体液免疫球蛋白测定.pdf

体液免疫球蛋白测定 免疫球蛋白（Ig）是由浆细胞合成和分泌的一组具有抗体活性的蛋白质，按其重链性质共分 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE 五类。Ig 主要存在于血液中，约占血浆蛋白总量的 20%，IgG、IgA、IgM 的含量为 g/L 水平，而 IgD、IgE 含量仅为 mg/L 水平。血清 IgG、IgA、IgM 测定 血液中最主要的免疫球蛋白，在机体的体液免疫效应和抗病原生物侵入机体的免疫功能中发挥重要作用。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。一、血清 IgG、IgA、lgM 测定 1.单向环状免疫扩散法 该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。本法出现误差的原因有：抗原或标准液溢出加样孔；因抗体或抗原过量而致沉淀环过小或过大；加样量不足或过多，或混有气泡；加样孔破损，使沉淀环呈不规则状；板浇注后保存时间长，引起板内水分蒸发或变形；浇注琼脂时不在水平台面，使胶板厚薄不匀；打孔后挑取琼脂时将胶板挑起，与玻璃板剥离，以致待测血清在孔底流溢；扩散时湿盒不平，导致沉淀环不圆。2.免疫比浊法 检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好。二、血清 IgG、IgA、IgM 测定的临床意义 1.年龄 新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的 IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。婴幼儿其体液免疫功能尚不成熟，Ig 含量低于成人。2.免疫球蛋白 IgG、IgA、IgM 均升高 慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见 3 种 Ig 均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血 IgG 可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中 IgM 含量可增高。各种结缔组织性疾病中常见各型 Ig 升高，SLE 患者以 IgG、IgA 升高较多见，类风湿关节炎患者以 IgM 增高为主。3.单一免疫球蛋白升高 某一类 Ig 含量显著增多，多无免疫活性，大多在 30g/L 以上。这种异常增多的 Ig 理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即 M 蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病。4.免疫球蛋白降低 有先天性和获得性两类。先天性低 Ig 血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。一种情况是Ig 全缺，如 Bruton 型无 Ig 血症，血中 IgG 常小于 1g/L，IgA 与 IgM 含量也明显减低为正常人的 1%。另一种情况是 3 种 Ig 中缺 1 或 2 种，如 IgA 缺乏患者，易发生反复呼吸道感染；IgG 缺乏患者，易发生化脓性感染；IgM 缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。获得性低 Ig 血症，血清中 IgG 常小于 5g/L，引起原因较多，如大量蛋白流失的疾病（剥脱性皮炎、肠淋巴管扩张症和肾病综合征）、淋巴系统肿瘤（淋巴肉瘤、霍奇金淋巴瘤）、中毒性骨髓疾病、长期使用免疫抑制剂的患者等。血清 IgD 和 IgE 测定 正常人血清中 IgD 含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的 0.2%其生物学功能尚不清楚。IgE 是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，可介导型超敏反应和参与机体抗寄生虫感染。一、IgD 测定及临床意义 （一）测定方法 IgD 的测定方法有放射免疫分析法、乳胶颗粒免疫比浊分析法、酶联免疫吸附试验，其测定原理见有关章节。在临床用得最多的是酶联免疫吸附试验测定 IgD。（二）临床意义 目前 IgD 的生物功能尚未完全阐明，血清中 IgD 升高主要见于妊娠末期、IgD 型骨髓瘤、甲状腺炎和大量吸烟者。IgD 降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肺硅沉着病（矽肺）、细胞毒药物治疗后。二、IgE 测定及临床意义 （一）测定方法 1.总 IgE 的测定方法有化学发光免疫分析法、放射免疫分析法、乳胶颗粒免疫比浊法及酶联免疫吸附试验等，其测定原理见有关章节。在临床上用化学发光免疫分析法和酶联免疫吸附试验测定总 IgE 较为常见。2.特异性 IgE 的检测方法主要有免疫斑点法和酶联免疫吸附试验。商品化的试剂盒提供了多种特异性的变应原，包括食物、吸入以及药物过敏原，利用这些特异性变应原就可以检测到血清中特异性 IgE 抗体。（二）临床意义 1.型变态反应性疾病，如特发性哮喘、特发性皮炎、过敏性鼻炎等 IgE 常升高。2.非变态反应性疾病，如 IgE 骨髓瘤、寄生虫感染等 IgE 升高。3.急性或慢性肝炎、SLE、类风湿关节炎等疾病 IgE 可升高。4.IgE 降低见于原发性无丙种球蛋白血症、肿瘤及化疗药物应用后。尿液及脑脊液 Ig 测定 一、尿液 Ig 测定及临床意义 当机体的免疫功能异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾脏肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。临床上常选用速率散射免疫比浊法测定尿液和血液中的转铁蛋白（TRF）及 IgG 含量，计算选择性蛋白尿指数（SPI），评估肾小球滤过膜破坏程度及观察治疗效果和预后。公式为：SPI=尿 IgG/血清 IgG（尿 TRF/血清 TRF）SPI0.1：表明肾脏有高度选择性地排泌分子量较小的蛋白质，如微小病变型肾病；SPI0.2：表明肾脏是非选择性地排泌分子量较大的蛋白质，如膜性肾病、膜增殖性肾炎与肾病综合征。二、脑脊液 Ig 测定及临床意义 临床上主要通过测定白蛋白商值（QALB），即测定 CSF 中白蛋白（Albcsf）和血清白蛋白（Albs）比值来反映血脑屏障受损程度。公式为：白蛋白商值（Albcsf/Albs）1000 当商值9 时，提示血脑屏障无明显受损。915 为轻度受损，常见于急慢性病毒感染、多发性硬化、神经梅毒、带状疱疹性神经节炎、脑萎缩等神经系统疾病。1533 为中度受损，常见于急性神经疏螺旋体病、条件致病性脑膜炎、吉兰-巴雷综合征等；33100 为重度受损，常见于化脓性脑膜炎、单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等严重细菌感染性疾病。100 为完全破裂。IgG 生成指数 由于免疫球蛋白不仅可以在鞘内局部合成，也可以通过血-脑屏障进入鞘内，因此区分鞘内免疫球蛋白的来源在神经系统疾病的实验室诊断中有着重要的临床意义。经典的计算鞘内免疫球蛋白合成的方法是 IgG生成指数：IgG 生成指数=（IgGCSF/IgGs）/（AlbCSF/AlbS）血清 IgG 亚类测定及临床意义 IgG 有 4 个亚类，即 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。临床常选用操作简单、成本低廉的酶联免疫吸附试验进行测定。1.IgG 亚类的含量随年龄的不同而变化。2.临床上 IgG 亚类缺陷可表现为，反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎等。3.IgA 缺乏症常伴有 IgG2缺陷，某些病毒感染 IgG1、IgG2、IgG3下降显著。肾病综合征、糖尿病患者出现 IgG1下降。4.IgG 亚类异常增高主要见于型变态反应。M 蛋白测定及临床意义 M 蛋白（MP）是 B 淋巴细胞或浆细胞单克隆异常增殖所产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常单克隆免疫球蛋白。临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。一、血清蛋白区带电泳技术 检测 M 蛋白 是检测蛋白质的经典分析方法，方便，费时短，是筛选 M 蛋白的最基本方法，但不能正确判断免疫球蛋白的类型。M 蛋白血症的患者，在蛋白区带电泳中出现狭窄而浓集的蛋白区带，即 M 蛋白带。二、血清免疫球蛋白定量测定 方法：单向琼脂免疫扩散法和免疫比浊法；恶性 M 蛋白血症（恶性单克隆丙种球蛋白血症）血清中常表现出某一类丙种球蛋白显著增高，多在 30g/L以上；良性的血清标本中，多在 20g/L 以下；多克隆丙种球蛋白血症常表现为多种类的 Ig 水平同时升高，并且各类 Ig 升高的幅度不大。三、免疫电泳 免疫电泳（IEP）是区带电泳技术和免疫扩散技术相结合的一种免疫学分析方法。该法是鉴定 M 蛋白的常规方法之一，在区带电泳和 Ig 定量时发现异常疑似 M 蛋白时使用。四、免疫固定电泳 是区带电泳技术与特异性沉淀反应相结合的一种免疫学分析方法，是临床鉴定 M 蛋白最常用的方法，成为单克隆抗体定性和分型鉴定的首选方法。测定时间短、敏感性高、结果直观、易于分析和判定。轻链测定及临床意义 本-周（Bencejones）蛋白测定 本-周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链，检测本-周蛋白对轻链病的诊断是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助。尿标本先用聚乙二醇通过半透膜浓缩后，再与抗轻链血清进行免疫电泳分析。轻链病患者尿中可测得本-周蛋白，但血中反而呈阴性。在某些情况下血中轻链发生聚合，不易从肾脏排出，尿液轻链测定阴性。冷球蛋白的检测 冷球蛋白又称冷免疫球蛋白，是一组在低温下发生沉淀，加温后又复溶的免疫球蛋白。冷球蛋白在-4时发生沉淀，于 37时又复溶解。型：为单克隆冷球蛋白型，最常见为 IgM、IgG。在血中浓度较高，多见于免疫增生性疾病，如多发性骨髓瘤等。型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，最常见的组合为 IgM-IgG。多见于自身免疫性疾病，如类风湿关节炎、干燥综合征等。型：多克隆混合型冷球蛋白，最常见的组合为 IgM-IgG。多见于自身免疫性疾病以及感染性疾病，如传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、链球菌感染后肾小球肾炎、感染性心内膜炎等。冷球蛋白的测定有两种方法：定性测定：血细胞比容管法。定量测定：分光光度法。正确的采血是冷球蛋白检测的关键，宜在体温条件下采集和保存静脉血。单向琼脂扩散试验可用于 Ig 的测定，有关叙述错误的是 A.应选择特异性强、效价高、亲和力高的抗体 B.制板时温度控制在 5060 C.待测样品抗原如果含量高，应稀释后再检测 D.定性检测 Ig，而不能定量检测 E.同一批次抗血清可以使用相同的标准曲线 正确答案D 答案解析单向琼脂扩散试验能定量检测 Ig。人类免疫球蛋白占血浆蛋白总量的 A.5%B.10%C.15%D.20%E.50%正确答案D 答案解析人类免疫球蛋白占血浆蛋白总量的 20%。免疫浊度测定法出现测量误差的最大因素是 A.抗体过量 B.钩状效应 C.环境温度影响 D.加入抗原、抗体的时间 E.光源的强弱和波长的影响 正确答案B 答案解析免疫浊度测定法出现测量误差的最大因素是钩状效应。当待测抗原浓度过高时，过量的抗原可分别同固相抗体和酶标抗体结合而抑制夹心复合物的形成，出现钩状效应（hookeffect），显色降低，严重时可出现假阴性结果。脑脊液中 Ig 浓度依次是 A.IgGIgMIgA B.IgGIgAIgM C.IgMIgAIgG D.IgMIgGIgA E.IgAIgMIgG 正确答案B 答案解析脑脊液中 Ig 浓度依次是 IgGIgAIgM。免疫电泳常采用的抗血清是 A.IgG、IgM、IgA、IgD、IgC B.IgG、IgM、IgA、k、C.IgG、IgA、IgD、k、D.IgG、IgM、IgD、k、E.IgG、IgM、IgA、sIgA、IgC 正确答案B 答案解析免疫电泳常采用的抗血清是 IgG、IgM、IgA、k、。