第二代测序技术ppt课件.ppt

经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用第二代高通量测序技术简介第二代高通量测序技术简介四大高通量测序平台四大高通量测序平台 Solexa，454(GS-FLX)，SOLiD和和Polonatorn测序原理测序原理 合成法测序合成法测序(Sequencing by Synthesis)连接法测序连接法测序(Sequencing by Ligation)经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用454(GS-FLX)Roche：（：（2005，2007，2008）原理：在原理：在DNA聚合酶、聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光硫酸化酶、荧光素酶素酶和和双磷酸酶双磷酸酶的作用下，将每一个的作用下，将每一个dNTP的的聚合与一次化学发光信号的释放偶联起来，聚合与一次化学发光信号的释放偶联起来，通过检测化学发光信号的有无和强度，达到通过检测化学发光信号的有无和强度，达到实时检测实时检测DNA序列的目的。序列的目的。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用454(GS-FLX)流程流程1、文库制备：基因组、文库制备：基因组DNA/cDNA片段化处理片段化处理至至300-800bp间，经末端修复与特异性接头间，经末端修复与特异性接头连接等修饰后变性处理回收单链的连接等修饰后变性处理回收单链的DNA。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用454(GS-FLX)流程流程2、Emulsion PCR：单链：单链DNA文库被文库被固定固定在在DNA捕获磁珠上，捕获磁珠上，乳化乳化，形成油包水的混合，形成油包水的混合物，每个独特的片断在自己的微反应器里进物，每个独特的片断在自己的微反应器里进行独立的行独立的扩增，扩增，回收纯化；回收纯化；经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用454(GS-FLX)流程流程3、测序反应：携带、测序反应：携带DNA片段的磁珠被放入片段的磁珠被放入PTP板中供测序反应使用。板中供测序反应使用。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用454(GS-FLX)流程流程4、数据分析：、数据分析：GS FLX系统在系统在10小时的运行小时的运行当中可获得当中可获得100余万个读长，读取超过余万个读长，读取超过4-6亿亿个碱基信息个碱基信息 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用Solexa-Illumina Genome Analyzer核心技术：核心技术：“DNA簇簇”和和“可逆性末端终止可逆性末端终止”。原理：将基因组原理：将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的的随机片段附着到光学透明的玻璃表面（即玻璃表面（即Flow cell），这些），这些DNA片段经过延伸片段经过延伸和桥式扩增后，在和桥式扩增后，在Flow cell上形成了数以亿计上形成了数以亿计Cluster，每个，每个Cluster是具有数千份相同模板的单是具有数千份相同模板的单分子簇。然后利用带分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸核苷酸，通过可逆性终止的，通过可逆性终止的SBS（边合成边测序）（边合成边测序）技术对待测的模板技术对待测的模板DNA进行测序。进行测序。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD ABI(Applied Biosystems)：SOLiD(Sequencing by Oligonucleotide Ligation and Detection)原理原理：用连接法测序获得基于：用连接法测序获得基于“双碱基编双碱基编码原理码原理”的的SOLiD颜色编码序列，随后的颜色编码序列，随后的数据分析比较原始颜色序列与转换成颜色数据分析比较原始颜色序列与转换成颜色编码的编码的reference序列，把序列，把SOLiD颜色序颜色序列定位到列定位到reference上，同时校正测序错上，同时校正测序错误，并可结合原始颜色序列的质量信息发误，并可结合原始颜色序列的质量信息发现潜在现潜在SNP位点。位点。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程1、SOLiD基因组文库的构建基因组文库的构建 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程2、油包水、油包水PCR 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程3、含、含DNA模板模板P1磁珠的固定磁珠的固定 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程4、SOLiD双碱基编码原理及测序流程双碱基编码原理及测序流程 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程4、SOLiD双碱基编码原理及测序流程双碱基编码原理及测序流程 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用SOLiD流程流程5.数据分析原理数据分析原理 经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用Polonator 测序原理：测序原理：Polonator系统高质量测序是一种以系统高质量测序是一种以连接连接反应反应进行进行DNA序列分析的技术，该系统采用序列分析的技术，该系统采用结合在结合在磁珠磁珠上单分子上单分子DNA片段簇片段簇为测序模板，为测序模板，以以CY5、Texas Red、CY3、6-FAM四色荧四色荧光标记光标记的的9碱基单链荧光探针混合物进行连续碱基单链荧光探针混合物进行连续的连接反应为基础，对扩增的的连接反应为基础，对扩增的DNA片段进行片段进行大规模高通量测序。大规模高通量测序。经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用Polonator流程流程