登革热病例的标本采集和实验室检测.ppt

登革热病例的标本采集和实验室检测登革热病例的实验室诊断n单份血清特异性IgG抗体或IgM抗体阳性n急性期、恢复期血清的登革IgG抗体滴度4倍增长nRT-PCR或荧光PCR检测到登革病毒基因n从急性期患者血清、脑脊液、血细胞、组织中分离到登革病毒登革热病例的标本采集全血标本全血标本采集流程：采集流程：无菌采集发病后0-5d的患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的采血管中，标明采样日期和病人的姓名，立即送至实验室分离血清全血不能冷冻；运送过程尽量减少颠簸，避免溶血，最好于24小时内分离到血清。血清标本血清标本分离流程：分离流程：尽量采集病人的急性期和恢复期血清。采集时间：第一份血应在发病3天内采集，最迟不晚于发病后7天。第二份血应在发病24周采集。无菌采集患者静脉血3ml，加入到无菌干燥的试管中，标明病人姓名、采集日期，并做好病人性别、年龄、发热日期、出疹日期的资料登记。常温送到实验室分离血清。2000rpm离心10分钟，分离血清；如果没有离心机，血标本应静置，直到血清析出；小心吸取血清，避免吸到红细胞；在无菌条件下，移至无菌的螺口离心管中；短期（7天内）保存置于48，长期保存于20。脑脊液标本脑脊液标本分离流程：分离流程：标本采集应由临床医生完成。由腰椎穿刺无菌采集脑脊液35ml，放于无菌螺口离心管内。标本采集后应立即4送检。蚊标本蚊标本采集、处理流程：采集、处理流程：采集吸过血的埃及伊蚊、白纹伊蚊或其它可疑蚊种，用10%葡萄糖液喂养至胃血消化完，-20冷冻。按蚊种及捕获地点分组，20-50只/组，用生理盐水冲洗后加入1ml标本处理液，充分研磨，10000RPM，4，离心10min，取上清液。-上清液于4 作用2h,接种C6/36细胞分离病毒。-上清液分离核酸，进行RT-PCR或荧光PCR检测登革病毒 核酸。标本的包装运输生物安全手册(WHO 3rd edition):运送感染性材料的基本三层包装：内层容器、第二层包装、外层包装内层包装：防水、防漏、贴好标签、标本独立包装 第二层包装：防水、防漏（带吸收性材料）外层包装：为第二层包装提供物理性保护、保持低温（冰袋，4）登革热病例的实验室检测方法胶体金快速检测登革热特异性抗体IgM/IgG标本类型：血清阳性结果必须经病毒分离、双份血清抗体滴度检测或病毒核酸检测，才能确诊为登革热病毒感染。ELISA检测登革热特异性抗体IgM/IgG标本类型：血清、脑脊液 ELISA原理：底物被酶高效催化成为有色产物，即间接放大了抗原抗体之间的免疫反应，检测样品的吸光度值可确定样品中是否存在登革热抗体IgM/IgG。C6/36细胞培养分离登革病毒标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液正常C6/36病变C6/36（+）CPE:细胞皱缩脱落、胀大成空泡、折光度增大、内容物增多RT-PCR检测登革病毒基因标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液产物电泳，根据条带大小判断目的核酸存在与否根据基因型不同，设计通用型、I、II、III、IV型探针，标上不同荧光基团，根据不同颜色的PCR扩增曲线进行结果判断实时荧光PCR检测登革病毒基因标本类型：血清、脑脊液、蚊匀浆液谢谢！