实验二影响酶促反应的因素.pptx
一、实验目的1 1通过实验，观察温度、通过实验，观察温度、pHpH值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。值、激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响。2 2能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。能运用所学的生化知识对实验结果进行正确的分析。第1页/共17页二、实验原理利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶利用淀粉及其水解产物的颜色反应，来比较唾液淀粉酶在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、在不同条件下催化淀粉水解的程度，从而判断温度、pHpH、激动剂和抑制剂对酶的活性影响。激动剂和抑制剂对酶的活性影响。淀粉淀粉糊精糊精麦芽糖和葡萄糖麦芽糖和葡萄糖蓝色蓝色碘碘紫色紫色红色红色无色无色无色无色碘碘碘碘第2页/共17页二、实验原理 u在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，在低温时，酶活性降低，酶促反应速度较慢，甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反甚至停止；随着温度升高，酶的活性恢复，反应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最应速度加快；当达到最适温度时，酶的活性最大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的大，酶促反应速度达到最大。人体内大多数的酶的最适温度在酶的最适温度在3737左右。温度过高，酶变性左右。温度过高，酶变性失活，酶促反应速度下降，甚至停止。失活，酶促反应速度下降，甚至停止。u每种酶都有最适的每种酶都有最适的pHpH值，在最适值，在最适pHpH值时，酶的值时，酶的活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适活性最大，酶促反应速度最快；偏离酶的最适pHpH均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾均可引起酶蛋白变性而降低或失去活性。唾液淀粉酶的最适液淀粉酶的最适pHpH值为。值为。u氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾氯离子对唾液淀粉酶有激活作用；铜离子对唾液淀粉酶有抑制作用。液淀粉酶有抑制作用。第3页/共17页三、实验材料u1.1%1.1%淀粉溶液淀粉溶液 取可溶性淀粉取可溶性淀粉1g,1g,加加5ml5ml蒸馏蒸馏水水,调成糊状调成糊状,再加再加80ml80ml蒸馏水蒸馏水,加热并不加热并不断搅拌断搅拌,使其充分溶解使其充分溶解,放冷放冷,最后用蒸馏最后用蒸馏水稀释至水稀释至100ml100ml。u缓冲液缓冲液 取溶液取溶液205ml205ml，柠檬酸溶液，柠檬酸溶液795ml,795ml,混混合即成合即成.u缓冲液缓冲液 取溶液取溶液772ml772ml，柠檬酸溶液，柠檬酸溶液228ml,228ml,混混合即成合即成.u缓冲液缓冲液 取溶液取溶液972ml972ml，柠檬酸溶液，柠檬酸溶液28ml28ml混合即混合即成成.第4页/共17页5.0.9%NaCl溶液 6.1%CuSO4溶液7.碘液 9.试管架 11.试管夹 12.滴管 13.白瓷板 14.恒温水浴箱 15.电炉 16.烧杯第5页/共17页【注意事项】1.注意实验器材的干净，避免杂质影响反应结果2.各管反应时间应严格控制，保证一致。第6页/共17页四、实验方法稀释唾液制备稀释唾液制备 用水漱口，含蒸馏水咀嚼用水漱口，含蒸馏水咀嚼2 2分分钟后，把唾液吐进烧杯中备用。钟后，把唾液吐进烧杯中备用。（注：唾液淀（注：唾液淀粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进粉酶活性具有个体差异，按下述各实验方法进行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，行实验，有部分同学可能失败，可重新操作，但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变但在重做过程中，要根据第一次实验结果改变稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液稀释唾液的用量，反应太慢，则增加稀释唾液用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）用量，如果反应太快，则减少稀释唾液的用量）煮沸唾液的制备煮沸唾液的制备 取上述唾液约取上述唾液约5ml5ml，放入沸水，放入沸水中煮沸中煮沸5 5分钟，取出备用。分钟，取出备用。第7页/共17页（一）温度对酶促反应速度的影响管管 号号 123缓冲液（缓冲液（pH6.8）20滴滴20滴滴20滴滴1%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温把三支管溶液摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴预温预温温度预温温度 0 37 37预温预温5分钟后取出，继续向各管加入相应唾液分钟后取出，继续向各管加入相应唾液稀释唾液稀释唾液10滴滴10滴滴 煮沸唾液煮沸唾液10滴滴把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴把三支管摇匀，然后分别放至相应的温度中水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴滴水浴温度水浴温度 03737结果与分析结果与分析第8页/共17页取白瓷板一块，向各凹分别加取白瓷板一块，向各凹分别加1 1滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液黄色时），向各管加碘液1 1滴，摇匀观察颜色变化滴，摇匀观察颜色变化(切记勿摇动切记勿摇动)。摇匀再观察。摇匀再观察。第9页/共17页（二）pH对酶促反应速度的影响管号管号1231%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴pH5.0缓冲液缓冲液10滴滴pH6.8缓冲液缓冲液10滴滴pH8.0缓冲液缓冲液10滴滴稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴5滴滴把三支管摇匀，然后放至把三支管摇匀，然后放至 37水浴水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴摇匀滴摇匀结果与分析结果与分析第10页/共17页将各管混匀，放进将各管混匀，放进3737水浴水浴箱中保温。箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别取白瓷板一块，向各凹分别加加1 1滴碘液，每隔半分钟用滴滴碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从管或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，滴，加到已加有碘液的小凹中，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直至与碘不观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘液向各管加碘液1 1滴，摇匀观察滴，摇匀观察颜色变化。颜色变化。第11页/共17页（三）激活剂与抑制剂对酶促反应速度的影响管号管号12341%淀粉溶液淀粉溶液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴pH6.8缓冲液缓冲液10滴滴10滴滴10滴滴10滴滴蒸馏水蒸馏水2滴滴氯化钠溶液氯化钠溶液2滴滴CuSO4溶液溶液2滴滴Na2SO4溶液溶液2滴滴稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴5滴滴5滴滴把三支管摇匀，然后放至把三支管摇匀，然后放至 37水浴水浴10分钟，加碘分钟，加碘2滴摇匀滴摇匀结果与分析结果与分析第12页/共17页将各管摇匀，放进将各管摇匀，放进3737水浴箱中保温。取白瓷板水浴箱中保温。取白瓷板一块，向各凹分别加一块，向各凹分别加1 1滴滴碘液，每隔半分钟用滴管碘液，每隔半分钟用滴管或玻棒从或玻棒从2 2号管取溶液号管取溶液1 1滴，加到已加有碘液的小滴，加到已加有碘液的小凹中，观察颜色变化，直凹中，观察颜色变化，直至与碘不呈色时（即只显至与碘不呈色时（即只显棕黄色时），向各管加碘棕黄色时），向各管加碘液液1 1滴，摇匀，观察各管滴，摇匀，观察各管颜色变化。颜色变化。激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂第13页/共17页激活剂与抑制剂激活剂与抑制剂五、思考题1.什么是酶的最适温度？2.什么是酶的最适pH?3.激活剂与抑制剂对酶活性影 响实验中设置第四管的作用 是什么？4.什么是酶的特异性？第14页/共17页（四）（四）酶的专一性对酶促反应的影响。酶的专一性对酶促反应的影响。加入物加入物1号管号管2号管号管3号管号管PH值值6.8缓冲液缓冲液20滴滴20滴滴20滴滴1%的淀粉的淀粉10滴滴10滴滴1%的蔗糖的蔗糖10滴滴煮沸唾液煮沸唾液5滴滴 稀释唾液稀释唾液5滴滴5滴滴结果与分析结果与分析（2）混匀，37 水浴10min，分别加入班氏试剂20滴。（3）各管摇匀置于沸水煮沸8-10min，观察结果并记录。第15页/共17页酶的专一性酶的专一性第16页/共17页感谢您的观看！第17页/共17页
