基因工程复习.pdf

1/81/8 1、用酚氯仿抽提 时，通常要在氯仿或酚氯仿中加少许异戊醇，这是因为异戊醇可以 防止气泡 ；分离 时要使用金属离子螯合剂，如 和柠檬酸钠等，其目的是 抑制了 。2、按照质粒拷贝数的多少，质粒可以分为 严谨型质粒 。和 松弛型质粒 。3、噬菌体在感染大肠杆菌以后，可以进入 也可以进入 。如果其基因组 通过专一性重组整合到宿主染色体中，则其进入 融源状态 。；它也可以选择进入 融菌状态 ，大量复制并组装子代噬菌体颗粒。4、与普通的 的不同之处在于 2和 3双脱氧 ，它们可以在 聚合酶的作用下，通过其 5 掺入到正在增长的 链中，导致链延伸反应终止。5、聚合酶是 聚合酶 经蛋白酶裂解而从全酶中除去 53外切酶 活性的多肽大片断，而其他活性保持不变。1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞 时，具有两方面的作用，分别为 变性剂 和 抑制了 。2、能进行自我复制，大多数为 双 链 闭合环状 分子。3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫 内切酶 ，另一种叫 修饰酶 。4、反转录酶来自 或 ，即依赖于 的 聚合酶，它有 聚合酶 活性，但无 外切酶 活性。5、末端转移酶来源于 小牛胸腺 ，是存在于前淋巴细胞及分化早期的2/82/8 类淋巴样细胞内的一种不寻常的 聚合酶，在 二价阳离子 存在下，末端转移酶催化 加于 分子的 3 羟基端。得分 三、选择题(每小题 1.5分，共 15分)1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）。A、既可以作用于双链，又可以作用于单链；B、只能作用于单链；C、只能作用于双链；D、只能作用于。2、下列哪一种酶作用时需要引物(B)。A、末端转移酶；B、反转录酶；C、连接酶；D、限制酶。3、被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能(D)。A、蛋白质（如）同 结合；B、有外切核酸酶污染；C、酶失活；D、酶切条件不适合。4、以下各项中不是 反应所必须的是（D ）。A、模板和引物；B、；C、酶和；D、甘油。5、关于 技术的叙述，下列哪项是错误的？（B）A、以 复制为基础而建立起来的技术；B、利用 技术可完全无误地扩增基因；C、反应体系需模板、一对引物、4 种 、耐热 聚合酶和缓冲溶液；D、以变性-退火-延伸为一周期。6、以下不是表达载体所必须的条件是（C）。3/83/8 A、必须具备很强的启动子；B、必须具备很强的终止子；C、启动子需要受控制；D、所产生的 必须具有翻译的起始信号。7、以下不属于核酸探针的是（D）。A、探针；B、基因组探针；C、探针；D、抗体。8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（B）。A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶；D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。9、从细胞或组织中分离 时常用蔗糖的作用是(C )。A、抑制核酸酶的活性；B、加速蛋白质的变性；C、保护，防止断裂；D、有利于细胞破碎。10、氯霉素的工作原理为（D）。A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。得分 三、选择题(每小题 1.5分，共 15分)1、限制性内切核酸酶可以特异性地识别（C）。4/84/8 A、特定的三联密码；B、双链 的特定碱基对；C、双链 的特定碱基序列；D、单链 的特定碱基序列。2、在切口平移方法标记 探针时只能使用（B）。A、酶；B、聚合酶；C、聚合酶；D、聚合酶。3、在下列进行 部分酶切的条件中，控制哪一项最好（C）。A、反应体积；B、酶反应温度；C、反应时间；D、酶量。4、扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（B）。A、退火温度过低；B、退火温度过高；C、浓度过高；D、循环次数过多。5、以下不属于 的应用的为（D）。A、随机扩增多态性（）；B、扩增片段长度多态性（）；C、；D、S1 酶作图。6、18 与 19 的区别在于（B）。A、二者的选择标记不同；B、二者的多克隆位点方向相反；C、18 无 基因；D、19 无 基因。7、有关 序列自动化测定的不正确叙述是（D）。A、用荧光代替了同位素标记；B、激光扫描分析代替人工读序 基；C、本原理与手工测序相同；D、不再需要引物。8、下列哪一项不是质粒载体必备的基本特征(D )。A、可以独立复制；B、有选择标记；C、有多克隆位点；D、含。5/85/8 9、在分离 过程造成 分子断裂的因素很多，下列说法中哪一项是不正确的（C）。A、核酸酶的降解；B、化学降解；C、保存液中未加一滴氯仿；D、物理剪切。10、氨苄青霉素的工作原理为（A ）。A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。1、酚是蛋白变性剂，用酚抽提细胞 时，具有两方面的作用，分别为 变性剂 和 抑制了 。2、能进行自我复制，大多数为 双 链 闭合环状 分子。3、寄主控制的限制与修饰现象由两种酶活性配合完成的，一种叫 内切酶 ，另一种叫 修饰酶 。4、反转录酶来自 或 ，即依赖于 的 聚合酶，它有 聚合酶 活性，但无 外切酶 活性。5、末端转移酶来源于 小牛胸腺 ，是存在于前淋巴细胞及分化早期的类淋巴样细胞内的一种不寻常的 聚合酶，在 二价阳离子 存在下，末端转移酶催化 加于 分子的 3 羟基端。得分 三、选择题(每小题 1.5分，共 15分)6/86/8 1、迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（C）。A、既可以作用于双链，又可以作用于单链；B、只能作用于单链；C、只能作用于双链；D、只能作用于。2、下列哪一种酶作用时需要引物(B)。A、末端转移酶；B、反转录酶；C、连接酶；D、限制酶。3、被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能(D)。A、蛋白质（如）同 结合；B、有外切核酸酶污染；C、酶失活；D、酶切条件不适合。4、以下各项中不是 反应所必须的是（D ）。A、模板和引物；B、；C、酶和；D、甘油。5、关于 技术的叙述，下列哪项是错误的？（B）A、以 复制为基础而建立起来的技术；B、利用 技术可完全无误地扩增基因；C、反应体系需模板、一对引物、4 种 、耐热 聚合酶和缓冲溶液；D、以变性-退火-延伸为一周期。6、以下不是表达载体所必须的条件是（C）。A、必须具备很强的启动子；B、必须具备很强的终止子；C、启动子需要受控制；D、所产生的 必须具有翻译的起始信号。7、以下不属于核酸探针的是（D）。7/87/8 A、探针；B、基因组探针；C、探针；D、抗体。8、关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（B）。A、在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点；B、在不同的宿主中具有不同的复制机制；C、在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶；D、在不同的宿主中具有不同的复制速率。9、从细胞或组织中分离 时常用蔗糖的作用是(C )。A、抑制核酸酶的活性；B、加速蛋白质的变性；C、保护，防止断裂；D、有利于细胞破碎。10、氯霉素的工作原理为（D）。A、可以抑制细胞壁肽聚糖的合成；B、可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成；C、可以抑制核糖体的转位；D、可以与核糖 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成。1、星活性：高浓度的酶、高浓度的甘油、低离子强度、极端值等，会使一些核酸内切酶的识别和切割序列发生低特异性，即 现象。2、插入型载体：只具有一个可供外源插入的克隆位点。3、反转录：在逆转录酶的作用下、以为模板合成互补的，再以为模板进行反应。4、感受态：受体细胞经过一些特殊方法（如：2，等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源的载体分子通8/88/8 过的感受态细胞。5、考斯质粒：考斯质粒是一类人工构建的含有 序列和质粒复制子的特殊类型的载体 6、片段：用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌聚合酶 I 可以切掉 N 端的53外切酶活性部分，就成为。7、置换型载体：两个多克隆位点区以反向重复形式分别位于的非必须区两端，用酶切后，可以将中间的区段切下来，与用同样酶切成的外源片断置换。8、引物：人工合成的单链小片断，碱基顺序分别与所要扩增的模板双链的 5端相同。9、转化：大肠杆菌捕获质粒的过程。10、噬菌粒：噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体。