Hela细胞的传代培养.ppt

HeLaHeLa细胞的传代培养细胞的传代培养教学目标教学目标1.理解细胞传代培养的概念和原理2.能按照操作规程进行细胞传代培养的操作 细胞传代培养的概念细胞传代培养的概念概念：指细胞从一个培养瓶以1:2或其他比率转移，接种到另外的培养瓶中的培养，也叫做继代培养。HeLa细胞是一种贴壁生长的细胞，在进行传代时通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代。培养细胞一代生长过程培养细胞一代生长过程实验前准备实验前准备 1 1、材料材料：HeLa HeLa细胞细胞 2 2、试剂：、试剂：0.250.25胰胰蛋白蛋白酶、酶、16401640培养基（含培养基（含1010 小牛血清）小牛血清）、PBSPBS 实验前准备实验前准备超净工作台CO2培养箱倒置显微镜3.3.仪器设备仪器设备离心机恒温水浴锅3.3.仪器设备仪器设备实验前准备实验前准备培养瓶，移液管，酒精灯，酒精棉球，试管架，记号笔等。3.3.仪器设备仪器设备实验前准备实验前准备（1）细胞培养用的器材和试剂灭菌；（2）超净工作台准备（75%酒精擦拭台面，紫外灯照射30min）；（3）试剂预热（37水浴锅）；（4）操作人员准备（75%酒精擦拭双手等）。4.4.实验前准备实验前准备工作工作实验前准备实验前准备细胞生存环境：无菌、无毒细胞生存环境：无菌、无毒细胞传代操作细胞传代操作 1、倒去培养瓶中的旧培养液，加入2-3mL预热的PBS液，轻轻振荡漂洗细胞，以除去悬浮在细胞表面的碎片。吸除培养液细胞传代操作细胞传代操作2、胰蛋白酶消化：加入适量0.25胰蛋白酶消化液，37消化，注意消化液的量以盖住细胞最好。加消化液细胞传代操作细胞传代操作3、盖紧瓶盖，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将消化液弃去，加入适量预热后的培养液终止消化。（一般消化时间约为2-3分钟）。消化前细胞消化后细胞（适度状态）吸除消化液细胞传代操作细胞传代操作 4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液。吹打成细胞悬液吹打成细胞悬液分装细胞传代操作细胞传代操作5、以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，置于37CO2培养箱培养（如果瓶盖不带通气孔，则需将瓶盖旋开半圈）。24h后即可对细胞的生长情况进行观察记录。当细胞长成单层后即可用于接种或冻存。实验操作注意事项实验操作注意事项1.用电安全 2.操作仪器安全 3.及时规范记录 HeLa细胞传代培养实验原理细胞传代培养实验原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。贴壁细胞需经消化后才能分瓶。ThankyouThankyou