多聚酶链式反应扩增DNA片段.pptx

课题2.多聚酶链式反应扩增DNA片段人教版高中生物选修一专题五授课教师：安徽省宁国中学 曾妮娜2018.03.13生物一轮复习生物一轮复习考纲要求选修三：基因工程的原理及技术（含PCR技术）生物一轮复习知识点整理Q：你知道什么是PCR吗？PCR是的简称，是常用的手段。多聚酶链式反应体外扩增DNA分子Q：PCR过程用到的生物学原理是什么呢？DNA分子的复制Q：你还记得生物细胞内的DNA分子的复制需要哪些条件吗？生物体内DNA复制需要的条件有：、。此外，由于相关酶的作用特点，DNA分子的复制还需要。模板原料酶能量引物Q：此处的“相关酶”是指什么酶？DNA聚合酶Q：DNA聚合酶的什么特点决定了DNA分子的复制过程需要引物？DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3端延伸DNA链。Q：PCR过程中需要的条件和体内DNA分子复制完全相同吗？生物一轮复习知识点整理细胞内的DNA复制PCR模板酶原料引物过程进行复制的每个DNA分子的两条单链需要扩增的特定DNA片段的两条单链解旋酶、DNA聚合酶等热稳定的DNA聚合酶四种脱氧核苷酸四种脱氧核苷酸RNA片段，复制时合成，使用后除去预先准备好的DNA片段，不切除多起点，边解旋边复制，双向进行双链完全解旋后进行复制，每条链只有一个复制起始位点Q：PCR中，DNA的两条链需要的引物是相同的吗？生物一轮复习知识点整理5335生物一轮复习知识点整理红色区域是需要扩增的目的基因片段：5a链b链3355a链b链335Q：引物应该结合于模板链的哪一侧？35353Q：引物一定要结合在DNA片段的最末端吗？不一定，但是一定要在需要扩增的区域以外Q：两个模板链需要引物片段的序列是相同的吗？是互补吗？Q：引物片段的长度有没有要求？通常为20-30个核苷酸的片段Q：PCR技术中通过什么方法来控制反应过程是解旋、引物结合还是合成子链？温度的控制Q：没有PCR仪能实现PCR的操作吗？Q：PCR的具体操作流程是什么？生物一轮复习知识点整理 PCR 的基本反应步骤的基本反应步骤变性变性95C延伸延伸72C复性复性55CQ：目的？Q：目的？Q：目的？在循环之前，常要进行一次预变性，以便增加。大分子模板DNA彻底变性的概率生物一轮复习知识点整理生物一轮复习知识点整理PCR过程的每一轮循环开始时，上一轮循环的产物也能作为参与反应，并且由引物I延伸而成的DNA单链会与结合，进行DNA的延伸，这样DNA聚合酶只能特异地复制的DNA序列，使这段固定长度的序列呈扩增。引物引物 II两个引物之间指数Q：扩增后的DNA含量如何进行测定呢？DNA在nm的紫外线波段有一段强烈的吸收峰，可以利用DNA的这一特点用（仪器）对DNA含量进行测定。260紫外分光光度计Q：DNA 含量还有其他方法可以用来测定吗？生物一轮复习（2017江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（1）从高表达MT 蛋白的生物组织中提取mRNA，通过_获得_用于PCR扩增。高考真题生物一轮复习（2017江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的_位点。设计引物时需要避免引物之间形成_，而造成引物自连。高考真题生物一轮复习（2017江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（3）图中步骤1代表_，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。高考真题生物一轮复习（2017江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏_的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但_的引物需要设定更高的退火温度。高考真题生物一轮复习（2017江苏高考）金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有_（填序号：升高退火温度 降低退火温度 重新设计引物）。高考真题生物一轮复习高考真题（2011江苏）请回答基因工程方面的有关问题：(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_。在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。生物一轮复习高考真题（2011江苏）请回答基因工程方面的有关问题：(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。第1组：_；第2组：_。生物一轮复习高考真题（2011江苏）请回答基因工程方面的有关问题：(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为_。(4)用限制酶EcoR、Mbo单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1kb 即1000个碱基对)，请在直接在下图的质粒上画出EcoR、Mbo的切割位点。