选修3.1.1.基因工程中的工具酶（一轮复习）.pptx

1.1基中因的工工程具酶什么是基因？什么是基因？基因是具有遗传效应的基因是具有遗传效应的DNADNA片段。片段。DNADNA的基本组成单位是什么？的基本组成单位是什么？脱氧核糖核苷酸脱氧核糖核苷酸脱氧核糖脱氧核糖含氮碱基含氮碱基磷酸基团磷酸基团34521基因基因DNA分子平面图：分子平面图：CAGT脱氧核糖脱氧核糖磷酸基团磷酸基团胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸氢键氢键碱基对碱基对一条脱氧核糖核苷酸链的片段一条脱氧核糖核苷酸链的片段5533分子手术刀分子手术刀限制性核酸内切酶（限制酶）限制性核酸内切酶（限制酶）来源：来源：作用：作用：主要是主要是原核生物原核生物识别识别双链双链DNA分子分子的的特定序列特定序列，在，在特特定的部位定的部位切断切断磷酸磷酸二酯键二酯键ATGCTACG限制酶限制酶解旋酶解旋酶雨滋春树碧连天,天连碧树春滋雨。风送花香红满地,地满红香花送风。5-GAATTC-33-CTTAAG-55-GGGCCC-33-CCCGGG-55-GATC-33-CTAG-5EcoRSmaSau3A5-GATATC-33-CTATAG-5EcoR请写出下列限制酶切割后形成的片断。请写出下列限制酶切割后形成的片断。abcabca、b、c、ab、bca、b、c、ab、bc、ca、abca、b、c、ab、bc、ca、abc、bca、cab下列下列DNA分子酶切后（至少分子酶切后（至少1个位点被切割），可产生多个位点被切割），可产生多少种长度不同的少种长度不同的DNA片段？片段？产生多少种不同的产生多少种不同的DNA片段？片段？5-G3-CCTAGGATCA-3T-55-GG3-CCAAA-3TTT-5请补全下列的回文序列：请补全下列的回文序列：分子缝合针分子缝合针DNA连接酶连接酶E.coliDNA连接酶：连接酶：T4DNA连接酶：连接酶：黏性末端黏性末端黏性末端和平末端黏性末端和平末端ATTCGATAATTCGAAGCTDNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶TAAGCT5-CTGCA3-GC-3ACGTG-55-AC3-TGGT-3CA-5GC-3CG-55-G3-CTGCAG-3ACGTC-55-GC3-CG下列下列DNA序列，哪些可用序列，哪些可用DNA连接酶连接？连接酶连接？5-AC3-TGGT-3CA-5GC-3CG-55-GC3-CG下列下列DNA序列，哪些可用序列，哪些可用DNA连接酶连接？连接酶连接？5-AC3-TGGC-3CG-55-AC3-TG5-GC3-CG5-AC3-TGGT-3CA-5GC-3CG-55-GC3-CGGT-3CA-55-GC3-CGGT-3CA-5GC-3CG-5G-3ACGTC-5G-5ACGTC-3G-3ACGTC-5C-3ACGTG-55-CTGCA3-GC-3ACGTG-55-G3-CTGCAG-3ACGTC-5下列下列DNA序列，哪些可用序列，哪些可用DNA连接酶连接？连接酶连接？5-CTGCA3-G5-CTGCA3-G5-CTGCA3-GC-3ACGTG-55-AC3-TGGC-3CG-55-AC3-TG5-GC3-CG5-AC3-TGGT-3CA-5GC-3CG-55-GC3-CGGT-3CA-55-GC3-CGGT-3CA-5GC-3CG-5连接后形成的连接后形成的DNA是否可以用限制酶再次切开？是否可以用限制酶再次切开？G-3ACGTC-5G-3ACGTC-5C-3ACGTG-55-CTGCA3-G5-CTGCA3-GC-3ACGTG-5连接后形成的连接后形成的DNA是否可以用限制酶再次切开？是否可以用限制酶再次切开？5-GGATCC-33-CCTAGG-55-TGATCA-33-ACTAGT-5BamHBcl5-AAGCTT-33-TTCGAA-5Hind5-GATC-33-CTAG-5Sau3A下面展示了下面展示了4种限制酶的切割位点：种限制酶的切割位点：1.写出限制酶切割后的片断；写出限制酶切割后的片断；2.切割后的片段，哪些可以被切割后的片段，哪些可以被DNA连接酶连接？连接酶连接？3.连接后的片段还能否被下列限制酶再次切开？连接后的片段还能否被下列限制酶再次切开？例：下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图例：下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图、图2中标中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：复标注。请回答下列问题：(1)用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用两种限制两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过酶作用后酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于态态的大肠杆菌。的大肠杆菌。(2)为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加基中添加，平板上长出的菌落，常用，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的鉴定，所用的引物组成为图引物组成为图2中中。(3)若若BamHI酶切的酶切的DNA末端与末端与BclI酶切的酶切的DNA末端连接，连接末端连接，连接部位的部位的6个碱基对序列为个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶，对于该部位，这两种酶（填（填“都能都能”、“都不能都不能”或或“只有一种能只有一种能”）切开。）切开。(4)若用若用Sau3AI切图切图1质粒最多可能获得质粒最多可能获得种大小不同的种大小不同的DNA片段。片段。