血球计数板的使用.pdf

1 血球计数板的使用 利用血球计数板在显微镜下可直观、快速计数微生物，由它计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。一、血球计数板的介绍 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成 16 个中方格，而每个中方格又分成 25 个小方格，共 400 小格；另一种是一个大方格分成 25 个中方格，而每个中方格又分成 16 个小方格，总共也是 400 小格。无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的。每一个大方格边长为 1，则每一大方格的面积为 1 2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为 0.1，所以计数室的容积为 0.1 3。其计算方法如下：12516 的计数板计算公式 细胞数/ml=(80 小格内的细胞数/80)40010000稀释倍数 =A/5 25 104 B 2 21625 的计数板计算公式 细胞数/ml=(100 小格内的细胞数/100)40010000稀释倍数 =A/4 16 104 B 二、操作过程 1稀释 将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。2镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。3加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。静置 510 分钟即可计数。4显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有 510 个菌体为宜。若选用 2516 规格的计数板则每个计数室选5 个中方格，可选 4 个角和中央的中格（即 80 个小格），若选用 1625 规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即 100 小格）中的菌体进行计数。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含 3 菌量。5.对每个样品计数三次，取其平均值，计算每 1ml 菌液中所含的酵母菌个数。各中格中菌数 A B 二 室 平均值 菌数/ml 1 2 3 4 5 第一室 第二室 A-五个中方格的总菌数 B-稀释倍数 6清洗血球计数板 血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干。三、注意事项 1、如何稀释？取 1ml 酵母菌培养液加入到盛有 9ml 蒸馏水的试管中，摇匀，再计数；如发现酵母菌的个数仍然过大，则同样再稀释一次，直至每小格中酵母菌的个数介于 5-10，并作记录。2、调节显微镜光线的强弱适当，对于用反光镜采光的显微镜要注意光线不要偏向一边，否则视野中不易看清楚计数室方格线。3、因菌液在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调细螺旋（调焦距长短），方可找全。4、每个样品重复 23 次，若两次差别太大应重测。