水产品中的组胺的检测42055.pdf

实验二 水产品中的组胺的检测 一、实验目的 l了解偶氮试剂比色法测定水产品中组胺的方法原理。2掌握正戊醇提取组胺的操作技术。3学会用偶氮试剂比色法检测水产品中组胺的检测技术。二、实验原理 水产品中的组胺用正戊醇提取，遇偶氮试剂显橙色，与标准系列比较定量。组胺是水产品中游离的组氨酸在组氨酸脱羧酶作用下，发生脱羧反应而形成的一种胺类物质。脱羧酶来自一些含有组氨酸脱羧酶的微生物，如某些肠杆菌、弧菌属等，其中最主要的是摩根变形杆菌和组胺无色杆菌。当水产品受到这些细菌污染后，会产生大量的组胺，从而反映出水产品受微生物污染的程度。三、仪器与试剂 (1)正戊醇；三氯乙酸溶液(100g/L)；碳酸钠溶液(50g/L)；氢氧化钠溶液(250g/L)；盐酸(1+11)。(2)偶氮试剂 甲液：称取对硝基苯胺，加盐酸溶液溶解后，再加水稀释至 250mL，置冰箱中。乙液：亚硝酸钠溶液(5g/L)，临用现配。甲液 5mL、乙液 40mL 混合后立即使用。(3)磷酸组胺标准贮备液准确称取0.2767g于(100士5)干燥2h的磷酸组胺，溶于水，移入 100mL 容量瓶中，加水至刻度。此溶液每毫升相当于组胺，(4)磷酸组胺标准使用液 吸取磷酸组胺标准贮备液，置于 250mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于 20g 组胺。四、实验步骤 1样品处理 称取l0.00g 切碎样品，置于具塞锥形瓶中，加入 1520mL 三氯乙酸溶液，浸泡 23h，过滤。吸取滤液，置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液使呈碱性。每次加入 3mL 正戊醇，振摇 5min，提取三次。合并正戊醇提取液并稀释至。吸取正戊醇提取液于分液漏斗中，每次 3mL 盐酸(1+11)振摇提取三次，合并盐酸提取液并稀释至。备用。2测定 吸取盐酸提取液于10mL比色管中。另吸取0、组胺标准使用液(相当于0、4g、8g、12g、16g、20g 组胺)，分别置于 10mL 比色管中，加水至 lmL，再各加 lmL 盐酸溶液。样品与标准管各加 3mL 碳酸钠溶液、3mL 偶氮试剂，加水至刻度，混匀，放置 10min 后用 lcm比色杯以零管为参比，于 480nm 波长处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。管号 0 1 2 3 4 5 样品管 组胺标准使用液/mL 0 2mL 提取液 纯水/mL 0 盐酸溶液/mL 标准管加 样品管不加 碳酸钠溶液/mL 样品与标准管各加 偶氮试剂/mL 样品与标准管都加，加水至刻度，混匀，放置 10min 组胺含量/g 0 4 8 12 16 20 吸光值（A）五、结果计算 (1)计算公式 m1 x=m2(2/v1)(2/10)(2/10)1000 式中，x 为样品中组胺的含量，mg/100g；V1为加入三氯乙酸溶液的体积，mL；m1为测定时试样中组胺的含量，g；m2为试样质量，g。(2)结果的表述报告算术平均值精确至小数点后一位。六、注意事项 1.本方法的最低检出浓度为 5mg/100g，允许相对误差10。2.用正戊醇提取三氯乙酸溶液中的组胺时，必须用氢氧化钠溶液调 pH 至碱性，以便于游离组胺的提取。七、思考题 1.影响组胺含量测定准确性的因素有哪些 2.组胺与偶氮试剂的反应中，酸碱度控制不当会给实验结果造成怎样的影响