国家自然科学基金申请技巧讲座.pdf

国家自然科学基金申请讲座国家自然科学基金申请讲座第一部分第一部分第一部分第一部分基金委面上项目基金委面上项目基金委面上项目基金委面上项目评审基本程序及重要环节评审基本程序及重要环节评审基本程序及重要环节评审基本程序及重要环节初初初初审：审：审：审：由各学科处组织实施。由各学科处组织实施。由各学科处组织实施。由各学科处组织实施。申请者不具备申请资格或违反有关规定；申请者不具备申请资格或违反有关规定；申请者不具备申请资格或违反有关规定；申请者不具备申请资格或违反有关规定；手续不完备或申请书不符合要求手续不完备或申请书不符合要求手续不完备或申请书不符合要求手续不完备或申请书不符合要求;内容不符合资助范围或超出资助能力内容不符合资助范围或超出资助能力内容不符合资助范围或超出资助能力内容不符合资助范围或超出资助能力;申请者以往资助项目执行不利。申请者以往资助项目执行不利。申请者以往资助项目执行不利。申请者以往资助项目执行不利。查查查查重：重：重：重：由基金委信息中心组织实施。由基金委信息中心组织实施。由基金委信息中心组织实施。由基金委信息中心组织实施。高职申请与承担（含参加）面上、重点、重大高职申请与承担（含参加）面上、重点、重大高职申请与承担（含参加）面上、重点、重大高职申请与承担（含参加）面上、重点、重大累计不超过累计不超过累计不超过累计不超过3 3 3 3项；项；项；项；在职研究生不作为限项申请的条件但只可申请在职研究生不作为限项申请的条件但只可申请在职研究生不作为限项申请的条件但只可申请在职研究生不作为限项申请的条件但只可申请面上项目；面上项目；面上项目；面上项目；申请者同期只能申请一项，每个项目申请者限申请者同期只能申请一项，每个项目申请者限申请者同期只能申请一项，每个项目申请者限申请者同期只能申请一项，每个项目申请者限为一人为一人为一人为一人;高职申请者当年申请及承担的在研面上项目累高职申请者当年申请及承担的在研面上项目累高职申请者当年申请及承担的在研面上项目累高职申请者当年申请及承担的在研面上项目累计不超过两项计不超过两项计不超过两项计不超过两项;不具有高职的申请者申请及负责的在研面上项不具有高职的申请者申请及负责的在研面上项不具有高职的申请者申请及负责的在研面上项不具有高职的申请者申请及负责的在研面上项目不超过一项目不超过一项目不超过一项目不超过一项;青年基金只能获得一项资助。青年基金只能获得一项资助。青年基金只能获得一项资助。青年基金只能获得一项资助。同行评议（同行评议（同行评议（同行评议（一审）一审）一审）一审）：由基金委各学科处组织实施。由基金委各学科处组织实施。由基金委各学科处组织实施。由基金委各学科处组织实施。基本程序：基本程序：基本程序：基本程序：?每份申请书选择同行评议专家（每份申请书选择同行评议专家（每份申请书选择同行评议专家（每份申请书选择同行评议专家（5 5 5 5位）；位）；位）；位）；?函请同行评议：对项目进行定性定量评价；函请同行评议：对项目进行定性定量评价；函请同行评议：对项目进行定性定量评价；函请同行评议：对项目进行定性定量评价；?收回评议卡；收回评议卡；收回评议卡；收回评议卡；?对定量部分进行计算机判读、打分、排序；对定量部分进行计算机判读、打分、排序；对定量部分进行计算机判读、打分、排序；对定量部分进行计算机判读、打分、排序；?据学科资助项目数据学科资助项目数据学科资助项目数据学科资助项目数130130130130确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。确定第二轮评审项目。专家评审组或专业委员会评审（二审）。专家评审组或专业委员会评审（二审）。专家评审组或专业委员会评审（二审）。专家评审组或专业委员会评审（二审）。主要对一审推荐项目进行评议，筛除主要对一审推荐项目进行评议，筛除主要对一审推荐项目进行评议，筛除主要对一审推荐项目进行评议，筛除 30303030。再次对二审会确定资助项目进行审查：再次对二审会确定资助项目进行审查：再次对二审会确定资助项目进行审查：再次对二审会确定资助项目进行审查：进一步查重；进一步查重；进一步查重；进一步查重；以往承担项目是否按期完成；以往承担项目是否按期完成；以往承担项目是否按期完成；以往承担项目是否按期完成；是否有违反基金委有关申请规定。是否有违反基金委有关申请规定。是否有违反基金委有关申请规定。是否有违反基金委有关申请规定。基金委员会委务会审议。基金委员会委务会审议。基金委员会委务会审议。基金委员会委务会审议。下发批准、未批准通知。下发批准、未批准通知。下发批准、未批准通知。下发批准、未批准通知。第二部分第二部分如何撰写国家自然科学基金申请书如何撰写国家自然科学基金申请书一、摘一、摘一、摘一、摘要（限要（限要（限要（限400400400400字）字）字）字）包括：包括：包括：包括：研究方法、内容、目标、科学意义等研究方法、内容、目标、科学意义等研究方法、内容、目标、科学意义等研究方法、内容、目标、科学意义等如：“用方法（手段）进行研究，探索/证明问题，对阐明机制 揭示规律有重要意义，为奠定基础提供思路”如：“用方法（手段）进行研究，探索/证明问题，对阐明机制 揭示规律有重要意义，为奠定基础提供思路”采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障建立老年性白内障建立老年性白内障建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。通过基通过基通过基通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，观察细胞观察细胞观察细胞观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。变化，研究基因的功能。变化，研究基因的功能。变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的角从晶状体上皮细胞的角从晶状体上皮细胞的角从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，为为为为防治白内障提供新思路和理论依据。防治白内障提供新思路和理论依据。防治白内障提供新思路和理论依据。防治白内障提供新思路和理论依据。二、立论依据二、立论依据二、立论依据二、立论依据?对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目科学意义项目科学意义项目科学意义项目科学意义?对应用基础研究，着重结合学科前沿，围绕国对应用基础研究，着重结合学科前沿，围绕国对应用基础研究，着重结合学科前沿，围绕国对应用基础研究，着重结合学科前沿，围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题论述其应用民经济和社会发展中的重要科技问题论述其应用民经济和社会发展中的重要科技问题论述其应用民经济和社会发展中的重要科技问题论述其应用前景前景前景前景在研究领域（疾病防治）层面从研究方向展开围绕本项目拟解决的问题进行归纳分析提出设想从研究领域（疾病防治）切入在研究领域（疾病防治）层面从研究方向展开围绕本项目拟解决的问题进行归纳分析提出设想从研究领域（疾病防治）切入研究意义研究意义立论依据立论依据1 1 1 1、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义、项目的研究意义存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。对科学意义阐述不足或夸大。撰写方法：撰写方法：撰写方法：撰写方法：从疾病入手，简述其特点、危从疾病入手，简述其特点、危从疾病入手，简述其特点、危从疾病入手，简述其特点、危害，害，害，害，目前主要的治疗方法及其存在的问题。目前主要的治疗方法及其存在的问题。目前主要的治疗方法及其存在的问题。目前主要的治疗方法及其存在的问题。简要分析该病发病机理和主要研究热点，引简要分析该病发病机理和主要研究热点，引简要分析该病发病机理和主要研究热点，引简要分析该病发病机理和主要研究热点，引出出出出目前存在的主要问题，也就是本项目要解决的问目前存在的主要问题，也就是本项目要解决的问目前存在的主要问题，也就是本项目要解决的问目前存在的主要问题，也就是本项目要解决的问题，以此为切入点提出假设，阐述如果实现预期目题，以此为切入点提出假设，阐述如果实现预期目题，以此为切入点提出假设，阐述如果实现预期目题，以此为切入点提出假设，阐述如果实现预期目标，对该病甚至相关疾病的预防、治疗具有的理论标，对该病甚至相关疾病的预防、治疗具有的理论标，对该病甚至相关疾病的预防、治疗具有的理论标，对该病甚至相关疾病的预防、治疗具有的理论老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类第一位的致盲疾病。目前，它已是人类第一位的致盲疾病。目前，它已是人类第一位的致盲疾病。目前，它已是人类第一位的致盲疾病。迄今为止迄今为止迄今为止迄今为止,治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的发病时间延缓白内障的发病时间延缓白内障的发病时间延缓白内障的发病时间延缓10101010年，白内障手术的数量年，白内障手术的数量年，白内障手术的数量年，白内障手术的数量就会减少就会减少就会减少就会减少45%145%145%145%1。所以，一些学者认为通过预防。所以，一些学者认为通过预防。所以，一些学者认为通过预防。所以，一些学者认为通过预防白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济问题为一项全球性的社会和社会经济问题为一项全球性的社会和社会经济问题为一项全球性的社会和社会经济问题2222。但是目前我们对老年性白内障发病机理的认但是目前我们对老年性白内障发病机理的认但是目前我们对老年性白内障发病机理的认但是目前我们对老年性白内障发病机理的认识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。抓住引起白内障发生、发展的主要环节。抓住引起白内障发生、发展的主要环节。抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，据此，据此，据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。理论依据。理论依据。理论依据。2 2 2 2、国内外现状分析（综述）、国内外现状分析（综述）、国内外现状分析（综述）、国内外现状分析（综述）存在问题：存在问题：存在问题：存在问题：文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，文献复习不够，对国内外现状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决提出的问题别人已解决提出的问题别人已解决提出的问题别人已解决-低水平重复低水平重复低水平重复低水平重复。对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性缺乏实际应用的可行性缺乏实际应用的可行性缺乏实际应用的可行性-无法实现预期目标无法实现预期目标无法实现预期目标无法实现预期目标。-已有方法与掌握方法的人的结合；已有方法与掌握方法的人的结合；已有方法与掌握方法的人的结合；已有方法与掌握方法的人的结合；-方法理论上可行与现实可行性的结合。方法理论上可行与现实可行性的结合。方法理论上可行与现实可行性的结合。方法理论上可行与现实可行性的结合。对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，对国内外现状只是简单罗列，缺乏归纳分析，缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性缺乏逻辑性和针对性-总结与表达不够总结与表达不够总结与表达不够总结与表达不够。(撰写方法：要撰写方法：要撰写方法：要撰写方法：要紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕紧紧围绕本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。1 1、从疾病切入，、从疾病切入，、从疾病切入，、从疾病切入，简要论述简要论述简要论述简要论述国内外研究成果，国内外研究成果，国内外研究成果，国内外研究成果，并引出当前的热点研究方向。并引出当前的热点研究方向。并引出当前的热点研究方向。并引出当前的热点研究方向。2 2、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，、从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析较详细地分析较详细地分析国内外在国内外在国内外在国内外在本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明本方向的研究进展，引出阐明疾病发病机理或发明新的治疗方法的新的治疗方法的新的治疗方法的新的治疗方法的关键问题关键问题关键问题关键问题所在。所在。所在。所在。3 3、围绕关键问题，、围绕关键问题，、围绕关键问题，、围绕关键问题，详细论述详细论述详细论述详细论述国内外以往的研国内外以往的研国内外以往的研国内外以往的研究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析究结果、当前的现状及今后的发展趋势。综合分析后提出后提出后提出后提出目前尚未解决的问题目前尚未解决的问题目前尚未解决的问题目前尚未解决的问题。4 4 4 4、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于本研究究究究的依据。的依据。的依据。的依据。新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于本研究究究究的理论依据和实验依据。的理论依据和实验依据。的理论依据和实验依据。的理论依据和实验依据。要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技术方法法法法的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清的原理、流程及在实际应用中可能出现的问题要十分清楚，绝不能是一种简单的移植。楚，绝不能是一种简单的移植。楚，绝不能是一种简单的移植。楚，绝不能是一种简单的移植。例如：单链抗体例如：单链抗体例如：单链抗体例如：单链抗体+功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融功能基团，理论上可以实现融合合，合合，防治白内障必须针对其发病的主要环节。多防治白内障必须针对其发病的主要环节。多防治白内障必须针对其发病的主要环节。多防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。发生机理。发生机理。发生机理。就致病的环境因素讲，就致病的环境因素讲，就致病的环境因素讲，就致病的环境因素讲，氧化因子、紫氧化因子、紫氧化因子、紫氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。的发生有关。的发生有关。的发生有关。就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，就研究的部位分，晶状体中皮质与晶状体中皮质与晶状体中皮质与晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体晶状体晶状体晶状体上皮细胞上皮细胞上皮细胞上皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。因为因为因为因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，活性、数量相对稳定的细胞，活性、数量相对稳定的细胞，活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出它们分裂、分化出它们分裂、分化出它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，的透明起重要作用。不仅如此，的透明起重要作用。不仅如此，的透明起重要作用。不仅如此，晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，已有已有已有已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异纯老化的晶状体之间存在差异3333-5 5 5 5。体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素多种因素多种因素(H2O2(H2O2(H2O2(H2O2、UVUVUVUV-B B B B、晶晶晶晶状体蛋白的自身抗体状体蛋白的自身抗体状体蛋白的自身抗体状体蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体晶状体晶状体晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节6666-8888。因此，因此，因此，因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题在，也是有待我们深入研究的问题在，也是有待我们深入研究的问题在，也是有待我们深入研究的问题。白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：白内障相关基因的研究主要以下三方面：白内障相关基因的研究主要以下三方面：白内障相关基因的研究主要以下三方面：一是对体外培养的晶状体白内障模型及上一是对体外培养的晶状体白内障模型及上一是对体外培养的晶状体白内障模型及上一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。皮细胞的研究。皮细胞的研究。皮细胞的研究。UVUVUVUV-B B B B辐射作用诱导的白内障中晶辐射作用诱导的白内障中晶辐射作用诱导的白内障中晶辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其状体上皮细胞是主要的靶细胞，其状体上皮细胞是主要的靶细胞，其状体上皮细胞是主要的靶细胞，其NaNaNaNa-K K K K-ATPATPATPATP酶的酶的酶的酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有的凋亡增加，其中有的凋亡增加，其中有的凋亡增加，其中有c c c c-fosfosfosfos基因的表达增加；还基因的表达增加；还基因的表达增加；还基因的表达增加；还有组蛋白有组蛋白有组蛋白有组蛋白H4H4H4H4、H3 H3 H3 H3 的低表达的低表达的低表达的低表达 和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶和蛋白酶C C C C、-肌肌肌肌动蛋白、动蛋白、动蛋白、动蛋白、-肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达肌动蛋白基因的高表达9999-12121212。CarperCarperCarperCarper等等等等13131313利用利用利用利用RTRTRTRT-PCRPCRPCRPCR-DD(reverse DD(reverse DD(reverse DD(reverse transcriptiontranscriptiontranscriptiontranscription-polymerase chain reaction polymerase chain reaction polymerase chain reaction polymerase chain reaction differential display)differential display)differential display)differential display)技术研究技术研究技术研究技术研究H2O2H2O2H2O2H2O2诱导的晶诱导的晶诱导的晶诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示体上皮细胞的基因差异性表达结果显示体上皮细胞的基因差异性表达结果显示体上皮细胞的基因差异性表达结果显示NADHNADHNADHNADH脱氢脱氢脱氢脱氢酶酶酶酶4 4 4 4亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素亚基、细胞色素b b b b、谷氨酰胺转移酶基因表达谷氨酰胺转移酶基因表达谷氨酰胺转移酶基因表达谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 2 2 2（alternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factoralternative splicing factor）、）、）、）、-三羟基三羟基三羟基三羟基异丁酰辅酶异丁酰辅酶异丁酰辅酶异丁酰辅酶A A A A水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。水解酶基因表达的增加。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白波形纤维蛋白波形纤维蛋白波形纤维蛋白基因（基因（基因（基因（vimentinvimentinvimentinvimentin）、）、）、）、杂交的杂交的杂交的杂交的型中间纤维蛋白基型中间纤维蛋白基型中间纤维蛋白基型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制点是晶状体纤维细胞分化受抑制点是晶状体纤维细胞分化受抑制点是晶状体纤维细胞分化受抑制14,1514,1514,1514,15。GongGongGongGong等等等等16161616报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白3 3 3 3（3 3 3 3 ConnexinConnexinConnexinConnexin）基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（基因敲除小鼠（knockout knockout knockout knockout mousemousemousemouse）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。关，目前尚缺乏进一步的报告。关，目前尚缺乏进一步的报告。关，目前尚缺乏进一步的报告。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee17Lee17Lee17Lee17利用利用利用利用RTRTRTRT-PCRPCRPCRPCR技术研究显示前极性白内障技术研究显示前极性白内障技术研究显示前极性白内障技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、I I I I型胶型胶型胶型胶原纤维、原纤维、原纤维、原纤维、-平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、平滑肌蛋白、TGFTGFTGFTGF-1 1 1 1、TGFTGFTGFTGF-2 2 2 2、TGFTGFTGFTGF-型受体、结缔组织生长因子的基因表达型受体、结缔组织生长因子的基因表达型受体、结缔组织生长因子的基因表达型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。有差异。有差异。有差异。KantorowKantorowKantorowKantorow等等等等18181818利用利用利用利用RTRTRTRT-PCRPCRPCRPCR-DDDDDDDD研究老研究老研究老研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和12121212个低表达的基因。但就个低表达的基因。但就个低表达的基因。但就个低表达的基因。但就DDDDDDDD-PCRPCRPCRPCR技术来讲，在实技术来讲，在实技术来讲，在实技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长cDNAcDNAcDNAcDNA的问题。的问题。的问题。的问题。上述三方面的研究均取得了不同程度的研究上述三方面的研究均取得了不同程度的研究上述三方面的研究均取得了不同程度的研究上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，结果，结果，结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐但由于当时技术条件的限制都未能全面阐但由于当时技术条件的限制都未能全面阐但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。明与白内障相关的基因及其功能。明与白内障相关的基因及其功能。明与白内障相关的基因及其功能。寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。障的发病机理。障的发病机理。障的发病机理。寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SHsubtractive hybridization,SH），），），），它是它是它是它是，但，但，但，但是实验操作复杂。是实验操作复杂。是实验操作复杂。是实验操作复杂。经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交经过改进后的抑制性消减杂交（suppression suppression suppression suppression subtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SSHsubtractive hybridization,SS