任务四微生物的分离、纯化、培养技术.ppt

任务四任务四 微生物的分离、纯化、培养技术微生物的分离、纯化、培养技术n了解纯种分离技术的原理了解纯种分离技术的原理n掌握无菌操作和纯种分离技术掌握无菌操作和纯种分离技术微生物纯化、分离的原因微生物纯化、分离的原因n自然界中，微生物都是以自然界中，微生物都是以群居群居的方式存在的的方式存在的n在人为条件下培养的微生物群体称为在人为条件下培养的微生物群体称为培养物培养物(culture)n只有一种微生物的培养物称作只有一种微生物的培养物称作纯培养物纯培养物(pure culture)纯培养的过程纯培养的过程n通过分离、纯化技术从混杂的天然微生物群中通过分离、纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物分离出特定的微生物n接种技术接种技术n无菌操作技术无菌操作技术一、接种技术一、接种技术接种工具接种工具接种和分离工具接种和分离工具1接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 无菌技术无菌技术(aseptic technique)(aseptic technique)n在分离、转接及培养纯培养物时，防止其被其在分离、转接及培养纯培养物时，防止其被其他微生物污染的技术他微生物污染的技术n纯培养物纯培养物 环境环境二、微生物分离纯化技术二、微生物分离纯化技术n分离分离(isolation)：从混杂微生物群体中获得：从混杂微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与纯化。纯化。n用固体培养基分离用固体培养基分离n用液体培养基分离用液体培养基分离n单细胞分离单细胞分离n选择培养分离选择培养分离n二元培养物二元培养物1.利用固体培养基分离利用固体培养基分离原理：原理：n微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体通常是由一个细胞繁殖而成的集合体n因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养1.利用固体培养基分离利用固体培养基分离值得指出的是：值得指出的是：n在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养n因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定n有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到过程和多种特征鉴定才能得到 视频录像 http:/ plate method）先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 10、1 100、1 1000）然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至 45 左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可看出菌落板，保温培养一定时间即可看出菌落如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的细胞繁殖形成的随后随后挑取该单个菌落挑取该单个菌落，或重复以上操作数次或重复以上操作数次，便可，便可得到纯培养得到纯培养倾注平板倾注平板（2）涂布平板法（）涂布平板法（spread plate method）n将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再倒平板，倒平板，易造成某些热敏感菌的死亡易造成某些热敏感菌的死亡n某些好氧菌会在琼脂中间某些好氧菌会在琼脂中间缺氧影响生长缺氧影响生长涂布涂布 vs.倾注倾注(3)平板划平板划线分离法（分离法（streak plate method）(3)平板划平板划线分离法（分离法（streak plate method）连续稀释的过程连续稀释的过程平板划线分离的方法平板划线分离的方法1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法2.2.用液体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养稀释法原理：稀释法原理：n连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物n如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物梯度稀释梯度稀释3.3.单细胞挑取分离法单细胞挑取分离法 4.利用选择培养基分离利用选择培养基分离n选择培养基n富集培养倒平板倒平板无菌操作n在操作过程中人为地排除一切微生物或一切不在操作过程中人为地排除一切微生物或一切不需要的微生物。需要的微生物。无菌操作要点一杀死杀死规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的中的一切微生物一切微生物，使作业系统变成无菌；，使作业系统变成无菌；无菌操作要点二在作业系统与外界的联系之间在作业系统与外界的联系之间隔绝一切微生物隔绝一切微生物穿过穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口,用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）;无菌操作要点三在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统防止不需要的微生物侵入作业系统。作业-4n1、如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养、如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？n2、请问在平板培养细菌为什么要倒平板培养？请问在平板培养细菌为什么要倒平板培养？Any questions?