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方法方法验证与确认验证与确认主要内容主要内容方法验证的重要性方法验证的一般原则方法验证的内容方法确认和再验证文件要求2010版版GMP第十二条 质量控制的基本要求（四）检验方法应经过验证或确认第二百二十三条 检验 2.符合下列情形之一的，应对检验方法进行验证：（1）采用新的检验方法；（2）检验方法需变更的；（3）采用中华人民共和国药典及其它法标准未收载的检验方法；（4）法规规定的其它需要验证的检验方法。3.对不需要进行验证的检验方法，企业应对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。概述概述定义定义：方法验证就是根据检验项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的实验来验证所采用的分析方法是否符合检验项目的要求。目的目的：证明采用的分析方法科学、合理，符合检验要求并能有效控制药品的内在质量药品标准的建立和执行需要经验证的检验方法工艺过程的监控需要经验证检验方法药品的商业交换需要经验证的检验方法药品生产验证需要经验证的检验方法重要意义重要意义一般原则一般原则原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。外观、崩解时限、密度、重量、pH值、灰分、装量不需进行方法验证。方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的特点确定。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。方法验证的内容方法验证的内容 先决条件仪器：校正人员：培训、熟练材料：试剂、器具参照品：来源稳定性：试剂、溶液方法验证涉及的三个主要方面分析方法需要验证的检测项目 验证内容 方法验证的内容方法验证的内容 分析方法分析方法定义 分析方法是为完成检验项目而设定和建立的测试方法，它详细描述了完成分析检验的每一步骤。分析方法原理 仪器及仪器参数 试剂、对照品、供试品的制备 测定法 计算公式及检测限度类型法定分析方法替代分析方法稳定性批示分析分析方法分析方法需验证的检测项目需验证的检测项目鉴别：判定被分析物是目标化合物杂质检查：控制主成分以外的杂质 定量 限度定量测定：含量、制剂的溶出度等其它特定检测项目：粒径分布、旋光度、分子量分布等验证内容验证内容耐用性定量限检测限精密度准确度范围线性专属性表 1 检验项目和验证内容 鉴别杂质测定含量及溶出量测定定量限度准确度-+-+精密度重复性-+-+中间精密度-+-+专属性+检测限-+-定量限-+-线性-+-+范围-+-+耐用性+一、准确度一、准确度一、准确度一、准确度定义：指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。通常用回收率表示要求：在规定的范围内建立 通常至少用9个测定结果进行评估 报告已知加入量的回收率或测定结果平均值与 真实值之差及其相对标准偏差二、精密度二、精密度二、精密度二、精密度定义：指在规定的测试条件下，同一均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差、标准偏差、相对标准偏差表示可从三个层次考虑：重复性 中间精密度 重现性图图1 1 精密度与准确度关系图精密度与准确度关系图重复性重复性重复性重复性定义：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。方法1：在规定范围内，至少用9次测定结果进行评价。方法2：将相当于100%浓度水平的供试品溶液，用至少6次的测定结果进行评价。中间精密度中间精密度中间精密度中间精密度定义：在同一个实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定的结果之间的精密度。目的：为考察随机变动因素对精密度的影响表2 中间精密度设计方案实验123456日期123456分析人员ABABAB仪器MNNMMN色谱柱TUUTUT重现性重现性重现性重现性定义：在不同实验室之间由不同分析人员测定结果之间的精密度称为重现性。需进行重现性实验的情况：分析方法将被法定标准采用时 在不同实验室进行方法转移时三、专属性三、专属性三、专属性三、专属性定义：指在其他成分可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别、杂质检查、含量测定均应考察专属性。如一种方法不够专属，可用其它分析方法补充。四、检测限四、检测限四、检测限四、检测限定义：指试样中的被分析物能够被检测出的最低量。方法一：非仪器目测法（用于已知浓度被测物）方法二：信噪比法（用于能显示基线噪音方法）已知低浓度被测物的信号已知低浓度被测物的信号 3 2 空白样品的信号空白样品的信号 1 1方法三：ICH（根据响应值的标准偏差和斜率）检测限度检测限度 =3.3/s ：响应值的标准偏差（通过空白样品测背景响应值或Y轴截距）s：校正曲线的斜率（通过被测物的校正曲线求得）=或五、定量限五、定量限五、定量限五、定量限定义：指试样中的被分析物能够被测定的最低量，其测定结果应具有一定的准确度和精密度。方法一：直观评价（在准确度和精密度符合要求的前提下，能测得的最小量）方法二：根据信噪比（用于有基线噪音的方法）已知低浓度被测物的信号已知低浓度被测物的信号 10 空白样品的信号空白样品的信号 1 方法三：ICH（根据响应值和斜率的标准偏差）定量限度定量限度 =10/s=六、线性六、线性六、线性六、线性定义：指在设计的测定范围内，检测结果与试样中被测物的浓度直接呈正比关系的程度。标准储备液标准储备液 至少至少5个浓度系列个浓度系列 （设计范围内）（设计范围内）采集信号采集信号 测定测定统计（回归方程，相关系数，线性图）统计（回归方程，相关系数，线性图）七、范围七、范围七、范围七、范围定义：指能够达到一定的精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限度或量的区间。最小的规定范围：对原料药或制剂的含量测定：80120%对含量均匀度：70 130%对溶出度：规定值的20%对杂质检查：根据初测拟定为规定限度的20%同时测含量和杂质：下限为杂质规定限度的20%上限为含量限度的+20%八、耐用性八、耐用性八、耐用性八、耐用性定义：测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于常规检验提供依据。典型例子：供试液的稳定性 萃取时间 在HPLC中：流动相的pH值的变化 流动相组分的不同 柱子不同（不同批号和供应商）温度不同 流速不同 在GC中：不同柱子（不同批号和供应商）温度不同 流速不同如分析方法对分析参数变化是敏感的，则该分析参数就应适当控制或在方法中注明。方法确认方法确认适用于药典方法和其他已验证的法定标准。证明方法在该实验室条件下的适应性，确保检验数据准确、可靠“方法确认事实上是一种简化了的方法验证，方法确认应进行准确度、系统重复性、分析重复性、专属性测试，操作及限度要求同方法验证。对于特殊检验方法，确认项目及限度可作适当调整，以确认草案为准。”方法再验证方法再验证何时需进行再验证？原料药生产工艺必变时制剂处方、药品组分改变时分析方法发生改变时原则根据改变的程度进行相应的再验证。文件管理流程文件管理流程新方法/需改变的方法验证方案起草验证方案批准进行方法验证评估检验结果起草验证报告批准验证报告方法改进不符合要求符合要求The EndThank you!