扫描标本制备.ppt

1 暴露表面与固定暴露表面与固定o目的目的充分暴露表面，充分暴露表面，加以固定使之保加以固定使之保持完好持完好o组织或器官的自然表面（如器管或肠腔组织或器官的自然表面（如器管或肠腔的自然表面）的自然表面）酶消化，低频超声振动，生理盐水喷射酶消化，低频超声振动，生理盐水喷射冲洗冲洗清除表面附着的粘液或富于蛋清除表面附着的粘液或富于蛋白质的液体白质的液体o细胞内部结构细胞内部结构 冷冻断裂，蚀刻冷冻断裂，蚀刻暴露结构暴露结构戊二醛（戊二醛（GA）与四氧化锇两步固定与四氧化锇两步固定(1)1-3%GA1-2h(2)dd水冲洗水冲洗(3)1%四氧化锇四氧化锇1h(4)dd水冲洗水冲洗*暴露表面可在固定过程或固定后清洗过程中暴露表面可在固定过程或固定后清洗过程中完成完成 2 干燥（临界点法）干燥（临界点法）o在空气中自然干燥在空气中自然干燥 表面张力破坏表面微细结构（水，乙醇，丙酮）表面张力破坏表面微细结构（水，乙醇，丙酮）o临界点干燥临界点干燥 临界状态临界状态表面张力表面张力水的表面有一层膜叫表面层。它处在气体与液体水的表面有一层膜叫表面层。它处在气体与液体之间。液体表面层由于跟空气接触，与液体内部之间。液体表面层由于跟空气接触，与液体内部情况有所不同。表面层里分子的分布要比液体的情况有所不同。表面层里分子的分布要比液体的稀疏些，也就是分子间的距离比液体内部的大一稀疏些，也就是分子间的距离比液体内部的大一些。在液体内部，分子间的引力基本上等于斥力；些。在液体内部，分子间的引力基本上等于斥力；在表面层中，由于分子间的距离比液体内部大，在表面层中，由于分子间的距离比液体内部大，分子间的相互作用表现为引力。这种液体各部分分子间的相互作用表现为引力。这种液体各部分间相互吸引的力，叫表面张力。在表面张力的作间相互吸引的力，叫表面张力。在表面张力的作用下，液体表面有收缩到最小的趋势。用下，液体表面有收缩到最小的趋势。临界状态临界状态lg封闭容器封闭容器初始初始：l g加热：加热：l ，g 临界点：临界点：l=g(无表面张力无表面张力)（临界温度，临界压力）（临界温度，临界压力）临界条件临界条件o水：水：T=375C,P=218atm oCO2(L)：T=31.4C,P=72.9atm 水水乙醇乙醇醋酸异戊酯醋酸异戊酯CO2(l)50%70%(80%)90%100%100%10-15m10-15m10-15m10-15m45m45m置换：醋酸异戊酯置换乙醇，置换：醋酸异戊酯置换乙醇，0.5h脱水：脱水：临界点干燥临界点干燥：临界点干燥临界点干燥样品置于样品室；样品置于样品室；样品室充以液态样品室充以液态CO2，15C,15min；40C,5min；放出放出CO2气体。气体。3 导电处理导电处理目的目的将射入的电子导走，将热量导走将射入的电子导走，将热量导走,同时同时增加二次电子产率增加二次电子产率在标本与金属底座之在标本与金属底座之间形成连续的金属膜，间形成连续的金属膜，金属底座与仪器外壳金属底座与仪器外壳连接，接地连接，接地导电胶：石墨乳胶，掺银粉或铝粉的火棉胶导电胶：石墨乳胶，掺银粉或铝粉的火棉胶金属（膜）：金属（膜）：Au,Au-Pd,Pt,Pt-C真空喷镀仪真空喷镀仪离离子子镀镀膜膜仪仪镀镀膜膜厚厚度度o取材并把表面冲洗干净取材并把表面冲洗干净o双固定双固定GA，OsO4o冲洗冲洗0.1MPBo酒精系列脱水酒精系列脱水o醋酸异戊酯置换醋酸异戊酯置换100%乙醇乙醇o临界点干燥临界点干燥o导电处理导电处理