GE离子交换层析柱5516.pdf
GE 离子交换层析柱 protocol 5ml（举例子）Preparation 1.Buffer:（pH 根据蛋白的 pI 进行调整，pH 尽量远离 pI。pHpI,过 Q 柱；pHpI,过 S 柱）A:50mM Tris-HCl B:50mM Tris-HCl 1M NaCl 过滤除杂质，4静置过夜除气泡。2.Protein:用 滤器过滤除质；或者分装于 EP 管，14000rpm，4离心 20min，去除 沉淀。3.Prepare enough tubes 有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!柱子在仪器上时，无论何时均要限压!Procedure 1 打开仪器总开关，电脑。检查：泵的探头是否放入纯水中。洗泵：Manual-pump-pump basic wash-A on,B on-insert-execute 洗系统：Manual-pump-flow-10ml/min-insert-execute Manual-other-End time-volume-40 ml 2 安装柱子 给流速：Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute(仪器显示系统压力为*Mpa)限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+*)Mpa-insert-execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压)装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。3 清洗柱子 限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+*)Mpa-insert-execute 给流速：Manual-pump-flow-1ml/min-insert-execute（低流速下装柱子）Manual-other-End time-volume-10 ml（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗 以上。CV：柱体积，其中 Hitrap Q HP5ml 的 CV 是 5ml）停流速：End 装溶液：将 A 泵放入 buffer A,将 B 泵放入 buffer B。（必须在零流速下操作）限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+*)Mpa-insert-execute 低盐洗：Manual-pump-gradient-0%B-insert-execute Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute 清洗至基线走平（大约需要 20ml）高盐洗：Manual-pump-gradient-100%B-insert-execute Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute 清洗至基线走到平 低 盐 洗：Manual-pump-gradient-0%B-insert-execute Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute 清洗至基线走平 停流速：End 4 上样品 选择合适的上样环，例如 5ml loop.用纯水清洗 loop 三次，再用 buffer A 清洗 loop 三次，赶走气泡；同时清洗上样口。将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入 loop。（切忌吸入气泡）5 运行程序 File-设定的程序-show detail-确认无误-START。特别注意更改压力，上 样量大小。6 清洗柱子（同 3）限压力（勿忘）-低盐洗-高盐洗-低盐洗 最后还要用水洗柱子。停流速：End 装溶液：将 A 泵，B 泵用水清洗后，放入纯水中。（必须在零流速下操作）水洗：Manual-pumpgr adient-0%B-insert-execute Manual-pump-flow-3ml/min-insert-execute 清洗 至基线 走平 7 卸 柱子 限压力：Manual-Alarms-Alarms pressure-+*)Mpa-insert-execute 是 Hitrap Q 柱子的最大限压，*：系统压力)给流速：Manual-pump-flow-1ml/min-insert-execute 卸柱子：先卸下面 ，再卸上面，卸下的柱子置于 4保存。（低流速下卸柱子）
