霉 素（323.15），max=278 nm，C=2.00mg/100ml T%=24.3%求：,第二十四页，本课件共有77页25六、偏离六、偏离BeerBeer定律的因素定律的因素第二十五页，本课件共有77页26（一）（一）化学因素化学因素Lambert-BeerLambert-Beer定律适用范围：稀溶液（定律适用范围：稀溶液（1010-2-2mol/Lmol/L）当溶液中浓度改变时，溶液可能产生离解，缔合与溶剂间的作用等而产生偏离。a.6.3610-6mol/L b.1.2710-4mol/L c.5.7910-4mol/L亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱亚甲蓝阳离子水溶液的吸收光谱六、偏离六、偏离BeerBeer定律的因素定律的因素例：亚甲蓝阳离子水溶液单体吸收峰在660nm，二聚体吸收峰在610nm。随浓度增大660nm吸收峰减弱，610nm处吸收峰增强，从而使吸收度与浓度关系发生偏离。第二十六页，本课件共有77页27（二）（二）光学因素光学因素a.a.非单色光非单色光 理论要求：平行单色光，理论要求：平行单色光，实际：光源复合光实际：光源复合光 六、偏离六、偏离BeerBeer定律的因素定律的因素照射物质的光经单色器分光后照射物质的光经单色器分光后 并非真正单色光并非真正单色光其波长宽度由入射狭缝的宽度其波长宽度由入射狭缝的宽度 和棱镜或光栅的分辨率决定和棱镜或光栅的分辨率决定为了保证透过光对检测器的响为了保证透过光对检测器的响 应，必须保证一定的狭缝宽度应，必须保证一定的狭缝宽度这就使分离出来的光具一定的这就使分离出来的光具一定的 谱带宽度谱带宽度第二十七页，本课件共有77页28b.b.杂散光的影响：杂散光的影响：杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远内，与所选波长相距较远杂散光来源：杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成仪器本身缺陷；光学元件污染造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值c.c.反射光和散射光的影响：反射光和散射光的影响：反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光反射光和散射光均是入射光谱带宽度内的光可使透射光减弱，可使透射光减弱，AA，一般可用空白对比校正消除，一般可用空白对比校正消除d d非平行光的影响：非平行光的影响：使光程使光程，l l ，AA六、偏离六、偏离BeerBeer定律的因素定律的因素第二十八页，本课件共有77页29（三）透光率的测量误差（三）透光率的测量误差TT 影响测定结果的相对误差两个因素：影响测定结果的相对误差两个因素：T T和和TT 六、偏离六、偏离BeerBeer定律的因素定律的因素第二十九页，本课件共有77页30TT影响因素：影响因素：1 1）暗噪音：）暗噪音：与检测器和放大电路等各部件的不确切性有关，与检测器和放大电路等各部件的不确切性有关，与光讯号无关与光讯号无关，可视为一个常量。，可视为一个常量。其在其在A为为0.20.7范围内，造成相对误差较小范围内，造成相对误差较小，为测量最适宜范围。为测量最适宜范围。0.4343第三十页，本课件共有77页31 讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的电子迁讯号噪音亦称讯号散粒噪音。光敏元件受光照射时的电子迁移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值移，每一单位时间中电子迁移数量是不相等的，而是在某一均值周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。周围的随机数，形成测量光强时的不确定性。随机数变动的幅随机数变动的幅度随光照增强而增大，与光的波长及光敏元件的品质有关。度随光照增强而增大，与光的波长及光敏元件的品质有关。2 2）讯号噪音：）讯号噪音：与光讯号有关与光讯号有关第三十一页，本课件共有77页32 第二节第二节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计第三十二页，本课件共有77页33第三十三页，本课件共有77页34一、基本组成一、基本组成1.1.光源光源 钨灯或卤钨灯钨灯或卤钨灯可见光源可见光源 3501000nm氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200400nm2单色器：单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件包括狭缝、准直镜、色散元件第三十四页，本课件共有77页35 棱镜棱镜对不同波长的光折射率不同对不同波长的光折射率不同色散元件色散元件 分出光波长不等距分出光波长不等距 光栅光栅衍射和干涉衍射和干涉 分出光波长等距分出光波长等距第三十五页，本课件共有77页363吸收池吸收池：玻璃玻璃能吸收能吸收UV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区 石英石英不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：检测器：将光信号转变为电信号的装置将光信号转变为电信号的装置5记录装置：记录装置：讯号处理和显示系统光电池光电池光电管光电管光电倍增管光电倍增管二极管阵列检测器二极管阵列检测器第三十六页，本课件共有77页37二、分光光度计的类型二、分光光度计的类型1 1单光束分光光度计：单光束分光光度计：特点：使用时来回拉动吸收池 移动误差对光源要求高比色池配对(一一)几种光路类型几种光路类型第三十七页，本课件共有77页382 2双光束分光光度计双光束分光光度计：特点：不用拉动吸收池，可以减小移动误差对光源要求不高可以自动扫描吸收光谱 第三十八页，本课件共有77页393 3双波长分光光度计双波长分光光度计 特点：利用吸光度差值定量消除干扰和吸收池不匹配引起的误差第三十九页，本课件共有77页404 4光多道二极管阵列检测分光光度计光多道二极管阵列检测分光光度计第四十页，本课件共有77页41第四十一页，本课件共有77页42(二二)光学性能光学性能1.1.波长范围：波长范围：190-1100nm190-1100nm2.2.波长准确度：波长准确度：仪器显示波长与实际波长之差仪器显示波长与实际波长之差0.3nm0.3nm3.3.波长重现性：波长重现性：0.2nm0.2nm4.4.透光率范围：透光率范围：0-300%0-300%5.5.吸光度测量范围：吸光度测量范围：-0.447-0.447+3.00+3.006.6.光度准确度：光度准确度：0.3%0.3%7.7.光度重复性：光度重复性：0.3%0.3%8.8.分辨率：分辨率：单色器分辨两条靠近的谱线的能力单色器分辨两条靠近的谱线的能力.260nm.260nm，=0.3nm9.9.杂散光杂散光：220nm220nm处（处（1%NaI1%NaI）0.1%0.1%第四十二页，本课件共有77页43(三三)仪器的校正仪器的校正1.1.波长的校正波长的校正氢灯或氘中的较强谱线氢灯或氘中的较强谱线486.13nm(F486.13nm(F线线)和和656.28nm656.28nm（C C线）线）稀土玻璃（镨钕、钬）、某些元素（汞、钾、铯）苯蒸汽检查稀土玻璃（镨钕、钬）、某些元素（汞、钾、铯）苯蒸汽检查和校正波长读数。和校正波长读数。第四十三页，本课件共有77页442.2.吸光度的校正吸光度的校正60mg60mg重铬酸钾用重铬酸钾用0.005mol/L0.005mol/L的硫酸溶液稀释至的硫酸溶液稀释至1000ml1000ml，在规定，在规定波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。波长处测定并计算吸收系数，与规定值比较。规定值：规定值：235nm 123.0235nm 123.0126.0126.0 257nm 142.8 257nm 142.8146.2146.2 313nm 47.0 313nm 47.050.350.3 350nm 105.5 350nm 105.5108.5108.53.3.吸收池校正吸收池校正 两吸收池测定的差值小于两吸收池测定的差值小于1%1%第四十四页，本课件共有77页45一、定性分析一、定性分析二、定量分析二、定量分析 定性鉴别定性鉴别纯度检查和杂质限量测定纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法单组分的定量方法多组分的定量方法多组分的定量方法第三节第三节 紫外可见分光光度分析方法紫外可见分光光度分析方法三、结构分析三、结构分析第四十五页，本课件共有77页46一、定性分析（一）定性鉴别（一）定性鉴别定性鉴别的依据定性鉴别的依据吸收光谱的特征吸收光谱的特征v吸收光谱的形状吸收光谱的形状v吸收峰的数目吸收峰的数目v吸收峰的位置（波长）吸收峰的位置（波长）v吸收峰的强度吸收峰的强度v相应的吸光系数相应的吸光系数结构完全相同的化合物应有完全相同的吸收光谱结构完全相同的化合物应有完全相同的吸收光谱但吸收光谱相同的化合物却不一定结构相同但吸收光谱相同的化合物却不一定结构相同第四十六页，本课件共有77页471.1.对比吸收光谱的特征值对比吸收光谱的特征值一、定性分析一、定性分析第四十七页，本课件共有77页482.2.对比吸光度或吸光系数的比值：对比吸光度或吸光系数的比值：例：例：一、定性分析一、定性分析第四十八页，本课件共有77页493.3.对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性同一测定条件下同一测定条件下,与标准对照物谱图或标准谱图与标准对照物谱图或标准谱图进行对照比较进行对照比较一、定性分析一、定性分析第四十九页，本课件共有77页50（二）纯度检查和杂质限量测定（二）纯度检查和杂质限量测定1 1纯度检查（杂质检查）纯度检查（杂质检查）1 1）主成分无吸收，杂质有吸收）主成分无吸收，杂质有吸收 直接考察杂质直接考察杂质 例如：例如：测乙醇中是否含有少量苯。测乙醇中是否含有少量苯。苯在苯在256nm256nm处有吸收峰，乙醇没有处有吸收峰，乙醇没有2 2）主成分强吸收，杂质无吸收）主成分强吸收，杂质无吸收 /弱吸收弱吸收 与纯品比较，与纯品比较，EE3 3）杂质强吸收）杂质强吸收 主成分吸收主成分吸收与纯品比较与纯品比较 EE，光谱变形，光谱变形一、定性分析一、定性分析第五十页，本课件共有77页512杂质限量的检测：杂质限量的检测：例：例：肾上腺素中微量杂质肾上腺素中微量杂质肾上腺酮含量计算肾上腺酮含量计算 制成制成2mg/ml2mg/ml的的HClHCl溶液，溶液，310nm310nm下测定下测定 规定规定 A A3103100.05.0.05.求杂质限量？求杂质限量？肾上腺酮肾上腺酮 值为值为435435一、定性分析一、定性分析第五十一页，本课件共有77页52（一）单组分的定量方法（一）单组分的定量方法 1 1吸光系数法吸光系数法 2 2标准曲线法标准曲线法 3 3对照法：外标一点法对照法：外标一点法注意注意:1 1）选择吸收光谱中的吸收峰对应的波长）选择吸收光谱中的吸收峰对应的波长 2 2）多个吸收峰，选择无干扰的、较高的峰）多个吸收峰，选择无干扰的、较高的峰 3 3）测定波长大于溶剂的截止波长）测定波长大于溶剂的截止波长二、定量分析二、定量分析第五十二页，本课件共有77页531 1吸光系数法（绝对法）吸光系数法（绝对法）例：例：维生素维生素B B1212 的水溶液在的水溶液在361nm361nm处的百分吸光系数为处的百分吸光系数为207207，用用1cm1cm比色池测得某维生素比色池测得某维生素B B1212溶液的吸光度是溶液的吸光度是0.4140.414，求该溶液的浓度求该溶液的浓度?解：解：二、定量分析二、定量分析第五十三页，本课件共有77页例：精密称取B12样品25.0mg，用水溶液配成100ml。精密吸取10.00ml，又置100ml容量瓶中，加水至刻度。取此溶液在1cm的吸收池中，于361nm处测定吸光度为0.507，求B12的百分含量？已知361nm处的百分吸光系数为207解：第五十四页，本课件共有77页552 2标准曲线法标准曲线法配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测配制一系列浓度不同的标准溶液，在一定波长下分别测定吸光度定吸光度A A。以以A A为纵坐标，浓度为纵坐标，浓度c c为横坐标，绘制为横坐标，绘制A-cA-c标准曲线。标准曲线。完全相同的条件下，测定被测溶液的吸光度，完全相同的条件下，测定被测溶液的吸光度，并从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量。并从标准曲线上找出对应的被测溶液浓度或含量。Blank Standard SampleSample二、定量分析二、定量分析第五十五页，本课件共有77页56示例 芦丁含量测定0.710mg/25mL0.710mg/25mL第五十六页，本课件共有77页573 3 3 3对照法对照法对照法对照法 相同条件下配制样品溶液和标准溶液，在同一波长处测二相同条件下配制样品溶液和标准溶液，在同一波长处测二者吸光度者吸光度例：例：精密吸取精密吸取B B1212注射液注射液2.50mL2.50mL，加水稀释至，加水稀释至10.00mL10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品另配制对照液，精密称定对照品25.00mg 25.00mg，加水稀释至，加水稀释至1000mL1000mL。在在361nm361nm处，用处，用1cm1cm吸收池，分别测定吸光度为吸收池，分别测定吸光度为0.5080.508和和0.5180.518，求求B B1212注射液注射液的浓度？注射液注射液的浓度？二、定量分析二、定量分析第五十七页，本课件共有77页58注：当样品溶液与标准品溶液的注：当样品溶液与标准品溶液的 稀释倍数相同时稀释倍数相同时第五十八页，本课件共有77页59 （二）多组分的定量方法（二）多组分的定量方法三种情况：三种情况：1 1两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）2 2两组分吸收光谱部分重叠两组分吸收光谱部分重叠 3.3.两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠二、定量分析二、定量分析第五十九页，本课件共有77页601 1两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分吸收光谱不重叠（互不干扰）两组分在各自两组分在各自 maxmax下测定下测定分别按单组分定量分别按单组分定量二、定量分析二、定量分析第六十页，本课件共有77页61 2 2两组分吸收光谱部分重叠两组分吸收光谱部分重叠 11测测A1bA1b组分不干扰组分不干扰可按单组分定量测可按单组分定量测c ca a 2 2测测A2aA2a组分干扰组分干扰不能按单组分定量测不能按单组分定量测c cb b 定量定量Ca定量定量Cb二、定量分析二、定量分析第六十一页，本课件共有77页62 3 3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定 （1）解线性方程组法）解线性方程组法二、定量分析二、定量分析第六十二页，本课件共有77页63（2 2）等吸收双波长法）等吸收双波长法测定测定a a，消除，消除b b的影响的影响步骤：步骤：1.1.选择选择1 1和和2 2 对于干扰组分对于干扰组分b b，1 1和和2 2是等吸收波长；是等吸收波长；对于对于a a，两波长的吸光度之差足够大；，两波长的吸光度之差足够大；3 3两组分吸收光谱完全重叠两组分吸收光谱完全重叠混合样品测定混合样品测定二、定量分析二、定量分析第六十三页，本课件共有77页64步骤步骤2.a2.a的对照品溶液在的对照品溶液在1 1和和2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得二、定量分析二、定量分析b b的对照品溶液在的对照品溶液在1 1和和2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得样品溶液在样品溶液在1 1和和2 2处测定吸光度，得处测定吸光度，得E1a和E2a第六十四页，本课件共有77页65二、定量分析二、定量分析第六十五页，本课件共有77页66同理同理 消除消除a a的影响，测的影响，测b b二、定量分析二、定量分析第六十六页，本课件共有77页67（一）有机物的紫外吸收光谱（一）有机物的紫外吸收光谱 从紫外吸收光谱推断：从紫外吸收光谱推断：a.a.分子骨架分子骨架 b.b.发色团之间的共轭关系发色团之间的共轭关系 c.c.取代基的种类、位置和数目取代基的种类、位置和数目1.1.饱和碳氢化合物饱和碳氢化合物 跃迁类型跃迁类型：*,需很大能量需很大能量 吸收峰位置吸收峰位置：远紫外区，：远紫外区，200200400nm400nm无吸收无吸收 三、结构分析三、结构分析第六十七页，本课件共有77页682.2.含孤立助色团和生色团的有机化合物含孤立助色团和生色团的有机化合物 1 1）含有孤立助色团）含有孤立助色团 电子类型：电子类型：和和n n电子电子 跃迁类型：跃迁类型：n n*2 2）含有孤立生色团）含有孤立生色团 电子类型：电子类型：和和n n电子电子 跃迁类型：跃迁类型：n n*(190nm)*(190nm)*（150-180nm150-180nm）n n*(275-295nm)*(275-295nm)3.3.共轭烯烃共轭烯烃 两个双键只隔一个单键成共轭大两个双键只隔一个单键成共轭大键键 跃迁类型及吸收峰位置：跃迁类型及吸收峰位置：*较孤立双键能级差减少，吸收长移较孤立双键能级差减少，吸收长移 三、结构分析三、结构分析第六十八页，本课件共有77页694.4.-不饱和醛、酮、酸、酯不饱和醛、酮、酸、酯 1 1）分子特点）分子特点：C=O C=O 与与C=CC=C共轭共轭 2 2）跃迁类型及吸收峰位置）跃迁类型及吸收峰位置：*200*200260nm 260nm 约约1000010000 n n*310*310350nm 350nm 100100 3 3）一般溶剂极性增加使）一般溶剂极性增加使*吸收红移（长移）使吸收红移（长移）使n n*吸收蓝移（短移）吸收蓝移（短移）三、结构分析三、结构分析第六十九页，本课件共有77页705.5.芳香族化合物芳香族化合物 （1 1）苯和取代苯）苯和取代苯 分子特点：环状共轭体系分子特点：环状共轭体系 跃迁类型和吸收峰位置：跃迁类型和吸收峰位置：*E*E1 1，E E2 2，B B三个吸收带，有取代基长移，三个吸收带，有取代基长移，B B带精细结构简化带精细结构简化 助色团取代基：助色团取代基：产生产生n n*，E E2 2，B B吸收带长移，吸收带长移，增大，溶剂极性增加，增大，溶剂极性增加，B B精细结构简化或消失精细结构简化或消失 生色团取代基生色团取代基：B B带长移，带长移，E E2 2带带 和和K K带合并带合并三、结构分析三、结构分析第七十页，本课件共有77页71（2 2）芳香杂环化合物）芳香杂环化合物 a.a.五元芳杂环化合物五元芳杂环化合物，吸收光谱与环戊二烯相似，吸收光谱与环戊二烯相似 只有只有*，无，无n n*b.b.六元氮芳杂环化合物六元氮芳杂环化合物，与相应的芳环相似，增加，与相应的芳环相似，增加n n*，B B带强度增大，精细结构简化。带强度增大，精细结构简化。呋喃呋喃噻吩噻吩吡咯吡咯环戊二烯环戊二烯三、结构分析三、结构分析第七十一页，本课件共有77页72（二）有机物结构的研究（二）有机物结构的研究 1.1.从吸收光谱中初步推断官能团从吸收光谱中初步推断官能团 220220800nm800nm无吸收，可能无共轭体系，无羰基无吸收，可能无共轭体系，无羰基 210210250nm250nm有吸收，两个共轭单位有吸收，两个共轭单位 260260300nm300nm有强吸收，可能有有强吸收，可能有3 35 5个共轭单位个共轭单位 250250300nm300nm有弱吸收，有羰基存在有弱吸收，有羰基存在 250250300nm300nm有中吸收，有苯环存在有中吸收，有苯环存在 如果有颜色，共轭生色团一般在如果有颜色，共轭生色团一般在5 5个以上个以上三、结构分析三、结构分析第七十二页，本课件共有77页732.2.异构体的推定异构体的推定 （1 1）结构异构体）结构异构体 异构体之间利用双键位置的不同，紫外吸收光谱不同异构体之间利用双键位置的不同，紫外吸收光谱不同 （2 2）顺反异构体）顺反异构体 顺式比反式吸收波长短，顺式比反式吸收波长短，小小3.3.化合物骨架的推定化合物骨架的推定 未知化合物和已知化合物吸收光谱一致，可认为二者未知化合物和已知化合物吸收光谱一致，可认为二者具有相同的发色团。具有相同的发色团。三、结构分析三、结构分析第七十三页，本课件共有77页74三、结构分析三、结构分析第七十四页，本课件共有77页小 结1.1.掌握光度法的基本原理及使用条件：单、稀掌握光度法的基本原理及使用条件：单、稀2.2.掌握吸收系数：掌握吸收系数：，及其使用（定性定量）及其使用（定性定量）3.了解影响 Beer 定律的因素4.4.掌握仪器主要有的部件。尤其：光源掌握仪器主要有的部件。尤其：光源、吸收池吸收池 检测器检测器5.一般了解仪器光路图6.6.重点掌握定性、定量分析方法重点掌握定性、定量分析方法7 7.掌握术语：生色团、助色团、红移、紫移、掌握术语：生色团、助色团、红移、紫移、R R、K K、B B、E E带带第七十五页，本课件共有77页解：1取咖啡酸，在165干燥至恒重，精密称取10.00mg，加少量 乙醇溶解，转移至200mL容量瓶中，加水至刻度线，取此溶 液5.00mL，置于50mL容量瓶中，加6mol/L的HCL 4mL，加 水至刻度线。取此溶液于1cm比色池中，在323nm处测定吸 光度为0.463，已知该波长处的 ，求咖啡酸百分 含量第七十六页，本课件共有77页感谢大家观看第七十七页，本课件共有77页