GFP蛋白的表达、分离与纯化.ppt
王媛媛课堂提问每人2-3个问题；权重：30%总结报告PPT，5人一组，10分钟；权重：30%实验报告权重：40%要求：标准的论文格式：中、英文标题和摘要；前言；材料与方法；结果；讨论；参考文献。PPT：照片、视频展示个性，潮！Day 0:准备实验材料Day 1:GFP表达质粒的提取；Top 10感受态细胞的制备；GFP表达质粒转化Top 10。Day 2:GFP表达菌株扩大培养；GFP的诱导表达。Day 3:表达菌株的收集、破碎；硫酸铵沉淀所用浓度的确定；硫酸铵沉淀GFP；疏水层析。Day 4:离子交换层析；透析；凝胶过滤层析。Day 5:SDS-PAGE；染色；脱色，观察结果。记得带照相机！鸣谢：生命学院生物科学104班邹兵 周嘉 赵琅李运彰 汪源原核：E.coli真核：Yeast Insect mammalsVector:pET series,pGEX series,gateway series,pMAL,pTWIN I,pETDuet,et.al.BL21(DE3),BL21(DE3,pLysS),Origami,Rosetta,Rosetta-gamiTop10,HB101,C41/C43能否用BL21(DE3)表达pGLO？能否用Top10表达pET32a？，加入诱导剂；，收获菌体；诱导剂用量 IPTG:0.2mM;0.5mM;1mM诱导温度 20；25/28；37 如何留样能在一张SDS-PAGE胶图中(10-12 wells)体现诱导的效果、(NH4)2SO4粗分离效果、疏水层析纯化效果、离子交换层析纯化效果、凝胶过滤层析纯化效果？
