实验六胶体金免疫层析技术.pptx

会计学1实验六实验六 胶体金免疫层析技术胶体金免疫层析技术实验目的实验目的u掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用掌握胶体金试纸条诊断技术的原理、使用方法及结果的判定方法及结果的判定第1页/共16页简简 介介 胶胶体体金金试试纸纸条条诊诊断断是是采采用用胶胶体体金金免免疫疫层层析析技技术术研研制制而而成成，该该技技术术是是90年年代代初初在在免免疫疫渗渗滤滤技技术术的的基基础础上上建建立立的的一一种种简简易易快快速速的的免免疫疫学学检检测测技技术术，最最先先用用于于人人绒绒毛毛膜膜促促性性腺腺激激素素（HCG）的的测测定定和和乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒表表面面抗抗原原（HBsAg）等检测。等检测。第2页/共16页胶 体 金（Colloidal gold）是 氯 金 酸（HAuCl4）的水溶胶，利用HAuCl4在还原剂（柠檬酸钠）的作用下，聚合成特定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，故称胶体金。简简 介介第3页/共16页质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗质量好的胶体金：溶液呈红色，胶体金颗粒为球形，大小均一，无棱角。粒为球形，大小均一，无棱角。质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，质量差的胶体金：溶液呈紫色，大小不一，形状各异。形状各异。胶体金的质量判定标准胶体金的质量判定标准简简 介介第4页/共16页胶体金标记的原理：胶体金在碱性条件下带负电荷，与蛋白质分子的正电荷基团藉静电吸引而形成牢固结合。胶 体 金 标 记 技 术（Immunogold labeling technique）是以胶体金作为示踪标记物应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。简简 介介第5页/共16页胶体金试纸条诊断技术的原理胶体金试纸条诊断技术的原理以硝酸纤维素膜为载体，利用了微孔膜的毛细作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，通过抗原抗体结合，并利用胶体金呈现颜色（红色）反应，检测抗原/抗体。最常用的是双抗夹心法检测抗原第6页/共16页胶体金试纸条示意图检测线检测线质检线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜连接垫（胶体金垫）背衬（底板）第7页/共16页测定时将试纸条下端浸入液体标本中，下端吸水材料即吸取液体向上端移动，流经C处时使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移。测 定第8页/共16页若标本中有待测特异抗原，即可与免疫金复合物中的抗体结合，此抗原抗体复合物流至测试区即被固相抗体捕获，在膜上显出红色反应线条（T）。测 定第9页/共16页过剩的免疫金复合物继续前行，至参照区与固相抗小鼠IgG结合（免疫金复合物中的单克隆抗体为小鼠IgG），而显出红色质控线条（R）。测 定第10页/共16页阴性标本则无反应线条，而仅显示质控线条。测 定第11页/共16页胶体金快速诊断技术的特点胶体金快速诊断技术的特点 u简简捷捷快快速速：操操作作简简单单，一一般般只只要要5-10min 就就会会出出结结果果，而而其其它它方方法法如如ELISA需需要要1-2h，PCR 需需要要时间更长。时间更长。u结结果果易易于于判判定定：阴阴、阳阳性性呈呈色色很很明显，肉眼很容易判断。明显，肉眼很容易判断。u特特异异性性好好：因因为为该该技技术术大大多多用用单单克克隆隆抗抗体体标标记记，这这决决定定了了它它具具有有很好的特异性。很好的特异性。第12页/共16页u病病毒毒性性疾疾病病：传传染染性性法法氏氏囊囊病病、禽禽流流感感、新新城城疫疫、犬犬细细小小病病毒毒、猪瘟等。猪瘟等。u寄寄生生虫虫疾疾病病：血血吸吸虫虫病病、旋旋毛毛虫病、囊虫病、恙虫病。虫病、囊虫病、恙虫病。u细细菌菌性性疾疾病病：霍霍乱乱弧弧菌菌、类类鼻鼻疽。疽。胶体金快速诊断技术的应用胶体金快速诊断技术的应用第13页/共16页H5亚亚 型型 AIV尿尿囊囊液液阳阳性性结果结果阴性对照阴性对照阴性对照阴性对照H5 IV细细胞胞毒毒阳阳性性结结果果第14页/共16页1.1.1.1.瘦肉精试纸条检测的原理？瘦肉精试纸条检测的原理？2.2.2.2.早早孕试纸条检测的原理？孕试纸条检测的原理？课 后 思 考第15页/共16页