人类染色体G显带标本的制备.ppt

原理n常规制备的染色体标本经烤片后，用常规制备的染色体标本经烤片后，用热碱、各热碱、各种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等种蛋白酶、尿素、去垢剂或其它溶液等预处理预处理再以再以Giemsa Giemsa 染色，在油镜下可看到染色体两染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。蛋白酶法。n可能的机理是：可能的机理是：G G带区含有较丰富的带区含有较丰富的A-T A-T 对，对，在间期核呈固缩状态，而且是在间期核呈固缩状态，而且是DNADNA晚复制区之晚复制区之一。一。GiemsaGiemsa染料在染料在G G带区是与带区是与DNADNA结合，而且结合，而且与结合与结合DNADNA的染色质非组蛋白有关。的染色质非组蛋白有关。nGiemsa染料是噻嗪-曙红染料，染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪-曙红（21）的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合，在此基础上再结合一个曙红分子，其次取决于一个疏水环境，以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白，或使它们的结构变成更亲水状态。由此可知，在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要来自阴性G带区。试剂及器材n试剂：胰蛋白酶、试剂：胰蛋白酶、0.4%0.4%酚红、酚红、5%NaHCO35%NaHCO3、GiemsaGiemsa原液、原液、pH7.4pH7.4磷酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液，0.85%0.85%生理生理盐水。盐水。n器材：器材：3737恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头。头。实验步骤n取取胰胰酶酶25mg25mg，溶溶解解于于盛盛有有50 50 ml0.85%ml0.85%生生理理盐盐水水的的染染色色缸缸中中，置置3737恒恒温温水水浴浴箱箱中中，加加入入0.4%0.4%酚酚红红2 2滴，混匀，以滴，混匀，以5%NaHCO35%NaHCO3调节调节pHpH为为6.6-7.06.6-7.0。实验步骤n待待胰胰酶酶液液温温度度升升至至3737后后，将将染染色色体体标标本本片片（3737烘烘箱箱烤烤片片）放放入入胰胰酶酶液液中中，并并轻轻轻轻摆摆动动，数数秒秒（视视烤烤片片时时间间而而定定）后后取取出出，立立即即自自来来水水冲冲洗。洗。实验步骤n染色：染色：pH7.4pH7.4磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液 4.5 ml4.5 ml Giemsa Giemsa原液原液 0.5 ml0.5 ml 染色染色8-108-10分钟。分钟。n自来水冲洗，空气干燥，镜检。自来水冲洗，空气干燥，镜检。注意事项 n良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，良好的培养效果为，标本片上中期分裂相要多，且染色体分散要好。且染色体分散要好。n染色体长度应能适应显带分析技术的要求。染色体长度应能适应显带分析技术的要求。nG G显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间显带成败之关键取决于胰酶液的浓度和处理时间之搭配。之搭配。实验结果n低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见镜及油镜下观察，可见2323对染色体较为饱对染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的显出深浅不同的G G带横纹。带横纹。n人类染色体人类染色体G G带歌谣：带歌谣：一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好，十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色一担挑，Y染色长臂带黑脚。