《生物化学实验》教学大纲(06版).pdf

生物化学实验教学大纲（06 版）一、课程基本信息 1.课程中文名称：生物化学实验 2.课程类别：必修 3.适用专业：生物科学/园林 4.课程地位：专业基础课 5.总学时：36 学时 6.总学分：7.先修课程：无机及分析化学与有机化学 二、课程目标 生物化学实验 是生物学科本科生的一门专业基础课。在当今有了惊人进展的生物学科中，生物化学是最活跃的分支学科之一。促使生物化学迅速进展的重要因素之一是新技术的开发。随着生物化学的实验方法日趋专门化与复杂化，牵涉到生物化学实验工作的领域也越来越多。生物化学实验已经成为生物技术领域内最基本的实验操作技能。通过本课程的学习使学生熟悉“生物大分子的分离与纯化方法，糖、蛋白质、核酸及要紧次生代谢产物的定性、定量与有关生物化学性质的分析技术，酶活性测定、动力学分析等”知识与技能，为专业课的学习与专业技能的培训奠定良好的基础，并通过严格的实验要求与管理，诱导与培养学生将所学的知识与技能用于今后的社会实践及创新的思维方法与动手能力，培养严谨的、实事求是作风与与人合作精神，使他们成为团结合作，务实、创新的专门人才。三、课程内容 序号 实验项目名称 学时 实验 性质 实验 类型 要紧设备 配置 1 血糖的斐林法测定 3 必开 设计 分光光度计 2 种子粗脂肪的提取 3 选开 设计 索氏提取器 3 氨基酸分离双向层析法 3 必开 验证 层析缸 4 样品中总氮量的测定微量凯氏定氮法 3 必开 设计 凯氏定氮蒸馏器 5 蛋白质的性质蛋白质及氨基酸的呈色反应 3 选开 验证 试管 6 蛋白质的性质蛋白质的沉淀反应 3 选开 验证 试管 7 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 3 必开 验证 醋酸纤维薄膜、层析缸 8 酶的特性 3 必开 验证 水浴、试管 9 植物组织中过氧化氢酶活力测定 3 选开 设计 酸式滴定管 10 底物浓度对酶促反应速度的影响米氏常数的测定 3 必开 验证 碱式滴定管 11 酶的提取、分离、纯化及其活力测定 3 选开 综合 分光光度计 12 核酸浓度测定-紫外线（UV）汲取法 3 必开 设计 紫外分光光度计 13 核酸的增色效应 3 选开 设计 水浴、紫外分光光度计 14 氨基移换反应血液中转氨酶活力的测定 3 必开 设计 分光光度计 15 维生素 C 含量的测定 3 必开 设计 紫外分光光度计 16 实验设计及操作考试 3 必开 综合 实验性质：必开/选开；实验类型：验证、设计、综合、研究。四、教学方法 进入本课程的学生必需严格遵守实验室规则与纪律，认真对待每一次实验，做好实验课前的预习，完成预习报告；认真推敲、认真操作、细心观察，真实记录实验结果并完成实验报告。鼓励学生对已有实验提出质疑，按照自己的思路设计实验或者参与实验教改，以活跃气氛，启迪思维。将利用黑板与多媒体教学手段讲解实验的基本原理、方法及有关仪器的使用方法。五、课程考核（黑体小四号）考查 六、教材与参考书（黑体小四号）1、教材：王秀奇、秦淑媛等编 基础生物化学实验高等教育出版社，2003.6 2、要紧参考书：（1）戴玉锦主编 生物化学（实验部分）高等教育出版社，1992.10（2）赵永芳主编 生物化学技术原理及应用科学出版社，2002.7 七、其它 序号 实验项目、实验目的、实验要求与实验内容 1 实验项目 血糖的斐林法测定 实验目的 掌握 Folin-Wu 法测定血糖含量的原理与方法。实验要求 测定血糖含量 实验内容 无蛋白血滤液的制备；血糖的测定 2 实验项目 种子粗脂肪的提取 实验目的 熟悉鉴别种子品质的指标及方法 实验要求 掌握测定脂肪的含量的方法 实验内容 用索氏提取瓶提取种子中的脂肪；计算含量 3 实验项目 氨基酸分离双向层析法 实验目的 掌握分配层析分离技术的原理。实验要求 用双向层析法分析混合氨基酸样品的成分。实验内容 以滤纸及其结合水作为固定相，以有机溶剂作为流淌相，分离混合氨基酸样品，并鉴定其成分。4 实验项目 样品中总氮量的测定 实验目的 掌握凯氏定氮仪的使用方法及凯氏定氮法测定样品总氮量的原理。实验要求 以鱼粉为样品，用凯氏定氮法测定总氮量。实验内容 用鱼粉作实验样品，浓 H2SO4 消化鱼粉，将有机氮转化成无机氮；用凯氏定氮仪测出该样品中的总氮量。5 实验项目 蛋白质的性质蛋白质及氨基酸的呈色反应 实验目的 熟悉蛋白质与某些氨基酸的呈色反应原理 实验要求 掌握几种鉴定蛋白质与氨基酸的方法。实验内容 双缩脲反应；茚三酮反应；黄色反应；考马斯亮蓝反应 6 实验项目 蛋白质的性质蛋白质的沉淀反应 实验目的 熟悉蛋白质变性与沉淀的关系 实验要求 掌握沉淀蛋白质的几种方法 实验内容 蛋白质的盐析；重金属离子沉淀蛋白质；某些有机酸沉淀蛋白质；有机溶剂沉淀蛋白质；乙醇引起的变性与沉淀 7 实验项目 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 实验目的 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，熟悉电泳技术的基本原理 实验要求 掌握测定人血清中各类蛋白质的相对含量的方法。实验内容 仪器与薄膜的准备；电泳；定量 8 实验项目 酶的特性 实验目的 熟悉酶的特性 实验要求 熟悉影响酶活力的因素 实验内容 酶的专一性；温度对酶活力的影响；PH 对酶活力的影响；酶的活化及抑制 9 实验项目 植物组织中过氧化氢酶活力测定 实验目的 熟悉过氧化氢酶在生物体中的作用原理 实验要求 掌握酶活力测定的方法 实验内容 过氧化氢酶活力测定 10 实验项目 底物浓度对酶促反应速度的影响米氏常数的测定 实验目的 熟悉底物浓度对酶促反应的影响。实验要求 掌握测定米氏常数 Km 的原理与方法。实验内容 酪蛋白在不一致情况下反应速度 11 实验项目 酶的提取、分离、纯化及其活力测定 实验目的 熟悉酶的制备过程与如何保证酶活力 实验要求 掌握酶制备每一步所需基本实验技术，熟悉其原理。实验内容 酶的提取；硫酸铵分级沉淀；蛋白质含量的测定；酶活性的测定 12 实验项目 核酸浓度测定-紫外线（UV）汲取法 实验目的 熟悉紫外线（UV）测定核酸浓度的原理；进一步熟悉紫外分光光度计的使用方法。实验要求 以 RNA 或者 DNA 干粉为材料，测定核酸浓度 实验内容 检测样品在 260nm 波长处的 A 值。13 实验项目 核酸的增色效应 实验目的 验证核酸的紫外汲取特性及增色效应 实验要求 测出天然核酸及变性核酸的吸光值 实验内容 使 DNA 变性，分别测天然 DNA 与变性 DNA 的吸光值 14 实验项目 氨基移换反应血液中转氨酶活力的测定 实验目的 验证氨基转移反应谷丙转氨酶作用原理 实验要求 掌握酶活力测定的方法。实验内容 标准曲线的绘制；酶活力的测定；计算酶活力 15 实验项目 维生素 C 的定量测定 实验目的 掌握样品中 VC 的测定原理及方法。实验要求 用分光光度法测定样品中 VC 的含量。实验内容 以桔皮作实验样品或者以柑桔作实验样品，直接榨汁，离心后的清液，过滤后作样品液。用分光光度法测定样品液中 VC 的含量。16 实验项目 实验设计及操作考试 实验目的 作为学生本实验课成绩评定的根据。实验要求 数据准确度高，平行组数据之间相对平均偏差在 1%以内。实验内容 完成指定实验样品指定实验项目的测定。2006 年 2 月 8 日