常用缓冲溶液配制方法.pdf

-精品-常用缓冲溶液的配制方法 1 甘氨酸盐酸缓冲液（0.05mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 0.2 mol/L HCI，再加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 2.0 2.4 2.6 2.8 50 50 50 50 44.0 32.4 24.2 16.8 3.0 3.2 3.4 3.6 50 50 50 50 11.4 8.2 6.4 5.0 甘氨酸分子量=75.07，0.2 mol/L 甘氨酸溶液含 15.01 克/升。2邻苯二甲酸盐酸缓冲液（0.05 mol/L）X 毫升 0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢钾+0.2 mol/L HCl，再加水稀释到 20 毫升 pH(20)X Y pH(20)X Y 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 5 5 5 5 5 4.070 3.960 3.295 2.642 2.022 3.2 3.4 3.6 3.8 5 5 5 5 1.470 0.990 0.597 0.263 邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23，0.2 mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含 40.85 克/升 3磷酸氢二钠柠檬酸缓冲液 pH 0.2mol/L Na2HPO4（毫升）0.1mol/L 柠檬酸（毫升）pH 0.2mol/L Na2HPO4 （毫升）0.1mol/L 柠檬酸（毫升）2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 5.0 0.40 1.24 2.18 3.17 4.11 4.94 5.70 6.44 7.10 7.71 8.28 8.82 9.35 9.86 10.30 10.60 18.76 17.82 16.83 15.89 15.06 14.30 13.56 12.90 12.29 11.72 11.18 10.65 10.14 9.70 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 10.72 11.15 11.60 12.09 12.63 13.22 13.85 14.55 15.45 16.47 17.39 18.17 18.73 19.15 19.45 9.28 8.85 8.40 7.91 7.37 6.78 6.15 5.45 4.55 3.53 2.61 1.83 1.27 0.85 0.55 Na2HPO4分子量=14.98，0.2 mol/L 溶液为 28.40 克/升。Na2HPO42H2O 分子量=178.05，0.2 mol/L 溶液含 35.01 克/升。C4H2O7H2O 分子量=210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。-精品-4柠檬酸氢氧化钠-盐酸缓冲液 pH 钠离子浓度（mol/L）柠檬酸（克）C6H8O7H2O 氢氧化钠(克)NaOH 97%盐酸（毫升）HCl（浓）最 终 体 积（升）2.2 3.1 3.3 4.3 5.3 5.8 6.5 0.20 0.20 0.20 0.20 0.35 0.45 0.38 210 210 210 210 245 285 266 84 83 83 83 144 186 156 160 116 106 45 68 105 126 10 10 10 10 10 10 10 使用时可以每升中加入 1 克克酚，若最后 pH 值有变化，再用少量 50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。5柠檬酸柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）pH 0.1 mol/L 柠檬酸（毫升）0.1 mol/L 柠檬酸钠（毫升）pH 0.1 mol/L 柠檬酸（毫升）0.1 mol/L 柠檬酸钠（毫升）3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 4.8 18.6 17.2 16.0 14.9 14.0 13.1 12.3 11.4 10.3 9.2 1.4 2.8 4.0 5.1 6.0 6.9 7.7 8.6 9.7 10.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 8.2 7.3 6.4 5.5 4.7 3.8 2.8 2.0 1.4 11.8 12.7 13.6 14.5 15.3 16.2 17.2 18.0 18.6 柠檬酸 C6H8O7H2O：分子量 210.14，0.1 mol/L 溶液为 21.01 克/升。柠檬酸钠 Na3 C6H5O72H2O：分子量 294.12，0.1 mol/L 溶液为 29.41 克/毫升。6乙酸乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L）pH(18)0.2 mol/L NaAc(毫升)0.3 mol/L HAc(毫升)pH(18)0.2 mol/L NaAc(毫升)0.3 mol/L HAc(毫升)2.6 3.8 4.0 4.2 4.4 4.6 0.75 1.20 1.80 2.65 3.70 4.90 9.25 8.80 8.20 7.35 6.30 5.10 4.8 5.0 5.2 5.4 5.6 5.8 5.90 7.00 7.90 8.60 9.10 9.40 4.10 3.00 2.10 1.40 0.90 0.60 Na2Ac3H2O 分子量=136.09，0.2 mol/L 溶液为 27.22 克/升。-精品-7磷酸盐缓冲液（1）磷酸氢二钠磷酸二氢钠缓冲液（0.2）pH 0.2 mol/L Na2HPO4(毫升)0.2 mol/L NaH2PO4(毫升)pH 0.2 mol/L Na2HPO4(毫升)0.2 mol/L NaH2PO4(毫升)5.8 5.9 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 8.0 10.0 12.3 15.0 18.5 22.5 26.5 31.5 37.5 43.5 49.5 55.0 92.0 90.0 87.7 85.0 81.5 77.5 73.5 68.5 62.5 56.5 51.0 45.0 7.0 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 61.0 67.0 72.0 77.0 81.0 84.0 87.0 89.5 91.5 93.0 94.7 39.0 33.0 28.0 23.0 19.0 16.0 13.0 10.5 8.5 7.0 5.3 Na2HPO42H2O 分子量=178.05，0.2 mol/L 溶液为 85.61 克/升。Na2HPO412H2O 分子量=358.14，0.2 mol/L 溶液为 71.628 克/升。NaH2PO42H2O 分子量=156.01，0.2 mol/L 溶液为 31.202 克/升。磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个 pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4：pKa12.12，pKa27.21；Na2HPO4：pKa17.21，pKa212.32 配酸性缓冲液：用 NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH68，配碱性缓冲液：用 Na2HPO4，pH1012。用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为 SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸盐缓冲液的优点为：容易配制成各种浓度的缓冲液；适用的 pH 范围宽；pH 受温度的影响小；缓冲液稀释后 pH 变化小，如稀释 10 倍后 pH 的变化小于 0.1。其缺点为：易与常见的钙 Ca2+离子、镁 Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。（2）磷酸氢二钠磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）pH mol/L/15Na2HPO4(毫升)mol/L/15KH2PO4(毫升)pH mol/L/15Na2HPO4(毫升)mol/L/15KH2PO4(毫升)4.92 0.10 9.90 7.17 7.00 3.00-精品-5.29 5.91 6.24 6.47 6.64 6.81 6.98 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 9.50 9.00 8.00 7.00 6.00 5.00 4.00 7.38 7.73 8.04 8.34 8.67 8.18 8.00 9.00 9.50 9.75 9.90 10.00 2.00 1.00 0.50 0.25 0.10 0 Na2HPO42H2O 分子量=178.05，1/15M 溶液为 11.876 克/升。KH2PO4分子量=136.09，1/15M 溶液为 9.078 克/升。8磷酸二氢钾氢氧化钠缓冲液（0.05M）X 毫升 0.2M K2PO4+Y 毫升 0.2N NaOH 加水稀释至 29 毫升 pH(20)X(毫升)Y（毫升）pH(20)X(毫升)Y（毫升）5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 5 5 5 5 5 5 0.372 0.570 0.860 1.260 1.780 2.365 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 5 5 5 5 5 5 2.963 3.500 3.950 4.280 4.520 4.680 9巴比妥钠-盐酸缓冲液（18）pH 0.04M 巴比妥钠溶液 0.2V 盐酸 pH 0.04M巴比妥钠溶液(毫升)0.2N 盐酸(毫升)6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 8.2 100 100 100 100 100 100 100 100 18.4 17.8 16.7 15.3 13.4 11.47 9.39 7.21 8.4 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 9.6 100 100 100 100 100 100 100 100 5.21 3.82 2.52 1.65 1.13 0.70 0.35 巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M 溶液为 8.25 克/升 10Tris盐酸缓冲液（0.05M，25）50 毫升 0.1M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与 X 毫升 0.1N 盐酸混匀后，加水稀释至 100 毫升。pH X(毫升)pH X(毫升)7.10 7.20 7.30 7.40 7.50 7.60 7.70 45.7 44.7 43.4 42.0 40.3 38.5 36.6 8.10 8.20 8.30 8.40 8.50 8.60 8.70 26.2 22.9 19.9 17.2 14.7 12.4 10.3-精品-7.80 7.90 8.00 34.5 32.0 29.2 8.80 8.90 8.5 7.0 三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OH C HOCH2 NH2 分子量=121.14;0.1M 溶液为 12.114 克/升。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。11硼酸硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根）pH 0.05M硼 砂（毫升）0.2M 硼酸（毫升）pH 0.05M硼 砂（毫升）0.2M 硼酸（毫升）7.4 7.6 7.8 8.0 1.0 1.5 2.0 3.0 9.0 8.5 8.0 7.0 8.2 8.4 8.7 9.0 3.5 4.5 6.0 8.0 6.5 5.5 4.0 2.0 硼砂 Na2B4O710H2O,分子量=381.37;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含 19.07 克/升。硼酸 H3BO3,分子量=61.83,0.2M 溶液为 12.37 克/升。硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。12甘氨酸氢氧化钠缓冲液（0.05M）X 毫升 0.2M 甘氨酸+Y 毫升 0.2NnaOH 加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 8.6 8.8 9.0 9.2 9.4 50 50 50 50 50 4.0 6.0 8.8 12.0 16.8 9.6 9.8 10.0 10.4 10.6 50 50 50 50 50 22.4 27.2 32.0 38.6 45.5 甘氨酸分子量=75.07;0.2M 溶液含 15.01 克/升。13硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M 硼酸根）X 毫升 0.05M 硼砂+Y 毫升 0.2NNaOH 加水稀释至 200 毫升 pH X Y pH X Y 9.3 9.4 9.6 50 50 50 6.0 11.0 23.0 9.8 10.0 10.1 50 50 50 34.0 43.0 46.0 硼砂 Na2B4O710H2O,分子量=381.43;0.05M 溶液为 19.07 克/升。14碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）Ca2+、Mg2+存在时不得使用 pH 0.1MNa2CO3(毫升)0.1MN2HCO3(毫升)20 37 9.16 9.40 9.51 8.77 9.12 9.40 1 2 3 9 8 7-精品-9.78 9.90 10.14 10.28 10.53 10.83 9.50 9.72 9.90 10.08 10.28 10.57 4 5 6 7 8 9 6 5 4 3 2 1 Na2CO210H2O 分子量=286.2;0.1M 溶液为 28.62 克/升。N2HCO3分子量=84.0;0.1M 溶液为 8.40 克/升。15“PBS”缓冲液 pH 7.6 7.4 7.2 7.0 H2O NaCl Na2HPO4 NaH2PO4 1000 8.5 2.2 0.1 1000 8.5 2.2 0.2 1000 8.5 2.2 0.3 100ml 8.5g 2.2g 0.4g -精品-pH 标准缓冲溶液 Standard pH Buffer Solutions 名称(Name)配 制 (Compounding way)不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 草酸盐标准缓冲溶液 cKH3(C2O4)22H2O为 0.05mol/L。称取12.71g 四草酸钾KH3(C2O4)22H2O溶于无二氧化碳的水中，稀释至 1000ml 1.67 1.67 1.67 1.67 1.68 1.68 1.69 1.69 1.69 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -1.70 1.71 1.72 1.72 1.74 1.77 1.79 1.81 -酒石酸盐标准缓冲溶液 在 25时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾(KHC4H4O6)，并剧烈振摇至成饱和溶液 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 -3.56 3.55 3.55 3.55 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -3.55 3.55 3.55 3.56 3.58 3.61 3.65 3.67 -苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液 c(C6H4CO2HCO2K)为0.05mol/L，称取于(115.05.0)干燥 23h 的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.21g，溶于无 CO2的蒸馏水，并稀释至1000ml （注：可用于酸度计校准）不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.01 4.01 4.02 4.04 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -4.05 4.06 4.08 4.09 4.13 4.16 4.21 4.23 -磷酸盐标准缓冲溶液 分别称取在(115.05.0)干燥23h的磷酸氢二钠（Na2HPO4）(353001)g 和磷酸二氢钾（KH2PO4）(339001)g，溶于预先煮沸过 1530min 并迅速冷却的不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 6.98 6.95 6.92 6.90 6.88 6.86 6.85 6.84 6.84 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -精品-蒸馏水中，并稀释至1000ml（注：可用于酸度计校准）6.83 6.83 6.83 6.84 6.85 6.86 6.88 6.89 -硼酸盐标准缓冲溶液 c(Na2B4O710H2O)称取硼砂（Na2B4O710H2O）(380 001)g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过 1530min 并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。存放时要防止空气中的CO2的进入（注：可用于酸度计校准）不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 9.46 9.40 9.33 9.27 9.22 9.18 9.14 9.10 9.06 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -9.04 9.01 8.99 8.96 8.92 8.89 8.85 8.83 -氢氧化钙标准缓冲溶液 在 25，用无二氧化碳的蒸馏水制备氢氧化钙的饱和溶液。氢氧化钙溶液的浓度c1/2Ca(OH)2应在（0.04000.0412）mol/L。氢氧化钙溶液的浓度可以酚红为指示剂，用盐酸标准溶液c(HCl)=0.1mol/L滴定测出。存放时要防止空气中的二氧化碳的进入。出现混浊应弃去重新配制 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)0 5 10 15 20 25 30 35 40 13.42 13.21 13.00 12.81 12.63 12.45 12.30 12.14 11.98 不同温度时的 pH 值(pH in different temperatures)45 50 55 60 70 80 90 95 -11.84 11.71 11.57 11.45 -注：为保证 pH 值的准确度，上述标准缓冲溶液必须使用 pH 基准试剂配制。-精品-常用 pH 缓冲溶液的配制和 pH 值 Preparation and pH Values of Common pH Buffer Solutions 序号(No.)溶液名称 (Solution name)配制方法 (Preparation)pH 值(pH value)1 氯化钾-盐酸 13.0 ml 0.2 mol/L HCl 与 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 混合均匀后，加水稀释至 100 ml 1.7 2 氨基乙酸-盐酸 在 500 ml 水中溶解氨基乙酸 150 g，加 480 ml浓盐酸，再加水稀释至 1L 2.3 3 一氯乙酸-氢氧化钠 在 200 ml 水中溶解 2 g 一氯乙酸后，加 40 g NaOH，溶解完全后再加水稀释至 1 L 2.8 4 邻苯二甲酸氢钾-盐酸 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与6.0 ml 0.1 mol/L HCl 混合均匀，加水稀释至 100 ml 3.6 5 邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的邻苯二甲酸氢钾溶液与17.5 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至100 ml 4.8 6 六亚甲基四胺-盐酸 在 200 ml 水中溶解六亚甲基四胺 40 g，加浓HCl 10 ml，再加水稀释至 1 L 5.4 7 磷酸二氢钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的磷酸二氢钾与 23.6 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 6.8 8 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 4.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 8.0 9 氯化铵-氨水 把 0.1 mol/L 氯化铵与 0.1 mol/L 氨水以 2：1比例混合均匀 9.1 10 硼酸-氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L 的硼酸-氯化钾与 43.9 ml 0.1 mol/L NaOH混合均匀，加水稀释至100 ml 10.0 11 氨基乙酸-氯化钠-氢氧化钠 把 49.0 ml 0.1 mol/L 氨基乙酸-氯化钠与 51.0 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀 11.6 12 磷酸氢二钠-氢氧化钠 把 50.0 ml 0.05 mol/L Na2HPO4与 26.9 ml 0.1 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 12.0 13 氯化钾-氢氧化钠 把 25.0 ml 0.2 mol/L KCl 与 66.0 ml 0.2 mol/L NaOH 混合均匀，加水稀释至 100 ml 13.0