实验九碘淀粉比色法测定血清淀粉酶.ppt

关于实验九碘淀粉比色法测定血清淀粉酶现在学习的是第1页，共11页原理uu血清（或血浆）中-淀粉酶催化淀粉分子中-1，4糖苷键水解，产生葡萄糖、麦芽糖及含有-1，6糖苷键支链的糊精。在底物过量的条件下，反应后加入碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物，其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较，从而推算出淀粉酶的活力单位。现在学习的是第2页，共11页uu试剂uu操作步骤uu计算uu参考值现在学习的是第3页，共11页试 剂uu1、0.4mg/ml底物缓冲液：4冰箱保存6个月。uu2、0.1mol/L碘贮备液：4避光保存6个月。uu0.01mol/L碘应用液的配制:将碘贮备液:蒸馏水=19稀释，现用现配4避光保存。现在学习的是第4页，共11页操作步骤混匀，混匀，660nm660nm波长，波长，1cm1cm光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。光径，蒸馏水调零，测各管吸光度。*注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将注：不同样本批量测试前需要做预实验，确定最佳取样浓度，将 (空白空白OD-OD-测定测定OD)OD)控制在控制在0.050.1500.050.150之间之间 现在学习的是第5页，共11页uu1、单位定义：100ml血清（浆）中的AMS，在37与底物作用15分钟，水解5mg淀粉为1个单位。uu2、公式：计 算现在学习的是第6页，共11页样本最佳取样浓度摸索 uu根据不同动物血清及组织之间的差异，最好是在批量实验之前做个预试以确定最佳取样浓度。例1：取大鼠血清用生理盐水稀释成不同浓度（2倍、4倍、8倍、16倍、32倍、64倍、128倍、256倍），取样0.1ml进行检测 现在学习的是第7页，共11页临床意义uu淀粉酶可通过肾小球滤过。流行性胰腺炎，特别是急性胰腺炎时，血和尿中的AMY显著增高。急性胰腺炎发病后812h血清AMY开始升高，1224h达高峰，25d下降至正常。如超过500U有意义，达350U时应怀疑有此病。uu尿中AMY约于发病后1224小时开始升高，下降也比血清AMY慢，因此在急性胰腺炎后期测定尿AMY更有价值。现在学习的是第8页，共11页注意事项uu酶活性在400U以下时，与底物的水解量成线性。如测定管吸光度小于空白管吸光度一半时，应加大血清稀释倍数或减少稀释血清加入量，测定结果再乘以稀释倍数。uu草酸盐、拘橼酸盐、EDTA-Na2及氟化钠对AMY活性有抑制作用，肝素无抑制作用。uu唾液含高浓度淀粉酶应防止带入。uu淀粉产品不同，其空白吸光度可有明显差异，一般空白吸光度应在0.40以上。现在学习的是第9页，共11页注意事项uu缓冲淀粉溶液若出现混浊或絮状物，表示缓冲淀粉溶液受污染或变质，不能再用，应重新配制。uu本法适用于其他体液淀粉酶的测定。尿液先作20倍稀释后测定。现在学习的是第10页，共11页感感谢谢大大家家观观看看现在学习的是第11页，共11页