血液及其成分的保存运输和领发精选PPT.ppt

关于血液及其成分的保存运输和领发第1页，讲稿共98张，创作于星期三全血在保存时会发生什么样的变化？全血在保存时会发生什么样的变化？全血保存主要需要解决哪些问题？全血保存主要需要解决哪些问题？第2页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化(一一)血浆的变化血浆的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535血浆血浆pHpHACDACD7.00 7.00 6.79 6.79 6.73 6.73 6.71 6.71 CPDCPD7.20 7.20 7.00 7.00 6.89 6.89 6.84 6.84 第3页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化(一一)全血的变化全血的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535血浆钠离子血浆钠离子(mmol)(mmol)ACDACD172172158158150150146146CPDCPD175175163163155155152152血浆钾离子血浆钾离子(mmol)(mmol)ACDACD1010202029293535CPDCPD3.93.911.911.917.217.22121CPDA-1CPDA-127.327.3血浆血浆Hb(mg/L)Hb(mg/L)ACDACD100100220220350350530530CPDCPD17177878125125191191CPDA-1CPDA-18282461461第4页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化血小板血小板白细胞白细胞5 5天之后逐渐死亡天之后逐渐死亡24h24h之后功能逐渐丧失之后功能逐渐丧失第5页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化不稳定的凝血因子不稳定的凝血因子活性逐渐下降活性逐渐下降第6页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液在贮存中的变化血液在贮存中的变化红细胞红细胞膜蛋白、脂质发生变化，钾离子降低，钠、钙膜蛋白、脂质发生变化，钾离子降低，钠、钙离子升高。离子升高。双凹形变成球形或桑椹形，脆性增加，易双凹形变成球形或桑椹形，脆性增加，易发性溶血。发性溶血。第7页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化红细胞红细胞的变化的变化项目项目保存液保存液保存天数保存天数0 07 7141421213535ATP(%)ATP(%)CPDCPD10010096968383CPDA-1CPDA-110010096968383707057572,3-DPG2,3-DPGACDACD100100606023231010CPDCPD100100999980804444CPDA-1CPDA-11001009999808044445 5红细胞存活率红细胞存活率(%)(%)ACDACD100100989885857070CPDCPD100100989885858080CPDA-1CPDA-11001009898909085857979第8页，讲稿共98张，创作于星期三成熟红细胞不仅无细胞核，而且也无线粒体、成熟红细胞不仅无细胞核，而且也无线粒体、核蛋白体等细胞器，不能进行核酸和蛋白质核蛋白体等细胞器，不能进行核酸和蛋白质的生物合成，也不能进行有氧氧化，不能利的生物合成，也不能进行有氧氧化，不能利用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。用脂肪酸。血糖是其唯一的能源。红细胞携带红细胞携带O O2 2,自身不消耗自身不消耗O O2 2,其内电解质以其内电解质以钾最多、钠含量较少钾最多、钠含量较少,与血浆的钾钠含量相与血浆的钾钠含量相反。红细胞内反。红细胞内CaCa离子浓度低于血浆。离子浓度低于血浆。红细胞的特点红细胞的特点第9页，讲稿共98张，创作于星期三主要途径主要途径磷酸戊糖旁路磷酸戊糖旁路葡萄糖酵解葡萄糖酵解合成合成ATP：合成合成2,3-DPG（2,3-二磷酸甘油酸二磷酸甘油酸）控制静脉侧氧气的释放和维持控制静脉侧氧气的释放和维持Hb二二价铁，进行氧气的传递价铁，进行氧气的传递通过磷酸戊糖通路代谢，为红细胞提供另一种还原力，在红细胞氧化还原系统中发挥重要作用，具有通过磷酸戊糖通路代谢，为红细胞提供另一种还原力，在红细胞氧化还原系统中发挥重要作用，具有保护膜蛋白、血红蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，还原高铁血红蛋白等多种功能。保护膜蛋白、血红蛋白及酶蛋白的琉基不被氧化，还原高铁血红蛋白等多种功能。葡萄糖葡萄糖磷酸化、变构、裂解磷酸化、变构、裂解2分子乳酸分子乳酸 2ATP红细胞能量代谢红细胞能量代谢第10页，讲稿共98张，创作于星期三第11页，讲稿共98张，创作于星期三成熟红细胞的糖酵解特点：成熟红细胞的糖酵解特点：红细胞糖酵解的特点是在酵解过程中有相当数量的红细胞糖酵解的特点是在酵解过程中有相当数量的1.3-1.3-DPGDPG转变成转变成2.3-DPG2.3-DPG，后者再脱磷酸变成，后者再脱磷酸变成3-PG3-PG，并进一步酵解产，并进一步酵解产生乳酸。此生乳酸。此2.3-DPG2.3-DPG侧支循环称侧支循环称2.3-DPG2.3-DPG支路，产生支路的原支路，产生支路的原因是红细胞中存在因是红细胞中存在DPGDPG变位酶和变位酶和2.3-DPG2.3-DPG磷酸酶，前者活性大磷酸酶，前者活性大于后者，故可使于后者，故可使2.3-DPG2.3-DPG堆积起来。堆积起来。2.3-DPG2.3-DPG生成的主要生理意义在于降低生成的主要生理意义在于降低HbHb对氧的亲和力，在组对氧的亲和力，在组织氧分压较低的情况下，织氧分压较低的情况下，HbO2HbO2放出氧适应组织需要放出氧适应组织需要。第12页，讲稿共98张，创作于星期三血红蛋白与氧亲和性增加血红蛋白与氧亲和性增加2,3-DPG2,3-DPG含量减少含量减少氧解离曲线向左移氧解离曲线向左移组织氧供给不足组织氧供给不足P50是指血红蛋白氧饱和度为是指血红蛋白氧饱和度为50%时的血氧分压，可以反映时的血氧分压，可以反映Hb与与O2的亲和力。的亲和力。P50增大，氧离曲线右移，表示增大，氧离曲线右移，表示Hb与与O2的亲和力小，的亲和力小，P50减小，氧离曲线左移，说明亲和减小，氧离曲线左移，说明亲和力大。力大。2,3-DPG的生理意义的生理意义第13页，讲稿共98张，创作于星期三1.1.维持维持NaNa+-K-K-ATP ATP酶酶(钠泵钠泵)功能。通过功能。通过ATP ATP 提供能量提供能量,维维持持K+K+的浓度在红细胞内比血浆高的浓度在红细胞内比血浆高5 5倍。所以倍。所以,红细胞红细胞产生的产生的ATPATP主要用于维持红细胞膜主要用于维持红细胞膜NaNa+-K-K-ATP ATP酶酶的酶酶的正常功能正常功能,以保证红细胞的离子平衡。以保证红细胞的离子平衡。在保存过程中在保存过程中,红细胞膜和膜蛋白的损伤以及葡萄糖的红细胞膜和膜蛋白的损伤以及葡萄糖的持续消耗引起的持续消耗引起的ATPATP供能减少都会影响供能减少都会影响NaNa+-K-K-ATP ATP酶酶功能的正常发挥功能的正常发挥,导致细胞内导致细胞内K+K+的逸出的逸出,从而使血从而使血浆浆K+K+浓度不断升高浓度不断升高。红细胞红细胞ATPATP的功能的功能（红细胞内糖代谢的意义）（红细胞内糖代谢的意义）第14页，讲稿共98张，创作于星期三2 2、维持红细胞膜上钙泵一的正常运转，将红细胞内、维持红细胞膜上钙泵一的正常运转，将红细胞内的的CaCa2+2+泵入血浆以维持红细胞内的低钙状态。正常情泵入血浆以维持红细胞内的低钙状态。正常情况下，红细胞内的况下，红细胞内的CaCa2+2+浓度很低（浓度很低（20umol/L)20umol/L)。，而。，而血浆血浆CaCa2+2+的浓度为的浓度为2-3mmol/L2-3mmol/L。血浆内钙离子会被动扩。血浆内钙离子会被动扩散进入红细胞。缺乏散进入红细胞。缺乏ATPATP时，钙泵不能正常运行，钙时，钙泵不能正常运行，钙将聚集并沉积于红细胞膜上，使膜失去柔韧性而趋将聚集并沉积于红细胞膜上，使膜失去柔韧性而趋于僵硬，使红细胞易被破坏于僵硬，使红细胞易被破坏红细胞红细胞ATPATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）的功能（红细胞内糖代谢的意义）第15页，讲稿共98张，创作于星期三3.3.维持红细胞膜上脂质与血浆脂蛋白中的脂质进行交维持红细胞膜上脂质与血浆脂蛋白中的脂质进行交换。红细胞膜的脂质处于不断更新中，此过程需消换。红细胞膜的脂质处于不断更新中，此过程需消耗耗ATPATP。缺乏。缺乏ATPATP时，脂质更新受阻，红细胞可时，脂质更新受阻，红细胞可塑性降低，易于破坏塑性降低，易于破坏4.4.少量用于谷胱甘肽的生物合成。少量用于谷胱甘肽的生物合成。5.5.用于葡萄糖的活化，启动糖酵解过程用于葡萄糖的活化，启动糖酵解过程。红细胞红细胞ATPATP的功能（红细胞内糖代谢的意义）的功能（红细胞内糖代谢的意义）第16页，讲稿共98张，创作于星期三红细胞内的谷胱甘肽代谢红细胞内的谷胱甘肽代谢红细胞内谷胱甘肽含量很高(2mmol/L)，而且几乎全是还原型的，主要生理功能是对抗氧化剂对巯基的氧化。第17页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 第18页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 对于需要短时间内纠正载氧能力的患者和特别经受不住对于需要短时间内纠正载氧能力的患者和特别经受不住组织缺氧的患者输入组织缺氧的患者输入2,3-DPG2,3-DPG水平低的血是无益的，应该给水平低的血是无益的，应该给这些患者输注保存期不超过这些患者输注保存期不超过710710天的血液。天的血液。第19页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 二、血液保存需要解决的问题二、血液保存需要解决的问题需解决的问题需解决的问题 血液凝固血液凝固 红细胞溶血红细胞溶血放氧能力下降放氧能力下降 抗凝剂抗凝剂红细胞营养代谢红细胞营养代谢抗溶血剂抗溶血剂改善放氧改善放氧保存容器保存容器第20页，讲稿共98张，创作于星期三红细胞保存液考虑的几个方面红细胞保存液考虑的几个方面1.保护细胞的能量产生机构，使其维持保护细胞的能量产生机构，使其维持正常结构和功能正常结构和功能2.尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消尽量减慢细胞代谢速度，减少能量消耗并供应能量物质。耗并供应能量物质。3.其他：抗氧化剂的作用？改善保存容其他：抗氧化剂的作用？改善保存容器？器？第21页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 常用血液保存液的成分：常用血液保存液的成分：1、抗凝剂抗凝剂血液抗凝剂是防止血液凝固和红细胞被破坏的化学物质血液抗凝剂是防止血液凝固和红细胞被破坏的化学物质 常用的抗凝剂有哪些？常用的抗凝剂有哪些？第22页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分血液保存液的成分(一一)血液抗凝剂血液抗凝剂 枸橼酸钠枸橼酸钠 肝素肝素 EDTA2Na EDTA2Na 原理原理CaThrombinCa应用应用实验室检测血液标本的抗凝及外实验室检测血液标本的抗凝及外科体外循环手术的抗凝科体外循环手术的抗凝实验室检测血液标本的抗凝实验室检测血液标本的抗凝全血及血液成分保存的抗凝剂全血及血液成分保存的抗凝剂第23页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 葡萄糖的在血液中浓度应为葡萄糖的在血液中浓度应为0.5%l%，以，以0.5%为宜为宜 枸橼酸钠枸橼酸钠+葡萄糖葡萄糖 葡萄糖用于维持红细胞代谢，延葡萄糖用于维持红细胞代谢，延长红细胞的保存时间长红细胞的保存时间血液保存液的成分：血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢、提供红细胞的能量代谢葡萄糖葡萄糖第24页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 腺嘌呤腺嘌呤提高提高ATPATP水平和活性的另一办法就是在保存液中加入少量水平和活性的另一办法就是在保存液中加入少量腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤磷酸腺苷（磷酸腺苷（AMPAMP）磷酸化磷酸化ATPATP血液保存液的成分：血液保存液的成分：2、提供红细胞的能量代谢、提供红细胞的能量代谢第25页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：3、抗溶血剂抗溶血剂目前国际上使用较多的是甘露醇，它的用量很小，一般在目前国际上使用较多的是甘露醇，它的用量很小，一般在1 1以下。以下。蔗糖蔗糖 山梨醇山梨醇甘露醇甘露醇具有缓解红细胞溶血的功能和具有缓解红细胞溶血的功能和加固细胞膜的作用，而不影响加固细胞膜的作用，而不影响红细胞代谢红细胞代谢第26页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧能力ACDACD或或CPDCPD血液保存到血液保存到l l周和周和2 2周后，其红细胞放氧能力均降周后，其红细胞放氧能力均降到到50%50%，对于即刻需要纠正缺氧的患者，输注保存时间长，对于即刻需要纠正缺氧的患者，输注保存时间长的血液是不适宜的。的血液是不适宜的。第27页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液的成分：血液保存液的成分：4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧能力血红蛋白的解离度血红蛋白的解离度 红细胞的放氧能力红细胞的放氧能力 影响因素：影响因素：COCO2 2分压、分压、O O2 2分压、分压、pHpH和和2,3-DPG2,3-DPG含量及其生成有关酶系有关含量及其生成有关酶系有关第28页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 一、全血在一、全血在(42)(42)时的保存时的保存 4、改善红细胞的放氧能力改善红细胞的放氧能力解决的方法：解决的方法：1 1、保存液中加、保存液中加NaHCONaHCO3 3，所产生的所产生的C0C02 2，可由内在的，可由内在的Ca(OH)Ca(OH)2 2来消除，避来消除，避免免pHpH降低，有利于降低，有利于2,3-DPG2,3-DPG的合成的合成2 2、加磷酸二羟丙酮，可以增加、加磷酸二羟丙酮，可以增加2,3-DPG2,3-DPG含量。含量。3 3、加丙酮酸盐、通过辅酶、加丙酮酸盐、通过辅酶系统增加系统增加1,3-1,3-二磷酸甘油酸（二磷酸甘油酸（1,3-DPG1,3-DPG），然后变成），然后变成2,3-DPG2,3-DPG。4 4、加维生素、加维生素C C，增加还原力，进而维持有关酶的活性。，增加还原力，进而维持有关酶的活性。第29页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 全血在全血在(42)(42)时的保存时的保存 保存温度保存温度低温保存低温保存排放整齐排放整齐红细胞代谢缓慢，乳酸生成速度下降，红细胞代谢缓慢，乳酸生成速度下降，pHpH下降下降速度也变缓慢。速度也变缓慢。维持红细胞正常代谢，血袋要排放整齐，避免重维持红细胞正常代谢，血袋要排放整齐，避免重叠堆积。叠堆积。第30页，讲稿共98张，创作于星期三温度对红细胞保存的影响温度对红细胞保存的影响6 6 以上时以上时,无法保证血液成分的活性和有效性。高于无法保证血液成分的活性和有效性。高于10 10 红细胞破坏增加红细胞破坏增加,10,10 以上超过以上超过30 min30 min游离血红蛋白游离血红蛋白的含量逐渐增加的含量逐渐增加,pH,pH下降下降,血钾浓度也逐渐上升。血钾浓度也逐渐上升。保存温度低于下限保存温度低于下限22时时,红细胞可能溶解破裂红细胞可能溶解破裂,输给患者输给患者可能造成输血不良反应。可能造成输血不良反应。储存温度储存温度6 6 可最大限度地抑制血液中的细菌生长。可最大限度地抑制血液中的细菌生长。在不正确的条件下储存在不正确的条件下储存30 min 30 min 以上的血液有发生细菌污染和以上的血液有发生细菌污染和(或或)细胞功能丧失的可能细胞功能丧失的可能第31页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 一、全血在一、全血在(42)(42)时的保存时的保存 保存容器保存容器聚乙烯烃袋聚乙烯烃袋聚氯乙烯（聚氯乙烯（PVC)PVC)袋袋全血、红细胞等的保存全血、红细胞等的保存血小板的保存血小板的保存第32页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 血液保存液血液保存液 ACDACD保养液保养液（枸櫞酸盐（枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸）枸橼酸）pH5.03pH5.03 21 21天天 CPDCPD保养液保养液（枸櫞酸盐（枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸枸橼酸-磷酸盐）磷酸盐）pH5.63pH5.63 21 21天天CPDACPDA保养液保养液(枸櫞酸盐枸櫞酸盐-葡萄糖葡萄糖-枸橼酸枸橼酸-磷酸盐磷酸盐-腺嘌呤腺嘌呤)pH5.63 35pH5.63 35天天加入磷酸盐加入磷酸盐加入腺嘌呤加入腺嘌呤第33页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 二、血液保存液二、血液保存液 第34页，讲稿共98张，创作于星期三第一节第一节 全血的保存全血的保存 三、血液在贮存中的变化三、血液在贮存中的变化(二二)贮存期（贮存期（shelf life）全血，聚氯乙烯塑料袋，全血，聚氯乙烯塑料袋，44条件下贮存：条件下贮存：ACDACD或或CPDCPD保存液：贮存期为保存液：贮存期为2121天天CPDA-1CPDA-1保存液：贮存期为保存液：贮存期为3535天天第35页，讲稿共98张，创作于星期三 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 一、浓缩红细胞保存一、浓缩红细胞保存44保存保存保存液是全血保存液保存液是全血保存液从采血日起，与相应的保存液的储存期一致从采血日起，与相应的保存液的储存期一致第36页，讲稿共98张，创作于星期三 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存浓缩红细胞浓缩红细胞剩余营养物质少剩余营养物质少黏稠黏稠贮存中易发生溶血贮存中易发生溶血第37页，讲稿共98张，创作于星期三 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存1 1、浓缩红细胞加羟乙基淀粉（分子量、浓缩红细胞加羟乙基淀粉（分子量3 3万）溶液在万）溶液在(42)(42)贮存贮存可保存可保存1414天。天。2 2、浓缩红细胞加磷酸腺嘌呤及庆大霉素的新维代浆血，在、浓缩红细胞加磷酸腺嘌呤及庆大霉素的新维代浆血，在(42)(42)可保存可保存3535天。天。(一一)含胶体的红细胞悬液（胶体代浆血）含胶体的红细胞悬液（胶体代浆血）第38页，讲稿共98张，创作于星期三 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存(二二)晶体盐红细胞悬液（晶体盐代浆血）晶体盐红细胞悬液（晶体盐代浆血）添加剂添加剂成分成分保存期保存期备注备注生理盐水生理盐水24d24dSAGSAGNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、腺嘌呤、葡萄糖35d35dSAGMSAGMNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇35d35d甘露醇抗溶血剂甘露醇抗溶血剂SAGSSAGSNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖、腺嘌呤、葡萄糖、蔗糖35d35d更低溶血率更低溶血率MAPMAPNaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸盐、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、磷酸盐35d35d补充抗凝补充抗凝低渗低渗NH4ClNH4ClNH4ClNH4Cl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸橼酸盐、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、枸橼酸盐120d120d输注前需洗涤，临输注前需洗涤，临床未使用床未使用SAGMSAGM麦芽糖麦芽糖NaClNaCl、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖、腺嘌呤、葡萄糖、甘露醇、麦芽糖12w12w五联袋，每五联袋，每4 4周更周更换保存液换保存液第39页，讲稿共98张，创作于星期三目前还不能断定高水平的目前还不能断定高水平的ATPATP是否为氯化是否为氯化氨的作用氨的作用,有关理论也有待于进一步研有关理论也有待于进一步研究。但作者深信新溶液的保存作用究。但作者深信新溶液的保存作用,且且有可能是氨的存在是基于这种溶液的非有可能是氨的存在是基于这种溶液的非渗透性低渗的原因并得以维持渗透性低渗的原因并得以维持ATPATP 的的含量和延长红细胞的贮存期含量和延长红细胞的贮存期。第40页，讲稿共98张，创作于星期三 第二节第二节 红细胞的保存红细胞的保存 二、添加剂红细胞保存二、添加剂红细胞保存(三三)红细胞复苏液红细胞复苏液复苏液（丙酮酸盐、肌苷、葡萄糖、磷酸盐、腺嘌呤及复苏液（丙酮酸盐、肌苷、葡萄糖、磷酸盐、腺嘌呤及NaCl NaCl）加入浓缩红细胞加入浓缩红细胞3737保温保温1 1小时小时红细胞复苏：红细胞复苏：ATPATP和和2,3-DPG2,3-DPG恢复到正常水平恢复到正常水平输注前要去除复苏液输注前要去除复苏液第41页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用鉴定血液应在充分的自然光线或日光灯下进行（必要时可鉴定血液应在充分的自然光线或日光灯下进行（必要时可用放大镜检查）用放大镜检查）第42页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血液流入袋内多呈暗红色，有时呈鲜红色血液流入袋内多呈暗红色，有时呈鲜红色血浆呈草黄色或淡黄色者为多见血浆呈草黄色或淡黄色者为多见分层分层红细胞层呈暗红色红细胞层呈暗红色白膜层白膜层分层界面清晰分层界面清晰第43页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血浆层内不应有肉眼可见的血块、絮状物或漂浮物。血浆层内不应有肉眼可见的血块、絮状物或漂浮物。有时出现不同程度的均匀乳黄色或乳白色脂肪颗粒样漂浮物，有时出现不同程度的均匀乳黄色或乳白色脂肪颗粒样漂浮物，在在3737加温时易溶解呈透明状加温时易溶解呈透明状若细菌污染则加热后不透明。若细菌污染则加热后不透明。第44页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察白膜层白膜层(buffy coat)(buffy coat)，荷叶状、放射波浪状、雪花状、龟裂状等荷叶状、放射波浪状、雪花状、龟裂状等第45页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察红细胞层暗红色不含肉眼可见的血凝块或其他异常物质。红细胞层暗红色不含肉眼可见的血凝块或其他异常物质。如果有气泡：如果有气泡：1 1周后逐渐消失周后逐渐消失 正常正常在保存中如气泡日渐增多，则有污染产气杆菌的可能。在保存中如气泡日渐增多，则有污染产气杆菌的可能。第46页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用一、正常血的肉眼观察一、正常血的肉眼观察血液发出前，要仔细检查，观察是否有红细胞微小凝块，即冷血液发出前，要仔细检查，观察是否有红细胞微小凝块，即冷凝集现象。凝集现象。冷凝集的血输用前加温，一般冷凝集的血输用前加温，一般37 51037 510分钟分钟经保温的血液若有溶血发生则应放弃。经保温的血液若有溶血发生则应放弃。第47页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察一般库存血红细胞为暗红色，如果颜色变成暗紫色（高锰酸一般库存血红细胞为暗红色，如果颜色变成暗紫色（高锰酸钾溶液颜色），则常常是细菌污染造成红细胞溶血的结果。钾溶液颜色），则常常是细菌污染造成红细胞溶血的结果。这种血不能输用，必须进行细菌培养。这种血不能输用，必须进行细菌培养。(一一)血液颜色变化血液颜色变化第48页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察溶血：溶血：发生溶血的初期，血浆层底部首先变为红色或白细胞层出现玫发生溶血的初期，血浆层底部首先变为红色或白细胞层出现玫瑰色的小环，这些现象是溶血初期的特征。瑰色的小环，这些现象是溶血初期的特征。溶血加重后，红色血浆部分则越来越多，并向上部扩展，溶血加重后，红色血浆部分则越来越多，并向上部扩展，最后全部血浆变为红色。最后全部血浆变为红色。(二二)血浆层与红细胞层分界不清血浆层与红细胞层分界不清第49页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察抗凝不佳：抗凝不佳：形成肉眼见到的小凝块，严重时可形成整个大块形成肉眼见到的小凝块，严重时可形成整个大块血凝块往往沉降在血细胞层内，可使整齐的表面变成凹凸血凝块往往沉降在血细胞层内，可使整齐的表面变成凹凸不平。不平。(三三)大量血块存在大量血块存在第50页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察库存血亦可能发生大小不等的纤维蛋白絮状凝块，漂浮于血库存血亦可能发生大小不等的纤维蛋白絮状凝块，漂浮于血浆层表面或悬浮在血浆层中。浆层表面或悬浮在血浆层中。多量、大块的血凝块或纤维蛋白块的存在，均表明血液质量多量、大块的血凝块或纤维蛋白块的存在，均表明血液质量不佳，不仅输血困难，也可能发生输血反应。不佳，不仅输血困难，也可能发生输血反应。原来血液没有凝块，保存后产生了血凝块，则应怀疑可能是细菌污原来血液没有凝块，保存后产生了血凝块，则应怀疑可能是细菌污染所致。染所致。(三三)大量血块存在大量血块存在第51页，讲稿共98张，创作于星期三第52页，讲稿共98张，创作于星期三第三节第三节 保存血的肉眼观察和临床应用保存血的肉眼观察和临床应用二、异常血的肉眼观察二、异常血的肉眼观察乳糜：血浆内含过多脂肪。乳糜：血浆内含过多脂肪。库存血如发生血浆明胶化现象，可能细菌污染，不能发出库存血如发生血浆明胶化现象，可能细菌污染，不能发出使用。使用。(四四)血浆层呈乳糜或明胶化血浆层呈乳糜或明胶化第53页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 血液的冷冻保存研究开始于血液的冷冻保存研究开始于2020世纪世纪4040年代年代19491949年年PolgePolge和和SmithSmith等人发现甘油对牛精子的冷冻保存有保护等人发现甘油对牛精子的冷冻保存有保护作用，从中得到启示作用，从中得到启示第二年，第二年，SmithSmith应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功应用甘油作保护剂冷冻红细胞获得成功其后，血液冷冻保存的研究迅速发展，但是由于没能解决去除防冻其后，血液冷冻保存的研究迅速发展，但是由于没能解决去除防冻保护剂的问题，临床尚未能得到广泛应用。保护剂的问题，临床尚未能得到广泛应用。第54页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 19561956年，年，TullisTullis应用应用CohnCohn分离器将防冻剂甘油去除，从而使冷冻分离器将防冻剂甘油去除，从而使冷冻红细胞成功地应用于临床。红细胞成功地应用于临床。19631963年，年，HugginsHuggins发现红细胞在糖溶液中有可逆性的聚集反应，发现红细胞在糖溶液中有可逆性的聚集反应，利用此反应原理，可用糖液洗涤法去除防冻保护剂利用此反应原理，可用糖液洗涤法去除防冻保护剂甘油。甘油。MerymanMeryman等人利用不同浓度梯度的氯化钠洗涤红细胞去除防冻等人利用不同浓度梯度的氯化钠洗涤红细胞去除防冻剂剂第55页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制低温损伤机制低温损伤机制第56页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制相变温度区间：相变温度区间：细胞在冷冻或复溶过程中，发生液相和固相转变的温度区细胞在冷冻或复溶过程中，发生液相和固相转变的温度区间间在相变过程中，通常伴随吸热或者放热反应，以及体积的改在相变过程中，通常伴随吸热或者放热反应，以及体积的改变变第57页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制降温过程的低温损伤：降温过程的低温损伤：来自于降温、复温过程中必须经过的一个温度区间，即来自于降温、复温过程中必须经过的一个温度区间，即15 15 至至60 60 之间。之间。该温度区间对细胞具有杀伤性。该温度区间对细胞具有杀伤性。第58页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(一一)盐变性学说盐变性学说 慢速冷冻细胞损伤的主要原因：慢速冷冻细胞损伤的主要原因：LovelockLovelock等人提出，细胞外水结冰时，细胞收缩、脱水等人提出，细胞外水结冰时，细胞收缩、脱水使细胞内外产生的高浓度电解质，作用于细胞膜，引起使细胞内外产生的高浓度电解质，作用于细胞膜，引起脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失，增加了细胞脂蛋白复合物的变性和部分类脂质的丢失，增加了细胞对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔，冰融对阳离子的通透性，并使细胞膜上形成一些小孔，冰融化时水进入细胞内引起渗透休克化时水进入细胞内引起渗透休克第59页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(二二)冰晶的机械作用冰晶的机械作用快速冷冻时细胞损伤的主要原因：快速冷冻时细胞损伤的主要原因：在快速冷冻时，细胞内形成许多冰晶，在快速冷冻时，细胞内形成许多冰晶，冰晶作用于细胞膜，并使细胞膜上产生小孔，使得细胞膜不可冰晶作用于细胞膜，并使细胞膜上产生小孔，使得细胞膜不可逆地丧失其半透性逆地丧失其半透性第60页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(二二)冰晶的机械作用冰晶的机械作用降温过快或过慢，都会杀死细胞降温过快或过慢，都会杀死细胞在慢的降温速率下，细胞的低温损伤源于在慢的降温速率下，细胞的低温损伤源于“盐变性盐变性”在高降温速率下，细胞的低温损伤源于在高降温速率下，细胞的低温损伤源于“胞内冰胞内冰”细胞冰冻保存的最佳降温速率，应该是慢到足以防止细胞冰冻保存的最佳降温速率，应该是慢到足以防止“胞内冰胞内冰”，同时又快到使同时又快到使“盐变性盐变性”最小最小不同的细胞，由于细胞膜的生物特性不同，对最佳降温速不同的细胞，由于细胞膜的生物特性不同，对最佳降温速率的要求也不同。率的要求也不同。第61页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(三三)化学损伤化学损伤LevittLevitt提出：冷冻时，在细胞脱水和溶质浓缩过程中，蛋白提出：冷冻时，在细胞脱水和溶质浓缩过程中，蛋白质组分异常靠近，最终使蛋白质分子中巯基质组分异常靠近，最终使蛋白质分子中巯基(SH)(SH)和二硫键和二硫键(SS)(SS)发生相互不可逆的反应，形成新的化学键，导致蛋白质变性而引发生相互不可逆的反应，形成新的化学键，导致蛋白质变性而引起细胞死亡。起细胞死亡。第62页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(四四)细胞的融化反应细胞的融化反应细胞复融过程中的损伤：融化反应细胞复融过程中的损伤：融化反应尚不明确尚不明确第63页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 一、血细胞的低温损伤机制一、血细胞的低温损伤机制(四四)细胞的融化反应细胞的融化反应经验总结：经验总结：慢速冷冻的标本应慢速融化慢速冷冻的标本应慢速融化快速冷冻的标本则应采用快速融化的方法快速冷冻的标本则应采用快速融化的方法第64页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂冷冻保护剂可根据它们能否穿透细胞膜分为两种冷冻保护剂可根据它们能否穿透细胞膜分为两种 细胞内保护剂细胞内保护剂细胞外保护剂细胞外保护剂加入保护剂后，可降低溶加入保护剂后，可降低溶液的冰点，并增加未冻水液的冰点，并增加未冻水量量小分子小分子大分子大分子能自由地通过细胞膜能自由地通过细胞膜不能穿透细胞不能穿透细胞第65页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂胞内外盐数量一定胞内外盐数量一定未冻水量增加未冻水量增加盐的浓度降低盐的浓度降低使细胞处于盐浓度较低的环境中使细胞处于盐浓度较低的环境中第66页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 二、冷冻保护剂二、冷冻保护剂(二二)冷冻保护剂的种类冷冻保护剂的种类细胞内保护剂：甘油、细胞内保护剂：甘油、DMSODMSO、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、葡萄糖、乙二醇、丙三醇、甲醇、乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。乙醇、乙酸胺、甲酞胺等。细胞外保护剂：乳糖、麦芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮细胞外保护剂：乳糖、麦芽糖、木糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(PVP)、右旋糖酐、白蛋白、羟乙基淀粉（右旋糖酐、白蛋白、羟乙基淀粉（HESHES）、聚乙二醇（）、聚乙二醇（PEGPEG）、甘露醇等。）、甘露醇等。第67页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 三、低温血液保存与玻璃化三、低温血液保存与玻璃化玻璃化就是生物材料在由液态向固态转化过程中没有相变玻璃化就是生物材料在由液态向固态转化过程中没有相变热产生，也就是没有晶体生成。热产生，也就是没有晶体生成。有人认为冷却速率达到有人认为冷却速率达到10/10/秒，颗粒小于秒，颗粒小于5l0nm5l0nm就不会使生就不会使生物材料受到冷冻损伤，这就叫玻璃化。物材料受到冷冻损伤，这就叫玻璃化。第68页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 三、低温血液保存与玻璃化三、低温血液保存与玻璃化添加冷冻保护剂或快速冷冻生物材料的目的就是使生物材料添加冷冻保护剂或快速冷冻生物材料的目的就是使生物材料中的水处于容易达到玻璃化的状态。中的水处于容易达到玻璃化的状态。第69页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 四、红细胞甘油化、冷冻、融化和去甘油的方法四、红细胞甘油化、冷冻、融化和去甘油的方法高浓度甘油慢速冷冻高浓度甘油慢速冷冻低浓度甘油快速冷冻低浓度甘油快速冷冻解冻：慢速融化解冻：慢速融化去除甘油试剂可用糖液聚集法或去除甘油试剂可用糖液聚集法或不同浓度梯度氯化钠洗涤法不同浓度梯度氯化钠洗涤法解冻：快速融化解冻：快速融化去除甘油试剂可用不同浓度梯度去除甘油试剂可用不同浓度梯度氯化钠溶液，由高渗逐渐过渡到氯化钠溶液，由高渗逐渐过渡到等渗分次洗涤等渗分次洗涤第70页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻保存 五、冷冻红细胞的制备方法五、冷冻红细胞的制备方法在我国普遍使用在我国普遍使用高浓度甘油慢速冷冻高浓度甘油慢速冷冻 第71页，讲稿共98张，创作于星期三第四节第四节 血液的冷冻保存血液的冷冻