ELISA实验原理,方法,仪器,流程图和注意事项分析.ppt

酶联免疫吸附实验(ELISA)目的和要求目的和要求v掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项v了解ELISA实验结果的读取和分析实验原理实验原理v借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。v特点：灵敏、特异v类型：双抗体夹心法、竞争法、间接法等 双抗夹心法双抗夹心法ELISA 竞争法竞争法 ELISAELISA实验材料实验材料vBSA包被的测定板v酶标抗鼠IgG抗体v待检血清，阳性血清，阴性血清v洗涤液：PBS吐温-20v底物液：邻苯二胺（OPD）v终止液：10%H2S04实验步骤实验步骤加入加入稀释稀释好的待测血清每孔好的待测血清每孔100100ul，3737孵育孵育40min40min加入加入100ul100ul酶标抗体酶标抗体,37,37孵育孵育30min30min洗板洗板3 3次次,每次每次1min1min洗板洗板3 3次次,每次每次1min1min实验步骤实验步骤加入加入100ulTMB100ulTMB底物液避光室底物液避光室温孵育温孵育15min15min终止反应终止反应:每孔加每孔加1 1滴滴1010硫酸硫酸结果观察结果观察注意事项注意事项u加样加样：应将所加物加在：应将所加物加在ELISAELISA板孔的底部，并板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。注意不可溅出，不可产生气泡。u洗板洗板：每次洗液加入后，应静置：每次洗液加入后，应静置1 1分钟使清洗分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。u液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动轻晃动3030秒，秒，混匀混匀液体。液体。u底物有底物有毒性毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。免接触。