【课件】2023届高三一轮复习生物+：微生物的培养与应用课件.pptx

微生物的培养与应用微生物的培养与应用考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养微生物：肉眼难以看清，需要借助微生物：肉眼难以看清，需要借助光学显微镜或电子显微镜光学显微镜或电子显微镜才能观察才能观察到的一切微小生物的总称。到的一切微小生物的总称。微微生生物物原核原核:真核真核非细胞类：非细胞类：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次式体、蓝藻等细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次式体、蓝藻等酵母菌、霉菌等酵母菌、霉菌等真菌：真菌：原生原生生物生物病毒、类病毒、朊病毒等病毒、类病毒、朊病毒等单细胞藻类：衣藻、小球藻等单细胞藻类：衣藻、小球藻等原生动物：草履虫、变形虫等原生动物：草履虫、变形虫等微生物的特征：微生物的特征：种类多；种类多；分布广；分布广；易培养；易培养；个体微小；个体微小；结构简单；结构简单；繁殖快；繁殖快；代谢强；代谢强；易变异。易变异。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制u营养物质的种类：营养物质的种类：人和动物：人和动物：水、无机盐、糖水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、类、脂质、蛋白质、维生素等；维生素等；u营养物质：指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。营养物质：指维持机体生命活动，保证发育、生殖所需的外源物质。植物：植物：矿质元素、碳源矿质元素、碳源（蔗糖）、维生素、（蔗糖）、维生素、生长调节剂等；生长调节剂等；微生物：微生物：碳源、氮源、水和无碳源、氮源、水和无机盐机盐、特殊营养物质、特殊营养物质、特定特定pHpH及及OO2 2的需求。的需求。u培养基培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。繁殖的营养基质。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制u培养基的成分培养基的成分概念概念来源来源作用作用碳源碳源氮源氮源提供碳元素提供碳元素的营养物质的营养物质无机碳源无机碳源：COCO2 2、HCOHCO3 3-等等有机碳源：有机碳源：糖类、脂肪酸、牛糖类、脂肪酸、牛肉膏、石油等肉膏、石油等构成细胞物质和一构成细胞物质和一些代谢产物些代谢产物异养微生物的能源异养微生物的能源无机氮源：无机氮源：N N2 2、NHNH4 4+、NONO3 3-、NHNH3 3等等有机氮源：有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋尿素、牛肉膏、蛋白胨等白胨等提供氮元素提供氮元素的营养物质的营养物质主要用于合成蛋白主要用于合成蛋白质、核酸等质、核酸等考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制水水良好溶剂，参与物质运输；参与细胞内一系列化学反应等良好溶剂，参与物质运输；参与细胞内一系列化学反应等无机盐无机盐参与重要化合物的组成；调节并维持细胞的渗透压；调参与重要化合物的组成；调节并维持细胞的渗透压；调节节PHPH的平衡。的平衡。生长因子生长因子微生物生长所必需的、微量的、自身不能合成或合成很少的微生物生长所必需的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物。有机物。作用：作用：酶和核酸的组成成分酶和核酸的组成成分种类：种类：来源：来源：激素、维生素等激素、维生素等酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、动植物组织提取液等酵母膏、牛肉膏、蛋白胨、动植物组织提取液等概念：概念：考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制u培养基的分类培养基的分类划分标准培养基种类特点应用按物理性质分液体培养基不加凝固剂工业生产（扩大培养）半固体培养基加凝固剂(如琼脂)观察微生物的运动、分类鉴定固体培养基微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保存按化学成分分天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确微生物的分离、鉴定考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制u培养基的分类培养基的分类（3 3）按目的用途分）按目的用途分选择培养基选择培养基在培养基中在培养基中加入或减少某种化学物质加入或减少某种化学物质,以以抑制不抑制不需要的微生物的生长需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长促进所需要的微生物的生长。加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基 -分离分离不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基 -分离分离不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基 -分离分离只加尿素为唯一氮源的培养基只加尿素为唯一氮源的培养基-分离分离只加纤维素为唯一碳源的培养基只加纤维素为唯一碳源的培养基-分离分离鉴别培养基鉴别培养基添加添加某指示剂或化学药剂某指示剂或化学药剂，用于菌种鉴别。，用于菌种鉴别。伊红美蓝培养基鉴别饮用水中是否有大肠杆菌（菌落呈伊红美蓝培养基鉴别饮用水中是否有大肠杆菌（菌落呈深紫色深紫色）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（耐盐细菌）（耐盐细菌）固氮菌固氮菌自养型微生物自养型微生物尿素分解菌尿素分解菌纤维素分解菌纤维素分解菌考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养1、培养基的配制配制培养基时：配制培养基时：目的要明确：目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。类型和配制量。营养要协调：营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比碳氮比4141时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为3131时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pHpH要适宜要适宜：细菌培养基：细菌培养基pHpH中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。细菌细菌pHpH为：为：6.5-7.56.5-7.5；放线菌放线菌pHpH为：为：7.5-8.57.5-8.5；真菌真菌pHpH为：为：5.0-6.05.0-6.0考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养2、无菌技术（1 1）获得纯净培养物的关键是）获得纯净培养物的关键是 ，防止外来防止外来杂菌入侵的保证是杂菌入侵的保证是 。防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵无菌技术无菌技术（2 2）无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有）无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的的方法，主要是方法，主要是消毒和灭菌消毒和灭菌。包括：。包括：超净工作超净工作台台实验操作空间实验操作空间消毒消毒操作者的手、衣着操作者的手、衣着消毒消毒实验用具、器皿、培养基实验用具、器皿、培养基灭菌灭菌实验操作过程，实验操作过程，酒精灯火焰附近进行酒精灯火焰附近进行实验操作时，避免已经灭菌处理的材料用具实验操作时，避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。与周围物品相接触。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养2、无菌技术消毒消毒-使用使用较温和较温和的物理或化学方法的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。（不包括芽孢和孢子）。灭菌灭菌-使用使用强烈的理化因素强烈的理化因素杀死杀死物体内所有的微生物物体内所有的微生物，包括芽孢，包括芽孢和孢子。和孢子。（3 3）消毒和灭菌）消毒和灭菌消毒的方法：消毒的方法：煮沸消毒法煮沸消毒法、巴氏消毒法巴氏消毒法、化学药剂消毒法化学药剂消毒法、紫外线紫外线30min30min消毒消毒灭菌的方法：灭菌的方法：灼烧灭菌灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口：接种环、接种针、试管口、瓶口干热灭菌干热灭菌：玻璃器皿和金属用具：玻璃器皿和金属用具湿热灭菌：高压蒸汽灭菌（湿热灭菌：高压蒸汽灭菌（100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min15-30min ）考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养2、无菌技术判断以下需要哪种消毒或灭菌方法判断以下需要哪种消毒或灭菌方法1.1.日常生活常用日常生活常用 ；对不耐高温的液体，用；对不耐高温的液体，用 。2.2.接种室、接种箱、超净工作台喷洒石炭酸或煤酚皂以增强接种室、接种箱、超净工作台喷洒石炭酸或煤酚皂以增强 效果。效果。3.3.操作者双手用酒精操作者双手用酒精 ；饮用水源用氯气等化学药物；饮用水源用氯气等化学药物 。4.4.表面灭菌和空气灭菌用表面灭菌和空气灭菌用 ；接种环、接种针、试管口；接种环、接种针、试管口 。5.5.玻璃器皿、金属用具用玻璃器皿、金属用具用 。培养基、无菌水用。培养基、无菌水用 。6 6.培养皿用培养皿用 。7.7.实验结束后，使用后的培养基应进行实验结束后，使用后的培养基应进行 处理，才能扔掉。处理，才能扔掉。煮沸消毒法煮沸消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法消毒消毒消毒消毒化学药剂消毒法化学药剂消毒法紫外线消毒紫外线消毒灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌干热灭菌干热灭菌灭菌灭菌做好消毒或灭菌后，避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。为做好消毒或灭菌后，避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。为避免周围环境中微生物的污染，许多操作都应在避免周围环境中微生物的污染，许多操作都应在超净工作台超净工作台并在并在酒酒精灯火焰精灯火焰附近进行。附近进行。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养3、酵母菌的纯培养（1 1）纯培养物及纯培养：）纯培养物及纯培养：由单一个体繁殖所得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物由单一个体繁殖所得的微生物群体称为纯培养物，获得纯培养物的过程称为纯培养。的过程称为纯培养。（2 2）菌落）菌落分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，即菌落。，即菌落。大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。鉴定菌种鉴定菌种的重要依据的重要依据。特征：特征：功能：功能：定义：定义：考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养3、酵母菌的纯培养（3 3）培养基的制备、灭菌、倒平板）培养基的制备、灭菌、倒平板加琼脂的目的加琼脂的目的：作为凝固剂作为凝固剂在灭菌前在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的：用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的：在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时在灭菌时能避免水蒸汽凝结时浸湿棉塞，在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。也起到隔绝空气中杂菌污染的作用。培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能用来倒平板。左右时，才能用来倒平板。估量培养基温度的方法是：估量培养基温度的方法是：用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。倒平板时将锥形瓶的瓶口通过火焰的目的：倒平板时将锥形瓶的瓶口通过火焰的目的：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后，将平板倒置的原因：平板冷凝后，将平板倒置的原因：在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？使培养基表面的水分更好地挥发使培养基表面的水分更好地挥发及及防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。用这个平板培养微生物。在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，可能是哪些原因引在未接种的培养基表面是否有菌落生长？如果有，可能是哪些原因引起的？起的？无菌落生长。否则可以灭菌不彻底，杂菌感染等无菌落生长。否则可以灭菌不彻底，杂菌感染等3、酵母菌的纯培养（3 3）培养基的制备、灭菌、倒平板）培养基的制备、灭菌、倒平板考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。接种环只蘸一次菌液，但要在培养基不同位置连续划线多次。划线首尾不能相接。划线首尾不能相接。划线后，培养皿倒置培养划线后，培养皿倒置培养1224h1224h。1 1 1.1.线条不重叠线条不重叠 2 2 2-3.2-3.从上次的末端开始，从上次的末端开始，交叉交叉2323条线条线3 3 4 4 4.4.最后的划线不能最后的划线不能与第一区相连。与第一区相连。3、酵母菌的纯培养（4 4）接种和分离酵母菌）接种和分离酵母菌平板划线法平板划线法考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养3、酵母菌的纯培养（4 4）接种和分离酵母菌）接种和分离酵母菌平板划线法平板划线法考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养灼烧接种环的目的：灼烧接种环的目的：操作的第一步灼烧接种环是为了操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生避免接种环上可能存在的微生物污染培养物物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单菌落。的数目逐渐减少，以便得到单菌落。划线结束后灼烧接种环，能划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。免细菌污染环境和感染操作者。3、酵母菌的纯培养（4 4）接种和分离酵母菌）接种和分离酵母菌平板划线法平板划线法考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养灼烧接种环后需冷却后再划线：灼烧接种环后需冷却后再划线：以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。总是从上一次划线的末端开始划线的目的：总是从上一次划线的末端开始划线的目的：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。培养基上观察到了不同形态的菌落，说明：培养基上观察到了不同形态的菌落，说明：可能是接种的菌种不纯或无菌操作不规范等。可能是接种的菌种不纯或无菌操作不规范等。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养4、微生物的选择培养选择培养基原理：原理：人为提供人为提供_的条件（包括的条件（包括_、_和和_等），同时等），同时_。有利于目的菌生长有利于目的菌生长抑制或阻止其他微生物的生长抑制或阻止其他微生物的生长营养营养温度温度pHpH举例：举例：（1 1）利用利用改变培养条件改变培养条件进行选择培养。进行选择培养。70708080的高温的高温分离耐高温的水生栖热菌分离耐高温的水生栖热菌使用使用将将pHpH调至酸性调至酸性的培养基的培养基分离耐酸菌分离耐酸菌（2 2）利用利用营养条件营养条件进行选择培养进行选择培养不加碳源（含碳有机物）的培养基不加碳源（含碳有机物）的培养基分离出自养型微生物分离出自养型微生物不加氮源的培养基不加氮源的培养基分离出固氮菌分离出固氮菌（3 3）利用利用添加某种化学物质添加某种化学物质进行选择培养进行选择培养加入青霉素加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养4、微生物的选择培养稀释涂布平板法涂布的涂布的操作应在操作应在酒精灯火焰旁酒精灯火焰旁进行进行;涂布器末端用涂布器末端用体积分数为体积分数为70%70%的酒精消毒的酒精消毒，取出后要，取出后要让多余的让多余的酒精在烧杯中滴尽酒精在烧杯中滴尽，然后，然后再放在再放在火焰上灼烧火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。酒精的烧杯中，以免引燃酒精。稀释涂布平板法既可以获得单菌落，也能对微生物进行计数；稀释涂布平板法既可以获得单菌落，也能对微生物进行计数；平板划线法可根据菌落特点获得某种微生物的单细胞菌落。平板划线法可根据菌落特点获得某种微生物的单细胞菌落。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养4、微生物的选择培养计数方法活菌计数法：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。计算公式：每克样品中的菌落数(CV)MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。注意事项注意事项选择菌落数在选择菌落数在3030030300的平板上进行计数。的平板上进行计数。将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计，经涂布，培养计算出菌落平均数。算出菌落平均数。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低低。考点一考点一 微生物的实验室培养微生物的实验室培养4、微生物的选择培养计数方法血细胞计数法 利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后计算一定体积里样品中微生物的数量。优点：快速直观优点：快速直观缺点：缺点：不能区分死菌与活菌，统计的结果一般是不能区分死菌与活菌，统计的结果一般是活菌数和死菌数的总和活菌数和死菌数的总和；不适于对运动细菌的计数。不适于对运动细菌的计数。血细胞计数板常用于血细胞计数板常用于_等的计数等的计数相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子细菌计数板可对细菌计数板可对_进行观察和计数；进行观察和计数；细菌等较小的细胞细菌等较小的细胞实验原理实验原理 绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成是只有能合成_的微生物才能分解尿的微生物才能分解尿素，利用素，利用_的的_培培养基，可以从土壤中分离出养基，可以从土壤中分离出_的的细菌。细菌。脲酶脲酶以尿素作为唯一氮源以尿素作为唯一氮源选择选择分解尿素分解尿素CO(NHCO(NH2 2)2 2+H+H2 2O O脲酶脲酶2 2NHNH3 3+CO+CO2 2组分组分含量含量KHKH2 2POPO4 41.4g1.4gNaNa2 2HPOHPO4 42.1g2.1gMgSOMgSO4 47H7H2 2O O0.2g0.2g葡萄糖葡萄糖10.0g10.0g尿素尿素1.0g1.0g琼脂琼脂15.0g15.0gH H2 2O O定容至定容至1000mL1000mL考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计实验设计土壤土壤取样取样样品样品稀释稀释涂布平涂布平板板微生物的微生物的观察培养观察培养细菌的细菌的计数计数取样地点要求：取样地点要求：酸碱度接近中性的潮湿土壤酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长细菌适宜在该环境中生长。取样过程：取样过程：铲去铲去表表层层土土（一般（一般3cm3cm左右）左右）。绝大部分绝大部分细菌细菌分布在距地表分布在距地表3 38cm8cm的土壤层的土壤层。注意事项：注意事项：取取土土样样时时用用的的铁铁铲铲和和取取样样袋袋在在使使用用前前都都需需要要灭灭菌菌。操操作作完完成成后，后，一定要洗手一定要洗手。考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计实验设计土壤土壤取样取样样品样品稀释稀释涂布平涂布平板板微生物的微生物的观察培养观察培养细菌的细菌的计数计数测放线菌数：选用测放线菌数：选用10103 3、10104 4、10105 5倍稀释倍稀释测真菌数：选用测真菌数：选用10102 2、10103 3、10104 4倍稀释倍稀释测细菌数：选用测细菌数：选用10104 4、10105 5、10106 6倍稀释倍稀释分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在目的：保证获得菌落数在3030300300之间、适于计数的平板之间、适于计数的平板考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计实验设计土壤土壤取样取样样品样品稀释稀释涂布平涂布平板板微生物的微生物的观察培养观察培养细菌的细菌的计数计数每个倍数的稀释液涂布三个平板（每个倍数的稀释液涂布三个平板（重复重复实验实验）设置设置空白对照，空白对照，涂布等量无菌水涂布等量无菌水要对培养皿作好标记。注明要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养基类型、培养时间、稀释度、培养物培养时间、稀释度、培养物等。等。考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验设计实验设计土壤土壤取样取样样品样品稀释稀释涂布平涂布平板板微生物的微生物的观察培养观察培养细菌的细菌的计数计数放线菌：放线菌：25-2825-28,5-7d,5-7d霉菌：霉菌：25-2825-28,3-4d,3-4d细菌：细菌：30-3730-37,1-2d,1-2d在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。间不足而导致遗漏菌落的数目。考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数可以观察可以观察菌落周围是否出现红色环带，菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越落直径比值越大，说明分解能力越强强。进一步探究进一步探究分解尿素细菌的进一步分解尿素细菌的进一步鉴定鉴定原理：原理：细菌合成的脲酶将尿素分解为细菌合成的脲酶将尿素分解为氨氨，氨会使培养基的，氨会使培养基的碱性增强碱性增强，pHpH升高，因此可以通过升高，因此可以通过检测培养基检测培养基pHpH的变化的变化来判断是否发生了来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。方法：方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂酚红指示剂，培养某种细，培养某种细菌后，如果菌后，如果pHpH升高升高，指示剂将，指示剂将变红变红：液体培养基：液体培养基：可以直接看液体的变色情况；可以直接看液体的变色情况；固体培养基：固体培养基：考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数刚果红纤维素红色复合物纤维素酶纤维素分解菌红色消失，出现透明圈土壤土壤取样取样样品样品稀释稀释样品涂布到鉴别纤维样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上素分解菌的培养基上挑选产生透明挑选产生透明圈的菌落圈的菌落考点二考点二 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数纤维素分解菌的分离纤维素分解菌的分离(2019(2019北京高考北京高考)筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培筛选淀粉分解菌需使用以淀粉为唯一碳源的培养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，养基。接种培养后，若细菌能分解淀粉，培养平板经稀碘液处理，会出现以菌落为中心的透明圈会出现以菌落为中心的透明圈(如图如图)，实验结果见下表。，实验结果见下表。菌种菌落直径：C(mm)透明圈直径：H(mm)H/C细菌5.111.22.2细菌8.113.01.6有关本实验的叙述，错误的是有关本实验的叙述，错误的是()A A培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质培养基除淀粉外还含有氮源等其他营养物质B B筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布筛选分解淀粉的细菌时，菌液应稀释后涂布C C以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外以上两种细菌均不能将淀粉酶分泌至细胞外D DH/CH/C值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异值反映了两种细菌分解淀粉能力的差异C(2019(2019高考全国卷高考全国卷)物质物质W W是一种含氮有机物，会污染土壤。是一种含氮有机物，会污染土壤。W W在在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解中筛选出能降解W W的细菌的细菌(目标菌目标菌)。回答下列问题。回答下列问题。(1)(1)要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是要从土壤中分离目标菌，所用选择培养基中的氮源应该是_。(2)(2)在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都在从土壤中分离目标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落能生长并形成菌落(如图所示如图所示)。如果要得到目标菌，应该选择。如果要得到目标菌，应该选择_菌落进一步纯化，选择的依据是菌落进一步纯化，选择的依据是_。W乙乙乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解乙菌落周围出现透明圈，说明乙菌能降解W W(2019(2019高考全国卷高考全国卷)物质物质W W是一种含氮有机物，会污染土壤。是一种含氮有机物，会污染土壤。W W在在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解中筛选出能降解W W的细菌的细菌(目标菌目标菌)。回答下列问题。回答下列问题。(3)(3)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮气作为氮源，请简要写出实验思路、预期结果和结论，即实验思路、预期结果和结论，即_。将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，将甲、乙菌分别接种在无氮源培养基上，若细菌能生长，则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源则说明该细菌能利用空气中的氮气作为氮源(2019(2019高考全国卷高考全国卷)物质物质W W是一种含氮有机物，会污染土壤。是一种含氮有机物，会污染土壤。W W在在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解中筛选出能降解W W的细菌的细菌(目标菌目标菌)。回答下列问题。回答下列问题。(4)(4)该小组将人工合成的一段该小组将人工合成的一段DNADNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解解W W的酶的酶(酶酶E)E)。为了比较酶。为了比较酶E E与天然酶降解与天然酶降解W W能力的差异，该小组拟进能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。行如下实验，请完善相关内容。在含有一定浓度在含有一定浓度W W的固体培养基上，的固体培养基上，A A处滴加含有酶处滴加含有酶E E的缓冲液，的缓冲液，B B处处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C C处滴加处滴加_，三处滴加量相，三处滴加量相同。同。一段时间后，测量透明圈的直径。若一段时间后，测量透明圈的直径。若C C处没有出现透明圈，说明处没有出现透明圈，说明_；若；若A A、B B处形成的透明圈直径大小相近，说明处形成的透明圈直径大小相近，说明_。缓冲液缓冲液缓冲液不能降解缓冲液不能降解W W酶酶E E与天然酶降解与天然酶降解W W的能力相近的能力相近