DB35_T 2066-2022 十二卷属软叶类多肉植物组培育苗通用技术规范.docx

DB35/T 20662022目次前言 . II1  范围 . 12  规范性引用文件 . 13  术语和定义 . 14  环境设施与控制 . 15  培养基 . 16  外植体采集与处理 . 27  诱导培养 . 38  增殖培养 . 39  生根培养 . 310  炼苗 . 411  质量标准与出苗 . 412  技术档案 . 4附录 A（资料性）  MS 基本培养基成分及母液配制 . 5附录 B（资料性）  十二卷属软叶多肉植物组培培养基配方 . 6附录 C（资料性）  培养基配制记录表 . 7附录 D（资料性）  外植体采集记录表 . 8附录 E（资料性）  接种记录表 . 9IDB35/T 20662022十二卷属软叶类多肉植物组培育苗通用技术规范1  范围本文件规定了十二卷属软叶类多肉植物组培育苗生产技术的环境设施与控制、培养基、外植体采集与处理、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗、质量标准与出苗和技术档案。本文件适用于阿福花科十二卷属软叶类多肉植物组培育苗。2  规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 155692009农业植物调运检疫规程LY/T 18822010  林木组织培养育苗技术规程NY/T 23062013  花卉种苗组培快繁技术规程3  术语和定义LY/T 18822010界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1十二卷属软叶类多肉植物succulent soft leafed plants of Haworthia Duval阿福花科小型多年生高叶型多肉植物。4  环境设施与控制按照NY/T 23062013的规定执行。5  培养基5.1  培养基选择选择MS培养基为基本培养基。5.2  母液配制与保存5.2.1  母液配制母液用无菌的蒸馏水或去离子水配制。母液主要包括大量元素、铁盐、微量元素、有机物质和植物生长调节剂等（参见附录A）。1学兔兔  标准下载DB35/T 206620225.2.2母液保存母液置于3 5 的冰箱中保存，其中铁盐和植物生长调节剂母液储存在避光容器中，母液保存期不超过1个月。母液贮存容器上贴好标签，注明名称、配制日期，发现标签不明或母液中有沉淀、结晶或微生物和藻类应废弃不用。5.3培养基配制5.3.1配制方法依照培养基配方以及需要配制的培养基体积，量取70%75%最终体积（V）的纯净水，按配方量取母液、称取凝固剂和白砂糖，转至分装桶并定容。诱导培养基、增殖培养基和生根培养基配方（参见附录B）。5.3.2pH 值的调整用1.0 mol/L盐酸或1.0 mol/L氢氧化钠调整培养基pH值至5.86.0。5.3.3分装配制好的培养基应及时分装到培养容器中，分装时勿将培养基沾到培养容器口，盖好瓶盖，做好标记和记录（参见附录C）。5.4灭菌将分装好的培养基放入高压蒸汽灭菌器内进行湿热灭菌，在蒸汽压力为0.105 Mpa，温度121 的条件下，灭菌20 min25 min。灭菌后的培养基应置于无风和洁净的环境中冷却至常温。5.5贮存灭菌后的培养基注明培养基编号、配制日期和灭菌锅次。为保证培养基质量，将配制好的培养基在23 27 洁净环境中放置5 d7 d备用，贮存时间不超过一个月。6外植体采集与处理6.1外植体采集选择植株的叶片或花茎作为外植体。春、秋两个生长旺季选择观赏性高、抗逆性强、生长健壮植株作为采集外植体的母株。采集前将母株放在通风处阴干2 d3 d。采集时，对母株用清水冲洗干净，用毛笔蘸洗衣粉水刷洗，并用无菌水清洗35次。外植体要标明品名、来源、采集地点、时间、人员等（参见附录D）。6.2外植体处理在超净工作台上先用75%酒精浸泡外植体20 s30 s，然后用无菌水冲洗3次，再用2%3%的次氯酸钠溶液浸泡15 min25 min，最后用无菌水清洗35次。2DB35/T 206620227诱导培养7.1诱导培养基参见附录B。7.2外植体接种将消毒后的外植体切成1 cm左右的小段，其中以花茎为外植体的需带花芽，垂直或斜插接种到诱导培养基中，外植体与培养基要接触良好，深浅适中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。7.3培养条件接种后先暗培养5 d7 d，再置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27 、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。8增殖培养8.1增殖培养基参见附录B。8.2增殖接种应根据不同品种的组培生长分化特性，接种时将无菌增殖材料切成带23个芽的丛芽或小段，芽苗高保留2 cm左右，切除松散的愈伤、褐化组织、畸形苗和玻璃化苗，接种于增殖培养基中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。8.3培养条件置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27 、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。9生根培养9.1生根培养基参见附录B。9.2生根接种选择无污染、生长健壮、苗高为2 cm4 cm、叶片数为24片的增殖芽苗，切割成单芽接种到生根培养基中。接种后及时填写接种记录表（参见资料性附录E）。9.3培养条件置于光照强度为1 500 Lx2 000 Lx、温度23 27 、湿度RH60%环境中进行培养，每天光照12 h14 h，培养28 d35 d。3DB35/T 2066202210炼苗生根瓶苗根长达到1 2 时，置于光照强度为5 000 Lx8 000 Lx、温度15 30 、湿度RH80%环境中进行炼苗15 d30 d。11质量标准与出苗11.1组培苗质量标准生根苗健壮、无污染、无病虫害，根数2条,叶片数3片。11.2出苗炼苗结束后，从培养瓶中取出组培生根苗，用清水洗去苗上的培养基，置于温度10 30 、通风条件下阴干3 d5 d后，按11.1进行检验。检验合格的包装出苗，贴上合格证，包括品名、代码、数量、生产日期、检验人员。11.3检验检疫按GB 155692009的要求执行。12技术档案技术管理档案的内容参见附录C附录E。4母液种类基质名称定量（mg/L）扩大倍数扩大后称量mg母液体积L配培养基吸取量（mL/L）A大量元素NH4NO31 650.0001016 500.01100KNO31 900.00019 000.0MgSO4·7H2O370.0003 700.0KH2PO4170.0001 700.0CaCl2440.0004 400.0B铁盐FeSO4·7H2O27.8001002 780.0110Na2-EDTA37.3003 730.0C微量元素MnSO4·H2O16.9001001 690.0110ZnSO4·7H2O8.600860.0CuSO4·5H2O0.0252.5NaMoO4·2H2O0.25025.0CoCl2·6H2O0.0252.5KI0.83083.0H3BO36.200620.0D有机物质烟酸0.5005025.00.510盐酸硫胺素0.1005.0盐酸吡哆醇0.50025.0甘氨酸2.000100.0肌醇100.0005 000.0DB35/T 20662022附录A（资料性）MS 基本培养基成分及母液配制十二卷属软叶类多肉植物MS基本培养基成分及母液配制参见表A.1。表A.1  十二卷属软叶类多肉植物 MS 基本培养基成分及母液配制5基质类别基质名称诱导培养基（mg/L）增殖培养基（mg/L）生根培养基（mg/L）大量元素NH4NO3825.000825.000825.000KNO3950.000950.000950.000MgSO4·7H2O185.000185.000185.000KH2PO485.00085.00085.000CaCl2220.000220.000220.000铁盐FeSO4·7H2O27.80027.80027.800Na2-EDTA37.30037.30037.300微量元素MnSO4·H2O16.90016.90016.900ZnSO4·7H2O8.6008.6008.600CuSO4·5H2O0.0250.0250.025NaMoO4·2H2O0.2500.2500.250CoCl2·6H2O0.0250.0250.025KI0.8300.8300.830H3BO36.2006.2006.200有机物质烟酸0.5000.5000.500盐酸硫胺素0.1000.1000.100盐酸吡哆醇0.5000.5000.500甘氨酸2.0002.0002.000肌醇100.000100.000100.000植物生长调节剂6-BA0.5000.8000.2000.400IBA0.2000.3000.3000.600NAA0.3000.600IAA0.1000.300蔗糖白砂糖30 000.00030 000.0003 000.000凝固剂卡拉胶6 000.0006 000.0007 000.000DB35/T 20662022附录B（资料性）十二卷属软叶多肉植物组培培养基配方十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配方参见表B.1。表B.1  十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配方6DB35/T 20662022附录C（资料性）培养基配制记录表十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配制记录表参见表C.1。表C.1 十二卷属软叶类多肉植物组培培养基配制记录表日期培养基名称培养基代码培养基配制量L母液代码  A  B  C  D  E  F  G  H  I  J  K   PH   备注   签名1 L 配方取量mL7采集日期采集人采集地点科属名植物名学名基本特征采集部位采集数量照片存放点备注DB35/T 20662022附录D（资料性）外植体采集记录表十二卷属软叶类多肉植物外植体采集记录表参见表D.1。表D.1  十二卷属软叶类多肉植物外植体采集记录表8时间品种代码接种人员原材料数量瓶阶段代数接种数量瓶培养基代码备注DB35/T 20662022附录E（资料性）接种记录表十二卷属软叶类多肉植物接种记录表参见表E.1。表E.1  十二卷属软叶类多肉植物接种记录表9