二氢吡啶类钙通道阻滞药物的分析 (2)精选课件.ppt

关于二关于二氢吡吡啶类钙通通道阻滞道阻滞药物的分析物的分析(2)第一页，本课件共有34页学习要求：学习要求：1.掌握：二氢吡啶类药物的基本结构及主要掌握：二氢吡啶类药物的基本结构及主要理化性质；结构、性质与分析方法间的关系；理化性质；结构、性质与分析方法间的关系；铈量法的原理、方法及注意事项。铈量法的原理、方法及注意事项。2.熟悉：二氢吡啶类药物的化学鉴别反应及有熟悉：二氢吡啶类药物的化学鉴别反应及有关物质检查的方法；关物质检查的方法；3.了解：二氢吡啶类药物其他的鉴别试验及含了解：二氢吡啶类药物其他的鉴别试验及含量测定方法、及体内分析中样品的处理方法。量测定方法、及体内分析中样品的处理方法。第二页，本课件共有34页本章背景：本章背景：离子通道示意图离子通道示意图第三页，本课件共有34页本章背景：本章背景：钙离子通道模型及及蛋白结构钙离子通道模型及及蛋白结构第四页，本课件共有34页第一节第一节 结构与性质结构与性质一、常见药物的结构一、常见药物的结构二氢吡啶类药物的二氢吡啶类药物的基本骨架：基本骨架：为活性必需，为活性必需，变成吡啶环变成吡啶环或六氢吡啶或六氢吡啶环活性消失环活性消失为活性必需，为活性必需，若为乙酰基若为乙酰基或氰基活性或氰基活性降低，若为降低，若为硝基则激活硝基则激活钙通道钙通道邻、间位有吸电子基邻、间位有吸电子基团活性较佳，对位取团活性较佳，对位取代活性下降代活性下降取代基与活性关系次序：取代基与活性关系次序：H 甲甲基环烷基苯基或取代苯基基环烷基苯基或取代苯基第五页，本课件共有34页硝苯地平硝苯地平尼群地平尼群地平尼莫地平尼莫地平第六页，本课件共有34页苯磺酸氨氯地平苯磺酸氨氯地平非洛地平非洛地平第七页，本课件共有34页激活开放钙通道的二氢吡啶类化合物激活开放钙通道的二氢吡啶类化合物第八页，本课件共有34页二、主要理化性质二、主要理化性质1.二氢吡啶环的还原性二氢吡啶环的还原性 氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法含量测定氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法含量测定2.硝基的氧化性硝基的氧化性 重氮化重氮化-偶合反应鉴别偶合反应鉴别第九页，本课件共有34页3.二氢吡啶环氨基质子解离性二氢吡啶环氨基质子解离性4.稳定性稳定性5.旋光性旋光性6.吸收光谱特性吸收光谱特性第十页，本课件共有34页第二节第二节 鉴别试验鉴别试验一、化学鉴别法一、化学鉴别法（一）与亚铁盐反应（一）与亚铁盐反应 二氢吡啶类药物苯环上硝基具有氧化性，可二氢吡啶类药物苯环上硝基具有氧化性，可将将氢氧化亚铁氢氧化亚铁氧化为氧化为红棕色红棕色氢氧化铁沉淀。氢氧化铁沉淀。第十一页，本课件共有34页ChP2010尼莫地平的鉴别：尼莫地平的鉴别：取本品约取本品约20mg，加乙醇，加乙醇2ml溶解后，加新制的溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液硫酸亚铁铵溶液2ml，1.5mol/L硫酸溶液硫酸溶液1滴与滴与0.5mol/L氢氧化钾溶液氢氧化钾溶液1ml，强烈振摇，强烈振摇，1分钟内分钟内沉淀沉淀由灰绿色变为红棕色由灰绿色变为红棕色。第十二页，本课件共有34页（二）与氢氧化钠试液反应（二）与氢氧化钠试液反应ChP2010硝硝苯地平的鉴别：苯地平的鉴别：取本品约取本品约25mg，加丙酮，加丙酮1ml溶解，加溶解，加20%氢氢氧化钠溶液氧化钠溶液35滴，振摇，溶液滴，振摇，溶液显橙红色显橙红色。药物的丙酮溶液与氢氧化钠试液反应显橙红色药物的丙酮溶液与氢氧化钠试液反应显橙红色药物的丙酮溶液与氢氧化钠试液反应显橙红色药物的丙酮溶液与氢氧化钠试液反应显橙红色第十三页，本课件共有34页（三）沉淀反应（三）沉淀反应ChP2010尼莫地平注射液的鉴别：尼莫地平注射液的鉴别：取本品适量（约相当于尼莫地平取本品适量（约相当于尼莫地平20mg），置分），置分液漏斗中，加液漏斗中，加乙醚乙醚30ml振摇提取，静置，分取乙振摇提取，静置，分取乙醚层，置水浴上蒸干，放冷，残渣加醚层，置水浴上蒸干，放冷，残渣加乙醇乙醇2ml，搅拌使溶解，移至试管中，加搅拌使溶解，移至试管中，加1%氯化汞溶液氯化汞溶液3ml，即发生，即发生白色沉淀白色沉淀。1,4-1,4-1,4-1,4-二氢吡啶结构与二氢吡啶结构与二氢吡啶结构与二氢吡啶结构与重金属盐形成沉淀重金属盐形成沉淀重金属盐形成沉淀重金属盐形成沉淀第十四页，本课件共有34页（四）重氮化（四）重氮化-偶合反应偶合反应BP2010硝苯地平的鉴别：硝苯地平的鉴别：取本品取本品25mg，加，加10ml盐酸盐酸-水水-乙醇混合溶液乙醇混合溶液（1.5 3.5 5），温热，加入锌粒），温热，加入锌粒0.5g，放置，放置5分钟，分钟，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放，放置置2分钟，再加入氨基磺酸铵溶液（分钟，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸，摇匀，加入盐酸萘乙二胺萘乙二胺溶液（溶液（5g/L）2ml，即，即显红色（持续显红色（持续5分钟以上）。分钟以上）。苯环硝基有氧化性，在苯环硝基有氧化性，在苯环硝基有氧化性，在苯环硝基有氧化性，在酸性条件下被锌粉还原酸性条件下被锌粉还原酸性条件下被锌粉还原酸性条件下被锌粉还原为芳伯氨基为芳伯氨基为芳伯氨基为芳伯氨基第十五页，本课件共有34页二、分光光度法二、分光光度法（一）紫外分光光度法（一）紫外分光光度法ChP2010尼群地平软胶囊的鉴别：尼群地平软胶囊的鉴别：避光操作。取本品的内容物约避光操作。取本品的内容物约1g，置，置100ml量量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取10ml，置置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，在量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，在353nm与与303nm的波长处分别测定吸光度，在的波长处分别测定吸光度，在353nm与与303nm的吸光度比值应为的吸光度比值应为2.12.3。第十六页，本课件共有34页（二）红外分光光度法（二）红外分光光度法ChP2010尼群地平片的鉴别：尼群地平片的鉴别：避光操作。取本品（约相当于尼群地平避光操作。取本品（约相当于尼群地平100mg），研细，加），研细，加丙酮丙酮10ml，振摇使溶解，滤过，滤液，振摇使溶解，滤过，滤液暗处暗处挥干，残渣经挥干，残渣经减压干燥减压干燥，依法测定。本品的红，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集600）一致。）一致。第十七页，本课件共有34页五、色谱法五、色谱法（一）高效液相色谱法（一）高效液相色谱法ChP2010尼莫地平片的鉴别：尼莫地平片的鉴别：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。时间一致。第十八页，本课件共有34页（二）薄层色谱法（二）薄层色谱法BP2010硝苯地平的鉴别：硝苯地平的鉴别：取本品加取本品加甲醇甲醇制成每制成每1ml 中约含中约含1mg的溶液，作为供的溶液，作为供试品溶液；另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每试品溶液；另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每1ml 约含约含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶，分别点于同一硅胶F254薄层板上，以薄层板上，以乙酸乙酯乙酸乙酯-环己环己烷烷（40 60）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。色应与对照品溶液的主斑点一致。第十九页，本课件共有34页第三节第三节 有关物质的检查有关物质的检查 二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在定在避光条件避光条件下进行有关物质检查，大多采用下进行有关物质检查，大多采用HPLC法。法。第二十页，本课件共有34页 硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：两种降解氧化产物：杂质杂质I：2,6-二甲基二甲基-4-(2-硝基苯基硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯吡啶二甲酸二甲酯杂质杂质II：2,6-二甲基二甲基-4-(2-亚硝基苯基亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯吡啶二甲酸二甲酯第二十一页，本课件共有34页ChP2010硝苯地平有关物质的检查：硝苯地平有关物质的检查：避光操作。取本品，精密称定，加甲醇溶解并定量避光操作。取本品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每稀释制成每1ml中约含中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另的溶液，作为供试品溶液；另取取2,6-二甲基二甲基-4-(2-硝基苯基硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯吡啶二甲酸二甲酯(杂质杂质)对照品与对照品与2,6-二甲基二甲基-4-(2-亚硝基苯基亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸吡啶二甲酸二甲酯二甲酯(杂质杂质)对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每稀释制成每1ml中各约含中各约含10g的混合溶液，作为对照品的混合溶液，作为对照品贮备液；分别精密量取供试品溶液与对照品贮备液各适贮备液；分别精密量取供试品溶液与对照品贮备液各适量，用流动相定量稀释制成每量，用流动相定量稀释制成每1ml中分别含硝苯地平中分别含硝苯地平2g、杂质杂质1g与杂质与杂质1g的混合溶液，作为对照溶液。的混合溶液，作为对照溶液。第二十二页，本课件共有34页 对照高效液相色谱法试验。用对照高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶十八烷基硅烷键合硅胶为填为填充剂；以充剂；以甲醇甲醇-水水(60:40)为流动相；检测波长为为流动相；检测波长为235nm。取。取硝苯地平对照品、杂质硝苯地平对照品、杂质对照品与杂质对照品与杂质对照品各适量，对照品各适量，加加甲醇甲醇溶解并稀释制成每溶解并稀释制成每1ml中各约含中各约含1mg、10g与与10g的的混合溶液，取混合溶液，取20l，注入液相色谱仪，注入液相色谱仪，杂质杂质峰、杂质峰、杂质峰与硝苯地平峰之间的分离度峰与硝苯地平峰之间的分离度均应符合要求。取对照均应符合要求。取对照溶液溶液20l，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使硝苯地使硝苯地平色谱峰的峰高约为满量程的平色谱峰的峰高约为满量程的50%；第二十三页，本课件共有34页再精密量取供试品溶液与对照溶液各再精密量取供试品溶液与对照溶液各20l，分别注，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的的2倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质峰、杂峰、杂质质峰保留时间一致的色谱峰，峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计按外标法以峰面积计算，均不得过算，均不得过0.1%；其他单个杂质峰面积不得大于；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中硝苯地平峰面积（对照溶液中硝苯地平峰面积（0.2%）；杂质总量不）；杂质总量不得过得过0.5%。第二十四页，本课件共有34页第四节第四节 含量测定含量测定一、铈量法一、铈量法硝苯地平与硫酸铈反硝苯地平与硫酸铈反应的摩尔比为应的摩尔比为1 2。利用二氢吡啶的还原性利用二氢吡啶的还原性利用二氢吡啶的还原性利用二氢吡啶的还原性第二十五页，本课件共有34页ChP2010硝苯地平的含量测定：硝苯地平的含量测定：取本品约取本品约0.4g，精密称定，加无水乙醇，精密称定，加无水乙醇50ml，微热，微热使溶解，使溶解，加高氯酸加高氯酸溶液（取溶液（取70%高氯酸高氯酸8.5ml，加水至，加水至100ml）50ml、邻二氮菲邻二氮菲指示液指示液3滴，立即用硫酸铈滴定滴，立即用硫酸铈滴定液（液（0.1mol/L）滴定，至近终点时，在水浴中加热至）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓左右，继续缓缓滴定至橙红色滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（硫酸铈滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于17.32mg的的C17H18N2O6。第二十六页，本课件共有34页二、紫外二、紫外-可见分光光度法可见分光光度法ChP2010尼群地平软胶囊的含量测定：尼群地平软胶囊的含量测定：避光操作，取本品避光操作，取本品10粒置小烧杯中，用粒置小烧杯中，用剪刀剪破嚢壳剪刀剪破嚢壳，加无水，加无水乙醇少量，振摇使溶解后，将乙醇少量，振摇使溶解后，将内容物与嚢壳全部转移至具塞锥形瓶中内容物与嚢壳全部转移至具塞锥形瓶中，用用无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯，洗液并入，洗液并入锥形瓶锥形瓶中，将锥形瓶中，将锥形瓶密塞，置密塞，置40水浴中水浴中加热加热15分钟，并时时振摇，将内容物移入分钟，并时时振摇，将内容物移入100ml量瓶中，用无水乙醇量瓶中，用无水乙醇反复冲洗反复冲洗嚢壳和锥形瓶，洗液并入量瓶中，用无嚢壳和锥形瓶，洗液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置，置100ml量瓶中，用无水量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在乙醇稀释至刻度，摇匀，在353nm的波长的波长处测定吸光度；另取处测定吸光度；另取尼群尼群地平对照品地平对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并定量稀释制成适量，精密称定，用无水乙醇溶解并定量稀释制成1ml中约含中约含20g的溶液，同法测定，计算，即得。的溶液，同法测定，计算，即得。第二十七页，本课件共有34页三、高效液相色谱法三、高效液相色谱法ChP2010尼莫地平分散片的含量测定：尼莫地平分散片的含量测定：色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以键合硅胶为填充剂；以甲醇甲醇-乙腈乙腈-水水（35 38 27）为流动相；检测波长为流动相；检测波长为为235nm。理。理论板数按尼莫地平峰计算不低于论板数按尼莫地平峰计算不低于8000，尼莫地平，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。第二十八页，本课件共有34页测定法测定法 避光操作避光操作。取本品。取本品20片，精密称定，研细，精密片，精密称定，研细，精密称取适量称取适量(约相当于尼莫地平约相当于尼莫地平10mg)，置，置50ml量瓶中，量瓶中，加流加流动相适量动相适量，超声处理超声处理15分钟分钟使尼莫地平溶解，放冷，用使尼莫地平溶解，放冷，用流流动相动相稀释至刻度，摇匀，稀释至刻度，摇匀，离心离心10分钟分钟(每分钟每分钟3000转转)，精，精密量取上清液密量取上清液5ml，置，置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取摇匀，精密量取10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取注入液相色谱仪，记录色谱图；另取尼莫地平对照品尼莫地平对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每成每1ml中约含中约含20ug的溶液，同法测定。按外标法以峰的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。面积计算，即得。第二十九页，本课件共有34页第五节第五节 体内二氢吡啶类药物的分析体内二氢吡啶类药物的分析 氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故具有一对光学异构体具有一对光学异构体R-(+)-氨氯地平与氨氯地平与S-(-)-氨氯氨氯地平，仅地平，仅S-(-)-氨氯地平具有血管扩张作用氨氯地平具有血管扩张作用，其中，其中左旋氨氯地平左旋氨氯地平药效是消旋氨氯地平的药效是消旋氨氯地平的2倍，因此需倍，因此需进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体选择性药动学研究。选择性药动学研究。第三十页，本课件共有34页 人血浆中氨氯地平对映体的固相萃取人血浆中氨氯地平对映体的固相萃取LC-MS/MS法测定：法测定：第三十一页，本课件共有34页样品处理：样品处理：血浆样品血浆样品1.0ml，与，与1.0ml用流动相制备的内标溶用流动相制备的内标溶液液(10 ng/ml)混合后，取混合后，取1.8ml上载至上载至C18固相萃取柱固相萃取柱(萃取柱萃取柱预先用含预先用含2.5%氨的甲醇氨的甲醇1.0ml洗涤洗涤2次，再用次，再用5mmol/L醋酸醋酸铵溶液铵溶液1.0ml冲洗平衡冲洗平衡)，分别用，分别用5mmol/L醋酸铵溶液醋酸铵溶液1.0ml和和水水-甲醇甲醇(65:35)1.0ml洗涤，再用含洗涤，再用含2.5%氨的甲醇氨的甲醇1.0ml洗洗脱脱，洗脱液在，洗脱液在60下于旋转蒸发器上蒸发至干，残渣物加下于旋转蒸发器上蒸发至干，残渣物加250l流动相溶解，吸取流动相溶解，吸取100l注入注入液相色谱液相色谱-质谱联用质谱联用系统系统进行分析。进行分析。第三十二页，本课件共有34页色谱与质谱条件色谱与质谱条件 色谱柱为色谱柱为Chiral-AGP柱柱(150mm4.0mm，5m)，流动相为，流动相为10 mmol/L醋酸铵缓冲液醋酸铵缓冲液(pH4.5)-正丙醇正丙醇(99:1)，流速，流速0.9 ml/min，柱温，柱温30。APCI离子源，温度离子源，温度350，辅助气，辅助气(N2)流速流速2 L/min，气帘气，气帘气(N2)压力压力410kPa流速流速1.2 L/min，电晕放电电流，电晕放电电流2 A，正离子选择反应监测，正离子选择反应监测(SRM)M+H+离子，离子，N2碰撞能量碰撞能量15eV，用于定量分析的，用于定量分析的离子反应分别为离子反应分别为m/z409238(氨氯地平氨氯地平)和和m/z260116(S-(-)-普萘洛尔普萘洛尔)。第三十三页，本课件共有34页感感谢谢大大家家观观看看第三十四页，本课件共有34页