实验五DMEM培养液的配制.ppt

实验五实验五 DMEM培养液的配制培养液的配制【能力目标】【能力目标】熟练掌握DMEM细胞培养液的配制。500mL大烧杯 玻璃棒 250mL/500mL盐水瓶 酸度计 50mL小烧杯3个 孔径0.22m微孔滤膜 一次性滤器 一次性滤纸 去离子水 灭活的小牛血清 DMEM干粉 青霉素 链霉素 NaHCO3 超净工作台 磁力搅拌器 电子天平 药匙【实验材料】【实验材料】DMEM干粉干粉 1瓶瓶(1,000mL量量)NaHCO3 3.7gL-谷氨酰胺谷氨酰胺 0.2g超纯水超纯水 1,000mL【配方】【配方】取清洗干净的500mL大烧杯一个，加入新鲜制备的三蒸水约300mL，加热至1530；将DMEM干粉袋竖立轻弹，使袋中粉下沉，剪开袋口，将干粉倒入500mL的大烧杯中，用超纯水冲洗袋23次；放入清洗干净的磁子，在磁力搅拌器充分搅拌，以确保培养基干粉充分溶解；【配制方法】【配制方法】根据配方要求，加入准确称取的NaHCO31.85g，L-谷氨酰胺0.1g，充分摇匀至完全溶解；加入已经制备好的双抗溶液，使青霉素和链霉素的最终使用浓度达到100g/mL；加入培养基总体积约10的已灭活的小牛血清；【配制方法】【配制方法】用浓度为7.4的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.27.4，加超纯水定容，并将培养液转入盐水瓶；用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶，封口，4保存备用。【配制方法】【配制方法】实验五实验五 1M HCl的配制的配制 1M NaOH的配制的配制250mL烧杯 玻璃棒 250mL盐水瓶 一次性滤纸 去离子水 电子天平 药匙 5mL移液器 5mL吸头 NaOH 浓HCl【实验材料】【实验材料】用5mL的移液器准确移取盐酸21mL，加入到279mL超纯水中。【HCl的配制过程】的配制过程】【NaOH的配制过程】的配制过程】NaOH 10g超纯水超纯水 250mL边加边搅拌，溶解过程会产热。边加边搅拌，溶解过程会产热。【课程安排】【课程安排】1、每组确定本组的、每组确定本组的D-Hanks液是否有？液是否有？是否已过滤除菌；是否已过滤除菌；2、每组的、每组的EDTA需要高压灭菌；需要高压灭菌；3、需要配制新鲜的、需要配制新鲜的1M HCl和和1M NaOH溶液，以及溶液，以及7.4的的NaHCO3溶液；溶液；4、需要重新灭菌、需要重新灭菌5mL枪头；枪头；5、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，、每组准备一铝饭盒，内放小剪刀一把，小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，小镊子一把，手术钳一把，大剪刀一把，高压灭菌；高压灭菌；【课程安排】【课程安排】6、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；、每组准备培养皿两套，干烤灭菌；7、需要重新配制双抗溶液。、需要重新配制双抗溶液。