临床常用免疫学检验.ppt

临床常用免疫学检验临床常用免疫学检验1.1.免疫功能检验免疫功能检验体液免疫体液免疫 细胞免疫细胞免疫2.2.感染免疫学诊断试验感染免疫学诊断试验病毒性肝炎；病毒性肝炎；AIDS;STD;AIDS;STD;其其它传染病；它传染病；CRPCRP3.3.自身免疫病的检验自身免疫病的检验4.4.肿瘤标志物检验肿瘤标志物检验11/16/20221免疫学检验检验医学与临床医学检验医学与临床医学检验医学（检验医学（laboratory medicine）是一门临床学科，它运用不断发展的是一门临床学科，它运用不断发展的自然科学和医学科学技术对患者血液、自然科学和医学科学技术对患者血液、尿液和各种体液标本进行检验，并以尿液和各种体液标本进行检验，并以发展检验技术、提高检验质量为重点，发展检验技术、提高检验质量为重点，达到对患者疾病的诊断、病情观察和达到对患者疾病的诊断、病情观察和预后判断等目的。预后判断等目的。11/16/20222免疫学检验（一）现代检验诊断特点（一）现代检验诊断特点主要有：主要有：自动化和智能化。自动化和智能化。高高质量控制。质量控制。微量化标本、多参数分析。微量化标本、多参数分析。流水线检测和床边检测并存。流水线检测和床边检测并存。基因基因检测前景可喜。检测前景可喜。11/16/20223免疫学检验l（二）现代检验诊断面临挑战（二）现代检验诊断面临挑战虽然现代检验诊断的技术正在长足发虽然现代检验诊断的技术正在长足发展，但也面临许多挑战。表现在：展，但也面临许多挑战。表现在：1如何选择日益增多的检验诊断项目？如何选择日益增多的检验诊断项目？2如何选择有多种方法的检验诊断项目？如何选择有多种方法的检验诊断项目？3如何判断检验诊断新项目的应用价值？如何判断检验诊断新项目的应用价值？4如何合理选择检验诊断项目，降低检验如何合理选择检验诊断项目，降低检验诊断的费用？诊断的费用？11/16/20224免疫学检验二、循证检验医学二、循证检验医学新世纪检验新世纪检验诊断高质量发展的新天地诊断高质量发展的新天地l定义循证医学（定义循证医学（evidence-basedevidence-basedmedicinemedicine，EBMEBM）指：在对患者作出新的）指：在对患者作出新的医疗决策的过程中，必须审慎、明确和医疗决策的过程中，必须审慎、明确和明智地运用当前所能获得的最佳证据。明智地运用当前所能获得的最佳证据。这里，里，“最佳最佳证据据”指不指不仅可以否定迄今可以否定迄今已被已被视为临床床诊断或断或辅助助诊断的断的“金金标准准”，并且其本身也可被未来的更准确、更，并且其本身也可被未来的更准确、更有效新有效新证据所取代。据所取代。11/16/20225免疫学检验目的主要是：目的主要是：不断弄清疾病的病因不断弄清疾病的病因和发病危险因素的证据，为临床诊断和发病危险因素的证据，为临床诊断和预防提供最为可靠的依据。和预防提供最为可靠的依据。提高提高疾病的早期诊断率，继而提高疾病的疾病的早期诊断率，继而提高疾病的治愈率。治愈率。改善患者的预后，提高患改善患者的预后，提高患者的生存质量。者的生存质量。提高临床医疗管理提高临床医疗管理和决策水平。和决策水平。精选临床检查和治疗精选临床检查和治疗方案，降低医、患双方的医疗费用，方案，降低医、患双方的医疗费用，使患者得到最合理的临床医疗服务。使患者得到最合理的临床医疗服务。促进临床医学教学水平，培养业务促进临床医学教学水平，培养业务精湛、医德高尚的临床医学人才。精湛、医德高尚的临床医学人才。11/16/20226免疫学检验 现行行传统医学是以医学是以经验医学医学为主，主，而而 EBM EBM则要求要求选用最新的、用最新的、经过临床研究机构科学床研究机构科学评价价过的、更的、更为准准确的新确的新证据，而不采用尚未据，而不采用尚未经过严格格评价的、目前仍价的、目前仍处于基于基础医学研医学研究究阶段的所段的所谓“新新证据据”。11/16/20227免疫学检验概念：循证检验医学概念：循证检验医学（evidence-based laboratory medicine，EBLM）就是按照）就是按照循证医学循证医学“以当前最佳证据以当前最佳证据为基础为基础”的原则，用临床流的原则，用临床流行病学的方法学规范检验医行病学的方法学规范检验医学的研究、设计和文献评价，学的研究、设计和文献评价，其任务是向临床医师提供反其任务是向临床医师提供反映患者真实情况的检验证据。映患者真实情况的检验证据。11/16/20228免疫学检验 循证医学同样也给检验医学带来了发展机遇。循循证医学同样也给检验医学带来了发展机遇。循证检验医学要求检验医师不仅向临床医师解释检证检验医学要求检验医师不仅向临床医师解释检验项目的意义，而且要帮助他们选择正确的检验验项目的意义，而且要帮助他们选择正确的检验项目，合理地利用实验室资源。这是因为有时候项目，合理地利用实验室资源。这是因为有时候临床医师并不一定熟悉这些新的诊断指标，相反，临床医师并不一定熟悉这些新的诊断指标，相反，过多的检查会提供一些不必要的信息和消耗不必过多的检查会提供一些不必要的信息和消耗不必要的费用，从而干扰诊断、治疗和医疗经济的合要的费用，从而干扰诊断、治疗和医疗经济的合理分配。检验医师还必须使用综合分析方法对诊理分配。检验医师还必须使用综合分析方法对诊断指标进行评价。断指标进行评价。11/16/20229免疫学检验 一些专家认为，目前应用的实验室检查项一些专家认为，目前应用的实验室检查项目，在临床应用前并未给予充分的评价。目，在临床应用前并未给予充分的评价。JaeshkeJaeshke等认为，判断一项诊断试验是否等认为，判断一项诊断试验是否有用的最终标准是：试验是否增加了有用有用的最终标准是：试验是否增加了有用的诊断信息。的诊断信息。BurkeBurke认为认为,如果一项试验主如果一项试验主要用于筛检，其敏感性一定要高，但易出要用于筛检，其敏感性一定要高，但易出现假阳性。任何新的检验只有在充分评价现假阳性。任何新的检验只有在充分评价其可靠性、准确性后才能用于临床实践。其可靠性、准确性后才能用于临床实践。而现实是，由于制造商的热情提供试剂、而现实是，由于制造商的热情提供试剂、临床医师和检验人员的欣然接受，许多新临床医师和检验人员的欣然接受，许多新检验项目在未被评价充分之前，就已被积检验项目在未被评价充分之前，就已被积极的推向了临床应用。极的推向了临床应用。11/16/202210免疫学检验第一章第一章 免疫功能检验免疫功能检验(Immunological Function Test)(Immunological Function Test)免疫功能检验分为细胞免疫功能检验免疫功能检验分为细胞免疫功能检验和体液免疫功能检验，对于了解患者的免和体液免疫功能检验，对于了解患者的免疫状态，以及细胞的各种功能，为深入研疫状态，以及细胞的各种功能，为深入研究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，究和认识机体免疫系统的生理、病理改变，阐明某些疾病的发病机制和临床诊断与治阐明某些疾病的发病机制和临床诊断与治疗将提供有利的信息。下面简单介绍临床疗将提供有利的信息。下面简单介绍临床常用的一些免疫检验项目。常用的一些免疫检验项目。11/16/202211免疫学检验一一.IgG.IgG、IgAIgA、IgMIgM测定测定 免疫球蛋白（免疫球蛋白（Immunoglobulin Immunoglobulin，Ig)Ig)是一组具有抗体活性的蛋白是一组具有抗体活性的蛋白。存在于。存在于 机体机体的血液、体液、外分泌液及某些细胞的膜的血液、体液、外分泌液及某些细胞的膜上，分为上，分为 IgG IgG、IgAIgA、IgMIgM、IgDIgD、和、和IgE IgE 五五类。其中类。其中 IgG IgG、IgAIgA、IgM IgM 含量较多，一般含量较多，一般应用单向免疫扩散法、免疫比浊法和速率应用单向免疫扩散法、免疫比浊法和速率散射比浊法测定。散射比浊法测定。11/16/202212免疫学检验参考值参考值 依年龄、性别、地区等因素有依年龄、性别、地区等因素有差异。差异。IgG IgG：6.94 6.9416.18g/L 16.18g/L IgA IgA：0.68 0.68 3.78g/L 3.78g/L IgM IgM：0.60 0.60 2.63g/L 2.63g/L临床意义临床意义 1.Ig 1.Ig 含量减低：一种或多种含量减低：一种或多种Ig Ig 水水平减少，分原发性和继发性。见于各种先平减少，分原发性和继发性。见于各种先天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。11/16/202213免疫学检验 2.Ig2.Ig含量增高：含量增高：(1)(1)多克隆性增高，见于各种慢性多克隆性增高，见于各种慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如感染、慢性肝病、某些自身免疫病，如 SLESLE、RARA、SSSS等；也见于寄生虫疾病、等；也见于寄生虫疾病、结节病等。结节病等。(2)(2)单克隆性增高，又称单克隆性增高，又称“M”“M”蛋蛋白，主要见于免疫增殖性疾病，如多发白，主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病，巨球蛋白性骨髓瘤、重链病、轻链病，巨球蛋白血症等。血症等。11/16/202214免疫学检验注意事项注意事项 Ig Ig水平与年龄、性别有一定的关系，水平与年龄、性别有一定的关系，Ig Ig 含量因检测方法不同而有差别，各地含量因检测方法不同而有差别，各地区参考值也不相同，在判断结果时应综区参考值也不相同，在判断结果时应综合考虑。如有合考虑。如有“M“M 蛋白蛋白”，可进一步作，可进一步作血清或尿液免疫电泳，检测轻链和重链。血清或尿液免疫电泳，检测轻链和重链。11/16/202215免疫学检验二二.血清总血清总IgEIgE测定测定 IgE IgE为血清中含量极少的一种免疫球蛋白，为血清中含量极少的一种免疫球蛋白，与过敏性疾病和寄生虫感染有关。目前检测与过敏性疾病和寄生虫感染有关。目前检测方法有多种，包括方法有多种，包括 ELISA ELISA、间接血凝试验、间接血凝试验（indirect hemoagglutination assay IHA indirect hemoagglutination assay IHA）、）、RIA RIA、电化学发光法、电化学发光法（electrochemiluminescence immunoassayelectrochemiluminescence immunoassay，ECLIAECLIA，）、，）、IFA IFA 等。等。参考值参考值 0.1-150IU/ml 0.1-150IU/ml11/16/202216免疫学检验临床意义临床意义 1.IgE 1.IgE增高：见于增高：见于IgEIgE型多发性骨型多发性骨髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸细胞增多症、多症、SLESLE、RARA及某些霉菌病等。及某些霉菌病等。2.IgE 2.IgE减低：一般无意义。可见于减低：一般无意义。可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。细胞毒药物治疗后。11/16/202217免疫学检验注意事项注意事项 年龄、性别均可影响总年龄、性别均可影响总IgEIgE水平。一水平。一般男性高于女性；新生儿水平低，青春般男性高于女性；新生儿水平低，青春期水平最高，期水平最高，3030岁以后逐渐下降。不同岁以后逐渐下降。不同种族血清总种族血清总IgEIgE水平也有差别，混血人种水平也有差别，混血人种比白人高比白人高3 34 4倍，黑人水平更高，黄种倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。总人水平也较高。总IgEIgE水平高不一定是过水平高不一定是过敏；过敏者总敏；过敏者总IgEIgE也不一定高。因此，在也不一定高。因此，在评价总评价总IgEIgE结果时要考虑到以上因素。结果时要考虑到以上因素。11/16/202218免疫学检验三三.特异性特异性IgEIgE抗体（抗体（sIgE)sIgE)的检测的检测 过敏患者的血清中存在着具有过敏患者的血清中存在着具有变应原特异性的变应原特异性的IgE IgE 称之为特异性称之为特异性IgE,IgE,如对牛奶过敏者则有针对牛奶如对牛奶过敏者则有针对牛奶变应原的变应原的IgEIgE；对蒿草花粉过敏者，；对蒿草花粉过敏者，则有针对该花粉的则有针对该花粉的IgEIgE，该抗体只能，该抗体只能与该变应原特异性结合。与该变应原特异性结合。11/16/202219免疫学检验 sIgE sIgE的测定在变态反应体外诊断中占有重要地的测定在变态反应体外诊断中占有重要地位。在呼吸疾病中，过敏性哮喘，过敏性鼻炎，职位。在呼吸疾病中，过敏性哮喘，过敏性鼻炎，职业性哮喘等患者血清中均能检出业性哮喘等患者血清中均能检出 sIgE sIgE。sIgEsIgE检测检测方法有许多种，目前临床上常用的有方法有许多种，目前临床上常用的有ELISAELISA，FEIAFEIA，免疫印迹等。随着，免疫印迹等。随着sIgEsIgE测定技术的完善，此项测测定技术的完善，此项测定已日趋商品化，开发了各种检测系统，如定已日趋商品化，开发了各种检测系统，如CAPCAP过过敏原检测系统，敏原检测系统，MasterMaster过敏原检测系统，过敏原检测系统，PxPx过敏原过敏原检测系统等，这些测定系统包括了仪器、试剂、计检测系统等，这些测定系统包括了仪器、试剂、计算机软件处理系统。国内目前应用最多的是算机软件处理系统。国内目前应用最多的是CAPCAP检检测系统。测系统。11/16/202220免疫学检验 1.CAP 1.CAP检测系统检测系统原理原理CAPCAP，一个很小的塑料帽状物，其内置有，一个很小的塑料帽状物，其内置有多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒，此粒多孔，吸多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒，此粒多孔，吸咐了更多的变应原咐了更多的变应原，加入血清，血清中的，加入血清，血清中的sIgEsIgE就会就会和变应原结合，再加入酶标抗人和变应原结合，再加入酶标抗人IgEIgE，再加入荧光，再加入荧光显色系统，在荧光分光光度计上测定荧光强度，计显色系统，在荧光分光光度计上测定荧光强度，计算机提供相应软件，自动计算出结果。报告算机提供相应软件，自动计算出结果。报告sIgEsIgE含含量。量。11/16/202221免疫学检验适应征适应征（1 1）临床怀疑过敏性疾病，支气管哮喘）临床怀疑过敏性疾病，支气管哮喘等；等；（2 2）不适宜作皮内试验的患者；）不适宜作皮内试验的患者；（3 3）脱敏治疗的病人观察疗效。）脱敏治疗的病人观察疗效。（4 4）抗组胺等对症治疗药物影响皮肤反）抗组胺等对症治疗药物影响皮肤反应者；应者；（5 5）皮试可能发生危险者；）皮试可能发生危险者；11/16/202222免疫学检验（6 6）不能用于皮试的变应原）不能用于皮试的变应原 ，如毒，如毒素，非水溶性或高度致敏性物质；素，非水溶性或高度致敏性物质；（7 7）食物过敏，皮试结果不可靠者。）食物过敏，皮试结果不可靠者。（8 8）皮试结果可疑者。）皮试结果可疑者。方法方法 RAST FEIA RAST FEIA参考值参考值CAPCAP系统结果报告。一般系统结果报告。一般报告报告sIgEsIgE含量。单位含量。单位ku/Lku/L。正常人。正常人0.35ku/L0.35ku/L，为阳性。，为阳性。sIgEsIgE的分级标的分级标准见表。准见表。11/16/202223免疫学检验l表表1.1.特异性特异性IgEIgE的分级标准的分级标准_ RAST RAST分级分级 sIgE sIgE含量含量(ku/L)sIgE(ku/L)sIgE水平水平 临床意义临床意义 O 0.35 O 100 VI 100 特高（特高（IIIIII）特别严重之特别严重之 过敏过敏 _ _例如：报告格式：例如：报告格式：sIgEsIgE（d1d1）81.3ku/L81.3ku/L（级）级）其中其中 d1 d1代表屋尘螨。每一过敏原均有代号，可查阅相关资料代表屋尘螨。每一过敏原均有代号，可查阅相关资料11/16/202224免疫学检验临床意义临床意义 sIgE sIgE测定是体外检测变应原的重要手段。其测定是体外检测变应原的重要手段。其试验的灵敏度及特异性都很高、特别是对花粉、螨试验的灵敏度及特异性都很高、特别是对花粉、螨类、宠物皮屑、牛奶、鸡蛋、坚果等变应原的类、宠物皮屑、牛奶、鸡蛋、坚果等变应原的sIgEsIgE测定，灵敏度和特异性都在测定，灵敏度和特异性都在9090以上，有的甚至接以上，有的甚至接近近100100。根据。根据sIgEsIgE含量可确定患者含量可确定患者 变应原变应原 种类，种类，可评价患者过敏状态，脱敏治疗的疗效，对哮喘的可评价患者过敏状态，脱敏治疗的疗效，对哮喘的诊断和鉴别诊断有重要帮助。诊断和鉴别诊断有重要帮助。CAPCAP吸咐变应原有单吸咐变应原有单价，有多价，如多价霉菌，多价食物（价，有多价，如多价霉菌，多价食物（Fx5EFx5E，含，含6 6种食物过敏原），多价羽毛等，多价变应原阳性后，种食物过敏原），多价羽毛等，多价变应原阳性后，再进一步确定单个变应原成分。再进一步确定单个变应原成分。11/16/202225免疫学检验注意事项注意事项（1 1）有明显的地域性，该法所使用的有明显的地域性，该法所使用的均系进口产品生产国的与我国的不一定均系进口产品生产国的与我国的不一定完全符合。我国常见的完全符合。我国常见的 变应原变应原 ，国外，国外不一定有。因此，评价结果应注意区别。不一定有。因此，评价结果应注意区别。11/16/202226免疫学检验（2 2）某些小分子的变应原）某些小分子的变应原 ，sIgEsIgE测定的灵敏度不高，如青霉素降解测定的灵敏度不高，如青霉素降解物，对这些变应原物，对这些变应原 ，如测不出，如测不出sIgEsIgE并不除外过敏的可能性。并不除外过敏的可能性。11/16/202227免疫学检验（3 3）要结合临床症状，体格检查，）要结合临床症状，体格检查，常规化验，当地的实际条件，体内常规化验，当地的实际条件，体内试验以及体外试验的结果综合考虑，试验以及体外试验的结果综合考虑，才能得出比较正确的结论。才能得出比较正确的结论。11/16/202228免疫学检验 2.2.吸入物变应原过筛试验（吸入物变应原过筛试验（phadiotopphadiotop）。）。原理原理 呼吸道变态反应病在临床上很常见，有呼吸道变态反应病在临床上很常见，有些病很难从临床上区别是否过敏，如过敏性鼻炎和些病很难从临床上区别是否过敏，如过敏性鼻炎和血管运动性鼻炎的临床表现相似，外源性哮喘和内血管运动性鼻炎的临床表现相似，外源性哮喘和内源性哮喘也有共同之处；在临床工作中首先要区别源性哮喘也有共同之处；在临床工作中首先要区别是否属于过敏范畴。是否属于过敏范畴。血清总血清总IgEIgE测定作为过敏性疾测定作为过敏性疾病的过筛试验曾得到广泛应用，但其特异性、敏感病的过筛试验曾得到广泛应用，但其特异性、敏感性均不高，总性均不高，总IgEIgE高并不一定是过敏，过敏者的总高并不一定是过敏，过敏者的总IgEIgE水平也不一定高。过敏与否取决于水平也不一定高。过敏与否取决于sIgEsIgE的存在。的存在。11/16/202229免疫学检验phadiotopphadiotop是根据变应原吸附原理，是根据变应原吸附原理，将空气中将空气中9090以上的最为常见的变应以上的最为常见的变应原吸咐到原吸咐到CAPCAP上。患者血清中只要有上。患者血清中只要有针对其中之一种变应原的针对其中之一种变应原的sIgEsIgE，即可，即可呈阳性反应。据此可测知患者是否为呈阳性反应。据此可测知患者是否为吸入物变应原过敏者。吸入物变应原过敏者。11/16/202230免疫学检验与与sIgEsIgE测定不同的是所用测定不同的是所用CAPCAP为特制的，为特制的，内含多种吸入物变应原。结果报告不是含内含多种吸入物变应原。结果报告不是含量，而是比值，即待测血清吸光度与参考量，而是比值，即待测血清吸光度与参考血清吸光度之比。血清吸光度之比。参考值参考值 正常人为阴性，当待测血清正常人为阴性，当待测血清吸光度大于参考血清吸光度时报告为阳性。吸光度大于参考血清吸光度时报告为阳性。根据比值，可将根据比值，可将 phadiotop phadiotop 阳性者分为阳性者分为四个等级。弱阳性四个等级。弱阳性1 1；阳性；阳性2 2；强阳性；强阳性2020；特强阳性；特强阳性4040。11/16/202231免疫学检验临床意义临床意义 阳性结果可视为多种阳性结果可视为多种sIgEsIgE的总的总和，比值越大，表明体内和，比值越大，表明体内sIgEsIgE越多，越多，这可能是某一种变应原的这可能是某一种变应原的sIgEsIgE很高，很高，也可能是多种变应原也可能是多种变应原sIgEsIgE累加的结累加的结果。果。11/16/202232免疫学检验注意事项注意事项 phadiotop phadiotop中未包括律草花粉及蚕丝，这两种中未包括律草花粉及蚕丝，这两种在我国都是很重要的变应原，如患者只对律草花粉在我国都是很重要的变应原，如患者只对律草花粉或蚕丝过敏，或蚕丝过敏，phadiotopphadiotop则为阴性。但如果同时还则为阴性。但如果同时还合并有其它合并有其它 变应原过敏，变应原过敏，phadiotopphadiotop仍为阳性。仍为阳性。phadiotopphadiotop阳性只说明患者对常见的空气中的阳性只说明患者对常见的空气中的 变应变应原过敏，但对何种变应原过敏，仍需进一步检查。原过敏，但对何种变应原过敏，仍需进一步检查。phadiotopphadiotop作为过筛实验，可筛出非过敏的患者，作为过筛实验，可筛出非过敏的患者，以免进行不必要的特异性变应原检查。由于以免进行不必要的特异性变应原检查。由于phadiotopphadiotop中包被的是国外的抗原中包被的是国外的抗原，有时临床诊断，有时临床诊断与与phadiotopphadiotop结果有不符的个别现象发生。结果有不符的个别现象发生。11/16/202233免疫学检验四四.血清补体测定血清补体测定 补体（补体（Complement)Complement)是血清中的一组具是血清中的一组具有酶活性的蛋白有酶活性的蛋白。它由。它由2020多种蛋白组成。当多种蛋白组成。当机体受到病原微生物侵袭时，在抗体的存在机体受到病原微生物侵袭时，在抗体的存在下，补体参与灭活下，补体参与灭活 virus virus 或杀死或杀死 bacteria bacteria 的免疫反应。在自身免疫病中，的免疫反应。在自身免疫病中，complement complement 也能参与破坏自身组织或细胞而造成免疫病也能参与破坏自身组织或细胞而造成免疫病理损伤。测定血清中补体活性或其单一补体理损伤。测定血清中补体活性或其单一补体成分含量，对于许多疾病的诊断和鉴别诊断、成分含量，对于许多疾病的诊断和鉴别诊断、疗效观察以及发病机理的研究都有一定的临疗效观察以及发病机理的研究都有一定的临床意义。床意义。11/16/202234免疫学检验(一一)总补体活性测定（总补体活性测定（50%50%hemolytic unit of complementhemolytic unit of complement，CH50)CH50)Complement Complement 可使溶血素可使溶血素(抗抗体体)致敏的致敏的 SRBC SRBC 裂解而发生溶血裂解而发生溶血，补体活性与溶血程度呈正相关。根补体活性与溶血程度呈正相关。根据产生据产生50%50%溶血所需要的最小补体溶血所需要的最小补体量，可计算出血清总补体的活性。量，可计算出血清总补体的活性。11/16/202235免疫学检验参考值参考值 75 75160 U/ml160 U/ml临床意义临床意义.增高：常见于各种急性炎症、组织损伤、心增高：常见于各种急性炎症、组织损伤、心肌梗死和某些恶性肿瘤等。肌梗死和某些恶性肿瘤等。.降低：见于各种免疫复合物性疾病，如降低：见于各种免疫复合物性疾病，如SLESLE、急、慢性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫急、慢性肾小球肾炎、自身免疫性溶血性贫血。也可见于病毒性肝炎、血。也可见于病毒性肝炎、DICDIC、蛋白丢失性、蛋白丢失性肠病、严重灼伤、急性粒细胞性白血病等。肠病、严重灼伤、急性粒细胞性白血病等。11/16/202236免疫学检验注意事项注意事项 待测血清需新鲜、无溶血。测待测血清需新鲜、无溶血。测定方法有试管法、微量板法，近来定方法有试管法、微量板法，近来又有生化仪器法等。不同方法具有又有生化仪器法等。不同方法具有不同的参考值。不同的参考值。11/16/202237免疫学检验(二二)补体补体C3C3测定（测定（Complement 3 Complement 3，C3)C3)C3 C3为补体系统各组分中含量最高的为补体系统各组分中含量最高的组分，是激活补体传统途径与旁路途径组分，是激活补体传统途径与旁路途径的关键成分。检测方法主要有的关键成分。检测方法主要有RIDRID、免疫、免疫比浊、速率散射比浊等。比浊、速率散射比浊等。g/Lg/L11/16/202238免疫学检验临床意义临床意义 1.C3 1.C3增高：见于某些急性炎增高：见于某些急性炎症或传染病早期以及某些恶性肿瘤症或传染病早期以及某些恶性肿瘤等。等。2.C3 2.C3降低：见于降低：见于SLESLE、RARA、急、急性肾小球肾炎、肝脏疾病、冷球蛋性肾小球肾炎、肝脏疾病、冷球蛋白血症等。狼疮肾炎时血清中白血症等。狼疮肾炎时血清中C3C3含含量降低，当病情好转时，含量恢复量降低，当病情好转时，含量恢复正常。正常。11/16/202239免疫学检验(三三),补体补体C4C4测定（测定（Complement 4 Complement 4，C4)C4)C4 C4是一种多功能的是一种多功能的1 1-球蛋白，球蛋白，也是补体系统中的主要成分。在补体也是补体系统中的主要成分。在补体传统活化途径中发挥重要作用。裂解传统活化途径中发挥重要作用。裂解后的产物在补体的活化、促进吞噬、后的产物在补体的活化、促进吞噬、防止免疫复合物沉着和中和毒素等方防止免疫复合物沉着和中和毒素等方面发挥很大作用。检测方法同面发挥很大作用。检测方法同C3C3测定。测定。11/16/202240免疫学检验参考值参考值 0.16 0.160.47g/L0.47g/L临床意义临床意义 1.1.升高：见于风湿热的急性期、结节升高：见于风湿热的急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、性动脉周围炎、皮肌炎、心肌梗死、ReiterReiter综合征和各种类型的关节炎。综合征和各种类型的关节炎。2.2.降低：见于自身免疫病，例如：降低：见于自身免疫病，例如：SLESLE、RARA、慢性活动性肝炎、多发性硬化症、慢性活动性肝炎、多发性硬化症、IgAIgA型型肾病等。在肾病等。在SLESLE，C4C4含量下降明显，并较含量下降明显，并较C3C3下下降为早。降为早。11/16/202241免疫学检验五五.循环免疫复合物（循环免疫复合物（Circulating Circulating immunocomplex immunocomplex，CIC,)CIC,)CIC CIC是体内游离抗原与抗体相结合的产物。复是体内游离抗原与抗体相结合的产物。复合物可分大、中、小三类。大的复合物合物可分大、中、小三类。大的复合物(19s)(19s)可可被吞噬细胞吞噬去除；中等复合物被吞噬细胞吞噬去除；中等复合物(约等于约等于19s)19s)存存在于局部病变部位，如肾基膜、皮肤基底膜、血管在于局部病变部位，如肾基膜、皮肤基底膜、血管内膜和关节滑膜等；只有小的复合物内膜和关节滑膜等；只有小的复合物(19s)(19s)游离于游离于血液、体液中，为一种可溶的血液、体液中，为一种可溶的CICCIC。CICCIC测定对免疫测定对免疫复合物病、自身免疫病以及肝病的诊断、疗效观察、复合物病、自身免疫病以及肝病的诊断、疗效观察、预后判断均有重要意义。预后判断均有重要意义。11/16/202242免疫学检验 检测方法有多种，如聚乙二醇沉淀检测方法有多种，如聚乙二醇沉淀法、法、C1qC1q结合法等。结合法等。PEG PEG可引起蛋白沉淀，可引起蛋白沉淀，蛋白分子愈大沉淀所需蛋白分子愈大沉淀所需 PEG PEG 浓度愈小。浓度愈小。CICCIC分子量较大，且抗原分子量较大，且抗原-抗体结合后发抗体结合后发生构型改变，而被低浓度生构型改变，而被低浓度PEGPEG从液相中析从液相中析出，出，PEGPEG还抑制还抑制CICCIC解离，促使解离，促使CICCIC聚合成聚合成更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度计更大的凝聚物而被沉淀，用分光光度计在波长在波长450nm450nm处测定吸光度。计算出浊度处测定吸光度。计算出浊度值，可知值，可知CICCIC的存在和含量。的存在和含量。11/16/202243免疫学检验参考值参考值 PEG PEG沉淀法：沉淀法：10U/ml 2.1P/N 2.1为阳性。为阳性。数值越大，表明患者体内抗体效价越高，表明患者数值越大，表明患者体内抗体效价越高，表明患者为华支睾吸虫感染。如能测到为华支睾吸虫感染。如能测到IgMIgM抗体，对于早期抗体，对于早期诊断有很大帮助。如有可能，可检测循环抗原以考诊断有很大帮助。如有可能，可检测循环抗原以考核疗效和早期诊断。核疗效和早期诊断。11/16/202266免疫学检验4 4、肺吸虫抗体测定、肺吸虫抗体测定 肺吸虫病又称并殖吸虫病，是由并殖吸虫肺吸虫病又称并殖吸虫病，是由并殖吸虫引起的自身免疫源性疾病。临床表现多种多样，可引起的自身免疫源性疾病。临床表现多种多样，可分肺型和肺外型。诊断主要结合流行病学。临床症分肺型和肺外型。诊断主要结合流行病学。临床症状及实验室检查。其中免疫学检查对临床诊断有很状及实验室检查。其中免疫学检查对临床诊断有很重要意义。人感染肺吸虫后，可出现抗肺吸虫抗体，重要意义。人感染肺吸虫后，可出现抗肺吸虫抗体，以以IgGIgG型为主。型为主。血清血清 中中IgEIgE水平也可升高。水平也可升高。IgMIgM、IgEIgE型抗体检方法主要有型抗体检方法主要有ELISAELISA、IFAIFA、皮内试验等。、皮内试验等。参考值阴性参考值阴性 ELISA ELISA：P/NP/N 2.1 2.111/16/202267免疫学检验临床意义临床意义 抗体阳性表明患者为肺吸虫感染者，抗体阳性表明患者为肺吸虫感染者，结合其他检查和临床表现可作出诊断。在判结合其他检查和临床表现可作出诊断。在判断结果时应该注意。其它寄生虫病，如血吸断结果时应该注意。其它寄生虫病，如血吸虫病、囊虫病与此有轻度的交叉反应。此外虫病、囊虫病与此有轻度的交叉反应。此外还可应用双抗体夹心还可应用双抗体夹心ELISAELISA法检测循环抗原法检测循环抗原用于诊断和流行病学调查。目前应用尚不广用于诊断和流行病学调查。目前应用尚不广泛。泛。11/16/202268免疫学检验 第三章第三章 自身免疫病和风湿病的免疫学检验自身免疫病和风湿病的免疫学检验11/16/202269免疫学检验 自身免疫病（自身免疫病（AID)AID)是指由于过是指由于过度而持久的自身免疫反应导致组织度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。风湿病是一类床症状的一类疾病。风湿病是一类涉及到关节、软骨、肌肉等结缔组涉及到关节、软骨、肌肉等结缔组织的慢性疾病。织的慢性疾病。11/16/202270免疫学检验l实验室检查特别是免疫学检查对实验室检查特别是免疫学检查对AIDAID和风湿病的诊断是及其重要和风湿病的诊断是及其重要的。的。l有些检查可作为诊断指标之一；有些检查可作为诊断指标之一；l有些检查可作为病情进展和预后有些检查可作为病情进展和预后判断的监测指标；判断的监测指标；l有些检查可作为药物疗效的考核有些检查可作为药物疗效的考核指标之一。指标之一。随着免疫学技术的发展以及分子生物学的应用，随着免疫学技术的发展以及分子生物学的应用，各种自身抗体的检查越来越多地应用于临床。作为各种自身抗体的检查越来越多地应用于临床。作为临床医生，应该熟悉这些检验的意义，并能结合临临床医生，应该熟悉这些检验的意义，并能结合临床及其他检查，客观地运用这些指标，协助诊断，床及其他检查，客观地运用这些指标，协助诊断，了解病情，指导治疗。这里仅介绍临床常用的一些了解病情，指导治疗。这里仅介绍临床常用的一些自身抗体的检测。自身抗体的检测。11/16/202272免疫学检验1.1.抗核抗体测定抗核抗体测定（Antinuclear antibody,ANA)Antinuclear antibody,ANA)ANAANA是抗细胞核多种成分的自身抗体，是抗细胞核多种成分的自身抗体，无种属及器官特异性无种属及器官特异性。ANAANA可分为抗可分为抗DNADNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体及其他细胞成分白抗体、抗核仁抗体及其他细胞成分抗体。这些抗体共同组成抗体。这些抗体共同组成ANAANA谱。谱。11/16/202273免疫学检验 抗核抗体（抗核抗体（ANAANA）的检查）的检查最常用于筛查全身性风湿病和自身最常用于筛查全身性风湿病和自身免疫病。免疫病。ANAANA的检查可观察到能与的检查可观察到能与细胞核内的核酸和蛋白抗原起反应细胞核内的核酸和蛋白抗原起反应的自身抗体。细胞内可能存在对多的自身抗体。细胞内可能存在对多种抗原起反应的抗体。只有某种抗种抗原起反应的抗体。只有某种抗体的效价很高时，体的效价很高时，IFAIFA才能加以鉴才能加以鉴别。别。11/16/202274免疫学检验homogenoushomogenous（均质型）（均质型）又称弥散型，相应的抗原是双链又称弥散型，相应的抗原是双链DNADNA和组蛋白复合物。常见于和组蛋白复合物。常见于SLESLE，特别是肾脏，特别是肾脏受累病人。也可见于其它结缔组织病，如：受累病人。也可见于其它结缔组织病，如：风湿性关节炎，风湿性关节炎，MCTDMCTD，干燥综合征，硬皮，干燥综合征，硬皮病，慢性活动性肝炎及原发性胆汁性肝硬病，慢性活动性肝炎及原发性胆汁性肝硬变。变。Peripheral(Peripheral(周边型周边型)相应的抗原为双链相应的抗原为双链DNADNA，多见于活动，多见于活动性性SLESLE病人。病人。11/16/202275免疫学检验Speckle(Speckle(斑点型斑点型)主要是针对主要是针对ENAENA的抗体，包括的抗体，包括SmSm，RNPRNP，SSASSA，SSBSSB，Scl-70Scl-70。一般认为低效价的。一般认为低效价的斑点型斑点型ANAANA不是结缔组织病特有的，实际上不是结缔组织病特有的，实际上不代表临床异常。高效价的抗不代表临床异常。高效价的抗SmSm抗体多与抗体多与SLESLE有关。高效价的抗有关。高效价的抗RNPRNP自身抗体见于自身抗体见于MCTDMCTD，但也见于，但也见于SLESLE。抗。抗SSASSA和抗和抗SSBSSB抗体，抗体，见于见于S.SS.S，也可见于，也可见于SLESLE。当病人有抗。当病人有抗SSASSA抗抗体时，通常以皮肤表现和光过敏为主。，体时，通常以皮肤表现和光过敏为主。，也存在于也存在于ANAANA阴性狼疮和新生儿狼疮。阴性狼疮和新生儿狼疮。Scl-Scl-