2022年细胞生物学实验测试题.docx

精选学习资料 - - - - - - - - - 细胞生物学试验测试题1、试述荧光显微镜的原理和用途；（并操作）使之发原理 ：荧光显微镜是以紫外线为光源,用以照耀被检物体,出荧光,然后在显微镜下观看物体的外形及其所在位置；（滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯）用途 ：荧光显微镜用于讨论细胞内物质的吸取、运输、化学物质的分布及定位等； 细胞中有些物质, 如叶绿素等, 受紫外线照耀后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光,但假如用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照耀亦可发荧光, 荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一；2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤；原理 ：酸性磷酸酶（ ACP）是溶酶体的标志酶,通常酸性磷酸酶在 pH 为 5 左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基,PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物； 由于这些沉淀物是无色的, 需再与黄色的硫化 铵反应,生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来；其反应过程如下： - 甘油磷酸钠 +酸性磷酸酶甘油 +PO43- PO43-+PbNO32 Pb3PO42Pb3PO42+NH42S PbS 棕黑色 主要步骤：1、 前处理：猎取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2 、 制片：（1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的洁净载玻片上,用牙 签涂开,自然干燥；（2）、放入 10%中性福尔马林固定液中固定 30min；（3）、蒸馏水中漂洗 ,3-5 次； （洗去固定液）（4）、磷酸酶作用液, 37° C,30Min；（5）、蒸馏水中漂洗 3 次,5min 一次；（洗去游离铅离子）（6）、1%硫化铵处理（ 3-5min ）; （7）、吉姆沙染液复染 15min; （使细胞核、轮廓显示出来）（8）、制片观看；结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶；对比试验：标本放入作用液前先用高温（性,做好标记,其他步骤相同；50）处理 30min ,使酶失去活3、试述 DNA的 Feulgen 染色法的原理及主要步骤；原理 ：DNA经稀盐酸（ 1mol/L HCL溶液）处理后,可使嘌呤碱与脱氧名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 核糖间的糖苷键断裂,并使脱氧核糖的醛基游离出来,醛基化合物与 Schiff 试剂（无色品红溶液） 结合,形成含醌基的紫红色化合物,使细胞 内含 DNA的部位呈紫红色, 由出现紫红色的部位即可推断 DNA的存在,为 提高试验的可信度,应设置对比试验,即将对比组先用热三氯乙酸处理,以除去细胞中的 DNA；4、固定液的作用是什么？说出我们试验中所用过的几种不同的固定液及它们的有用范畴；作用 ：1、破坏细胞的酶系统,防止细胞自溶；2、稳固细胞物质成分；3、稳固各种细胞结构的空间构型；总的来说,杀死并固定细胞；我们试验中用到的固定液动物肝细胞线粒体的分别与观看 细胞中酸性磷酸酶的定位 植物细胞骨架的光学显微镜观看固定液 甲醇：冰醋酸 =9：1 固定液 10%福尔马林 固定液 3%戊二醛DNA的 Feulgen 染色法 Carony 固定液 简洁固定剂即单一固定剂,常有的有乙醇,甲醛,冰醋酸等；乙醇只 能凝固清蛋白,而冰醋酸只能凝固核蛋白,甲醛对这两种蛋白都不凝固；简洁固定剂的局限性大, 如将其适当混合, 制成复合固定剂可以取得更好 的成效；常有的混合固定剂有 Carony 改良液（3份无水乙醇 +1份冰醋酸）,Bouin 液等5、常用的组织破裂方法有哪些？各自的适用范畴如何？1. 机械法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破裂的方法,常用 的器械有组织捣碎机、匀浆器、研钵和研磨、压榨器等； 1 组织捣碎机、匀浆器：一般用于动物组织、植物肉质种子、柔嫩 的叶芽等,匀浆器破裂细胞的程度比组织捣碎机高； 2 研钵: 多用于细菌或其他坚硬植物材料, 研磨经常加入少量石英 砂,玻璃粉或其他研磨剂,以提高研磨成效；名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 2 物理法 主要通过各种物理因素使组织细胞破裂的方法；1 反复冻溶法 : 多用于动物性材料； 2 急热骤冷法 : 用于细菌及病毒材料； 3 超声波处理 : 多用于微生物材料；3化学及生物化学法 1 自溶法 : 在肯定 PH和适当的温度下,利用组织细胞内自身的酶 系统将细胞破裂的方法；2 酶溶法 : 利用各种水解酶,如溶菌酶、纤维素酶、半纤维素酶、脂酶等,将细胞壁分解,使细胞内含物释放出来； 3 表面活性剂处理 : 如十二烷基硫酸钠；6、什么是差速离心法、密度梯度离心法？各自的用途如何；差速离心法： 是交替使用低速和高速离心, 用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分别的方法；用途：此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分别, 实行逐步提高离心速度的方法分别不同大小的 细胞器；密度梯度离心法： 用肯定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,将细胞悬液或者匀浆置于介质的顶部,通过重力或者离心力场的作用,使细胞分层分别；用途： 可用来分别核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分；7、染色法有哪些方式？各自如何进行？蛋白电泳常用的染色方法主要是 染法 ；用适当浓度的 TritonX-100考马斯亮蓝法, 银染法,荧光染色法和负 处理细胞, 再经戊二醛固定和蛋白质染料考马斯亮蓝 R250染色,即可观看细胞骨架结构；吉姆萨（ Giemsa）染色法 ：将细胞染色,使细胞器的轮廓显示出来,便于 观看；染色体染色法：醋酸洋红溶液或龙胆紫溶液先用 95%的酒精解离,再用水漂洗10min, 然后用上述溶液染色35min；苏木精 伊红染色法 ：苏木精染液为碱性,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色；8、显示染色体的试验,其材料往往需要作什么预处理？取材部位如何挑选？答：预处理：相宜浓度的秋水仙素；取材：生长旺盛或具有高度分裂才能的部位；名师归纳总结 9、试述用考马斯亮蓝R250 来显示细胞微丝骨架的原理及其第 3 页,共 6 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 应留意的事项；原理 ：细胞骨架是由蛋白纤维组成的复杂网状结构,可分为微管、 微丝和中间纤维； 用适当浓度的 tritonx-100处理细胞,可将细胞质膜中和细胞之中的蛋白质和全部脂质抽提, 单细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被储存,经用戊二醛固定,考马斯亮蓝r250 染色后,可在光学显微镜下观看到由微丝组成的微丝束为网状结构,就是细胞骨架；留意事项 ：1 洋葱内表皮细胞在进行处理前必需在 ph6.8 的磷酸缓冲 液中下沉； 2 固定,染色时间必需足够10、 试述细胞类坏死处理的原理和死活细胞鉴别的方法；原理 ：类坏死细胞是细胞介于生活和死亡之间的临界状态；引起类坏死的方法多种多样如高温、冷冻、紫外线照耀、酸碱处理等；类坏死和死亡之间的区分在于前者发生的变化是可逆的 而后者是不行逆的；鉴定方法 ：1、依据细胞膜的通透性差异,可用化学染色法鉴定死活细胞,2、依据细胞代谢的差异 可用荧光染色法鉴定以及亚甲基蓝法鉴别酵母细胞的死活；3、质壁分别法可鉴别植物细胞的死活；11、 如何进行线粒体的分别和鉴定（并说明原理）？分别线粒体, 可将组织匀浆液悬浮在悬浮介质中进行差速离心；在肯定的离心场中,大小不一的颗粒沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的粘度； 在一个匀称悬浮介质中离心肯定时间, 组织匀浆中的各种细胞器及其它内含颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部,从而分批收集； 细胞器中最先沉淀的是细胞核,其次是线粒体,其他更轻的细胞器和大分子可依次再分别；线粒体的鉴定可用詹纳斯绿活染法, 由于线粒体中细胞色素氧化酶系的作用,使染料始终保持氧化状态,呈蓝绿色,而四周的细胞质中的染料被仍原成无色,从而鉴定；12、 在分别出线粒体后,如要对其进行深化讨论,技术路线如何？答：将提取的线粒体制成悬浊液,滴一滴放在载玻片上, 然后用詹姆斯绿B染色 20 到 30 分钟后,在显微镜下观看即可；13、在使用高速离心机时,要留意哪些问题？1. 放置离心管的时候肯定要对称的放置,同时保持重量相当； 2. 在开启离心机的时候肯定要将离心机的盖子盖实；3. 开启和关闭离心机应当让速度缓慢增速或减速启动；名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 4. 假如是有毒试剂仍要做好通风处理；14、 在分别叶绿体时发觉分别出来的叶绿体很小,如何验证是否是由于该材料的叶绿体原来就小仍是由于在分别时破裂造成的？答：将所获得的叶绿体悬液当心加到做好的percoll梯度上,10500g,4离心 10min,假如条带位于较上方的梯度,就为破裂的叶绿体,假如条带 接近于梯度底部,就为完整叶绿体,叶绿体本身较小；15、 在叶绿体分别出来后进行荧光观看,能清晰的观看到吗？可以 , 有些生物体内的物质受激发光照耀后直接发出荧光,称为自发荧光 或直接荧光 ,如叶绿索的火红色荧光和水质素的黄色荧光等；有的生物 材料本身不发荧光, 但它吸取荧光染料后同样也能发出荧光,这种荧光称 为次生荧光 或间接荧光 ,如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光；16、 表达“ 细胞膜的渗透性” 试验的原理、主要步骤和应留意的问题；原理 ：细胞膜答应一些物质通透, 又能降低甚至阻挡另一些物质的通透,此 即细胞膜的挑选通透性；当红细胞放在低渗盐溶液中,水分子大量渗到细胞内,可使细胞胀破,血红 蛋白释放到溶液中, 使溶液由不透亮的红细胞悬液变为红色透亮的血红蛋白溶液,这种现象称为溶血； 发生溶血现象所需时间长短, 可作为测量物质进入红细胞速 度的一种指标；脂溶性物质如甘油等分子简洁透过细胞膜,当这些分子进入红细胞时,会 使细胞内的渗透压增加,细胞吸水膨胀,细胞膜破裂发生溶血；主要步骤：1、血红细胞悬液制备：取兔血2-3ml ,加入 85%生理盐水 4ml, 在 1000 转每分别心 5min, 取 50ml 烧杯,将上述离心的红细胞用等渗溶液进行适当稀 释；2、用注射器取 10ml 稀释过的细胞悬液备用；3、取试管架, 10 支洗洁净的试管,分别标号；4、分别一一取 10 支试管,依次加入 Nacl 溶液,丙酮、乙醇、Na2SO4,甘油、硝酸钠、葡萄糖溶液、 NH4CL溶液、草酸铵溶液、乙酸铵溶液等量；5、再取上述试管,每支试管分别加入1ml 兔血,计时,看其能否发生溶血,如溶血,记录所需时间；6、取几种能够发生溶血的试管中的溶液放入离心管中,3000 转每分别心5分钟后,取上层细胞悬液制成装片观看；名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 留意问题 ：1. 离心机使用时,要将配平后的离心管对称放置；2. 试管中有红细胞和测试溶液时,不应强力摇动,以免造成人为的红细胞 破裂；3. 溶血较快的试管, 用显微镜观看时要留意滴加血液后立刻镜检,否就会看 不到试验结果；17、 进行细胞内的物质或结构原位显示的方法有哪些？各有什么特点；细胞化学活体染色的方法、荧光标记免疫抗体的方法 细胞化学活体染色的方法特点： 活体染色是利用某些无毒或毒性很小 的染料来显示细胞内某些自然结构, 而不影响细胞的生命活动或产生任何 物理、化学变化以致引起细胞的死亡；荧光标记免疫抗体的方法特点： 荧光抗体标记是将荧光素以化学方法与特异性抗体共价结合,形成荧光素 - 结合蛋白质化合物 （即荧光标记抗体）,此结合物仍保留着抗体活性,同时具有荧光素的示踪作用；18、 如何进行马铃薯块茎细胞及其淀粉粒的制片与观看？用刀片切取马铃薯块茎薄皮, 放在盛有生理盐水的培育皿中, 37下浴浮；然后捞出置于载玻片中心, 滴加生理盐水, 制备两张装片, 其中一张滴加 KI 溶液染色,两张对比,镜检；染色的装片可见有很多蓝色的球形或椭球 形的颗粒,即为淀粉粒；未染色的装片也可看到球形或椭球形的透亮颗粒,即淀粉粒；名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页